Celulas dendriticas que se han pulsado con un farmaco de mejora del metabolismo oseo basado en bisfosfonato.

Fármaco de células dendríticas que contienen células dendríticas, procedimiento terapéutico usando la célula dendrítica y procedimiento de cultivar células T gamma delta 5

Antecedentes de la invención

Campo de la técnica

La presente invención se refiere a células dendríticas pulsadas con fármacos de mejora del metabolismo óseo basados en bisfosfonatos (en lo sucesivo denominados bisfosfonatos) . La presente invención también se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden dichas células dendríticas, usos en procedimientos terapéuticos y procedimientos de cultivo de células T γδ que usan dichas células dendríticas.

15 Antecedentes técnicos

Las células dendríticas funcionan como células presentadoras de antígeno para presentar antígenos, mediante fagocitosis y fragmentación, como epítopos antigénicos sobre las moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) en su superficie celular. Cuando las células dendríticas entran en contacto con los linfocitos T en un ganglio linfático, las células T reconocen estos epítopos antigénicos.

En las células T, hay células T αβ que expresan receptores de las células T αβ y células T γδ que expresan receptores de células T γδ. Las células T αβ asumen principalmente la responsabilidad de la inmunidad adquirida, mientras que las células γδ funcionan como células efectoras para las respuestas inmunitarias a infecciones bacterianas concretas, tales como tuberculosis, así como tumores, y asumen principalmente la responsabilidad de la inmunidad natural.

Recientemente se ha descubierto que las células T γδ también tienen actividad citotóxica contra las células cancerosas, lo que atrae la atención sobre el desarrollo de inmunoterapia usando la potente actividad antitumoral poseída por las células T γδ. No obstante, la gran mayoría de las células T que generalmente están presentes en la sangre son células T αβ; las células T γδ representan un simple 1-5 %. De acuerdo con esto, como procedimiento para proliferar las células T γδ, las células T γδ que se separan usando imanes y similares se cultivan n Vitro y devuelven al cuerpo.

Se sabe que las células T γδ también son activadas y/o proliferadas por antígenos no peptídicos; se sabe que son activadas y/o proliferadas por alcaloides, tales como alquilaminas, así como monoésteres de pirofosfato y bisfosfonatos.

Por encima de todo, en varios estudios se han considerado los procedimientos para cultivar células T γδ in Vitro usando bisfosfonatos, pero no han podido producir un número suficiente de células T γδ. Un intento para obtener un número suficiente de células T γδ adecuadas para un tratamiento implicó un incremento de la cantidad de sangre obtenida de un paciente, que también aumentó la carga impuesta sobre el paciente. De acuerdo con esto, existe la necesidad de establecer una técnica para obtener fácilmente un número suficiente de células T γδ no solo in vitro sino también in vivo.

Sumario de la invención

La presente invención se creó a la luz de las circunstancias mencionadas anteriormente para proporcionar células dendríticas capaces de activar y/o proliferar con eficacia las células T γδ in vivo y/o in vitro, composiciones farmacéuticas que comprenden dichas células dendríticas, el uso de las composiciones farmacéuticas en procedimientos terapéuticos y procedimientos de cultivo de células T γδ usando dichas células dendríticas.

Como resultado de la investigación en la resolución de los problemas mencionados anteriormente, los inventores han encontrado que las células T γδ pueden ser activadas y/o proliferadas usando células dendríticas, que 55 normalmente se usan para la inducción de CTL, pulsadas con bisfosfonatos, en lugar de estimular directamente las células T γδ con bisfosfonatos. Además, los inventores descubrieron que, al contrario que el caso de inducir células T αβ específicas de antígeno usando un péptido antigénico de la enfermedad, las células T

La presente invención permite la proliferación fácil de células T γδ sin imponer una carga sobre un paciente, lo que conduce a aplicaciones prácticas de terapias celulares inmunitarias que usan células T γδ.

La presente invención se describe a continuación.

(1) Las células dendríticas que se han pulsado con un bisfosfonato; 65 (2) Las células dendríticas de dicho (1) , en las que las células dendríticas son células dendríticas inmaduras.

(3) Las células dendríticas de dicho (1) o (2) , en lasque dicho bisfosfonato es uno cualquiera de ácido pamidrónico, ácido alendrónico, ácido zoledrónico, ácido risedrónico, ácido ibandrónico, ácido incadrónico, ácido etidrónico, sus sales y/o sus hidratos.

(4) Una composición farmacéutica que comprende las células dendríticas pulsadas con un bisfosfonato;

(5) La composición farmacéutica de dicho (4) , en la que dichas células dendríticas son células dendríticas inmaduras;

(6) Las composición farmacéutica de dicho (4) o (5) , en la que dicho bisfosfonato es uno cualquiera de ácido pamidrónico, ácido alendrónico, ácido zoledrónico, ácido risedrónico, ácido ibandrónico, ácido incadrónico, ácido etidrónico, sus sales y/o sus hidratos.

(7) Las células dendríticas pulsadas con un bisfosfonato; para uso en un procedimiento terapéutico; 15

(8) Las células dendríticas de dicho (7) , en las que las células dendríticas son células dendríticas inmaduras.

(9) Las células dendríticas de dicho (7) o (8) , en lasque dicho bisfosfonato es uno cualquiera de ácido pamidrónico, ácido alendrónico, ácido zoledrónico, ácido risedrónico, ácido inabdrónico, ácido incadrónico, ácido etiderónico, sus sales y/o sus hidratos.

(10) Las células dendríticas de cualquiera de dichos (7) - (9) , en lasque el procedimiento terapéutico para tratar cánceres y/o enfermedades infecciosas;

(11) Las células dendríticas de cualquiera de dichos (7) - (10) , en la que dichas células dendríticas son autólogas;

(12) Un procedimiento de cultivo de células γδ, en el que se añaden las células dendríticas pulsadas con un bisfosfonato.

(13) El procedimiento de cultivo de células T de dicho (12) , en el que dichas células dendríticas son células dendríticas inmaduras;

y 35

(14) El procedimiento de cultivo de las células T γδ (¡2) o (13) , en el que dicho bisfosfonato es uno cualquiera de ácido pamidrónico, ácido alendrónico, ácido zoledrónico, ácido risedrónico, ácido inabdrónico, ácido incadrónico, ácido etiderónico, sus sales y/o sus hidratos.

Breve descripción de las figuras

La FIG. 1 muestra los resultados del ejemplo 3. Los controles (células dendríticas no pulsadas con un bisfosfonato) , células dendríticas pulsadas Aredia, Onclast y Zometa, se cocultivaron respectivamente con las células reaccionadas. Se muestra el número de células medido siete días después usando un hemocitómetro, la proporción 45 de las células T γδ medida usando un citómetro de flujo y el número de células T γδ calculado a partir de las dos cifras.

La FIG. 2 muestra los resultados del Ejemplo 5. La ordenada indica el número de puntos y la abscisa indica la intensidad de los puntos. Como controles negativos se muestran el IFN-γ producir por las células T γδ solas; las células T γδ y Aredia y las células dendríticas solas.

Mejor modo de la invención

(1) Primera realización: Preparación de las células dendríticas de la invención 55 Las células dendríticas de la invención se explicarán con detalle primero.

Las células dendríticas de la presente invención se refieren a células dendríticas que se han pulsado con un bisfosfonato.

Como las células dendríticas de la invención, se pueden usar las células dendríticas inmaduras, las células dendríticas maduras o la mezcla de ambas. No obstante, es preferible usar células dendríticas inmaduras, ya que son capaces de activar y/o proliferar más adecuadamente células T γδ.

65 Además, se puede usar cualquier bisfosfonato siempre que... [Seguir leyendo]

1. Células dendríticas que se han pulsado con un fármaco de mejora del metabolismo óseo basado en bisfosfonato.

2. Una composición farmacéutica que comprende células dendríticas pulsadas con un fármaco de mejora del metabolismo óseo basado en bisfosfonato.

3. Las células dendríticas pulsadas con un fármaco que mejora el metabolismo óseo basado en bisfosfonato para uso en un procedimiento terapéutico; 10

4. Las células dendríticas de cualquiera de dichos (3) - (9) , en lasque el procedimiento terapéutico para tratar cánceres y/o enfermedades infecciosas;

5. Uso de las células dendríticas de la reivindicación 1 en la fabricación de un medicamento para tratar cánceres y/o 15 enfermedades infecciosas.

6. Las células dendríticas de la reivindicación 3 o 4 o el uso de la reivindicación 5 en el que dichas células dendríticas son autólogas.

7. Un procedimiento de cultivo de células T γδ que comprende añadir células dendríticas pulsadas con un fármaco de mejora del metabolismo óseo basado en bisfosfonato.

8. Las células dendríticas de las reivindicaciones 1, 3, 4 o 6; la composición farmacéutica de la reivindicación 2; el uso de las reivindicaciones 5 o 6 o el procedimiento de cultivo de las células T γδ de la reivindicación 7, en el que 25 dichas células dendríticas son células dendríticas inmaduras.

9. Las células dendríticas de las reivindicaciones 1, 3, 4, 6 u 8; la composición farmacéutica de la reivindicación 2; el uso de las reivindicaciones 5, 6 u 8 o el procedimiento de cultivo de las células T γδ de la reivindicación 7 u 8, en el que dicho fármaco de mejora del metabolismo óseo basado en bisfosfonato es uno cualquiera de ácido pamidrónico, ácido alendrónico, ácido zoledrónico, ácido risedrónico, ácido inabdrónico, ácido incadrónico, ácido etiderónico, sus sales y/o sus hidratos.