Procedimiento de fabricación de un medicamento "factor de transferencia",

que tiene efectos terapéuticosbasados especialmente en la normalización del sistema inmunitario del donante y que contiene un complejo y unacombinación de sustancias biológicamente activas que tienen un PM inferior a 10.000, con al menos 200 actividadesbiológicas incluyendo factores de transferencia en la sangre de donantes, ya que son particularmente precursores dela maduración y activación de células, caracterizado porque implica las siguientes etapas consecutivas en orden:

1) preparación de homogeneizado leucocitario

2) diálisis o ultrafiltración

3) concentración mediante liofilización

4) preparación de una solución médica bruta

5) ensayos interoperativos

6) homogeneización

7) prefiltración

8) ultrafiltración

9) filtración estéril

10) pasteurización

11) relleno en ampollas y

12) liofilización.

Procedimiento de fabricación de un medicamento factor de transferencia

Campo técnico

Solución técnica que cubre la fabricación farmacéutica de un medicamento llamado "factor de transferencia".

Antecedentes de la técnica

En los años 50 y 60 del siglo XX, se describió un mecanismo de inmunidad celular (inmunidad mediada por células) así como el mecanismo de este tipo de transporte de inmunidad, el factor de transferencia. El factor de transferencia representa en sí una mezcla de sustancias de peso molecular relativo menor de 10.000 que no contiene antígenos de transplante. Este factor de transferencia puede mediar también la transferencia entre especies de inmunidad celular, y este fenómeno puede usarse en la terapia de enfermedades ligadas al sistema inmunitario, especialmente a su parte linfocítica, particularmente de linfocitos T.

Es bien conocido que el factor de transferencia puede obtenerse mediante diferentes procedimientos, siendo la diálisis o ultrafiltración los más frecuentes de ellos. El medicamento "factor de transferencia" es un dializado o ultrafiltrado de mezcla de leucocitos periféricos obtenida a partir de donantes sanos que se han ensayado y encontrado no reactivos frente a VIH 1+2, HCV, HBsAg y lúes. Los exámenes anti-VIH 1+2, anti-HCV y anti-HBsAg apropiados se efectúan en cada muestra de sangre al menos dos veces. Se examina una vez cada sangre de un donante individual, a continuación la sangre obtenida a partir de 10 donantes diferentes. Estos exámenes se efectúan mediante un procedimiento que sea aceptado actualmente por las autoridades legales locales. La muestra examinada no debe mostrar reactividad que pudiera considerarse positiva en el procedimiento usado. El examen de sífilis se efectúa siempre en cada muestreo por al menos un ensayo, idealmente por un ensayo combinado no específico (cardiolipina) y específico (treponema) . La muestra ensayada no debe mostrar reactividad considerada positiva.

Sumario de la invención

La presente divulgación, que comprende la presente invención, proporciona un procedimiento de fabricación del medicamento "factor de transferencia", que tiene efectos terapéuticos basados en la normalización del sistema inmunitario del donante y que contiene un complejo y una combinación de sustancias de bajo peso molecular biológicamente activas que tienen PM menores de 10.000 con al menos 200 actividades biológicas, incluyendo factores de transferencia en sangre de donantes, ya que son precursores de la maduración y activación de células, fabricado según la reivindicación 1.

El perfil molecular del factor de transferencia se determina mediante cromatografía líquida de alta resolución (alta presión) y moderada a condición de: un flujo isocrático, una columna adecuada para cromatografía en gel con un tamaño óptimo de partícula de aprox. 5 µm y poros de aprox. 12, 5 nm de tamaño y patrones de peso molecular adecuados, por ejemplo, albúmina bovina, ribonucleasa, ácido p-aminobenzoico.

El efecto terapéutico del factor de transferencia está basado especialmente en la normalización del sistema inmunitario del donante. El efecto clínico del factor de transferencia procede del grupo de sustancias contenido en el medicamento, su forma de fabricación y uso, no solo es función de los compuestos biológicos puros. El fármaco aprovecha tanto los rasgos farmacodinámicos no específicos del producto como la posible especificidad antigénica particular (un factor de transferencia específico) . El uso de factor de transferencia representa en sí un ejemplo de la denominada "terapia de información" basada en una señal seleccionada insertada en el cuerpo que se amplifica dentro del cuerpo cambiando su actividad, concretamente, el modo de responder a una enfermedad particular.

Se usa como fase móvil tampón fosfato a pH 6, 5-7, 5, temperatura constante de 25ºC o 30ºC (± 2ºC) , longitud de onda de 260 nm, duración del proceso de aprox. 20-30 min y volumen de muestra usado de aprox. 20 µl.

Tanto las valoraciones cualitativas como cuantitativas del factor de transferencia se basan en la determinación del peso molecular aproximado de las fracciones individuales usando los tiempos de retención de picos de áreas particulares. La descripción del fármaco conduce a la conclusión de que este análisis no debe probar la participación de una parte de más de un 1% que tenga un peso molecular relativo mayor de 10.000. Ventajosamente, la medicación puede contener una proporción de partes de peso molecular relativo de aprox. 2000-6000 correspondiente a un 65-95%, siendo la de peso molecular relativo de aprox. 1000-2000 de 10-30% o mayor. Resulta más ventajoso si el medicamento contiene menos de un 10% de compuestos de peso molecular relativo menor de aprox. 1000. Se entiende siempre que los contenidos expresados como porcentaje significan el valor en volumen.

El medicamento se fabrica en forma liofilizada. El factor de transferencia liofilizado es una sustancia ligeramente amarillenta-blanca con consistencia de polvo a esponja. Al disolverse en agua, aparece un fluido puro ligeramente amarillento o amarillento. Una dosis de producto, pretendida para una administración terapéutica, representa la cantidad de sustancias biológicamente activas derivadas de aprox. 200 millones de leucocitos. El medicamento no contiene conservantes antimicrobianos. La esterilidad del fármaco está basada solo en su fabricación aséptica. El procedimiento de fabricación implica las siguientes etapas: a) ajuste del homogeneizado leucocitario b) diálisis o ultrafiltración c) concentración mediante liofilización d) preparación de la solución médica bruta e) ensayos interoperativos f) homogeneización g) prefiltración h) ultrafiltración i) filtración de esterilización j) pasteurización térmica k) relleno en ampollas y acabado l) liofilización a) Preparación de homogeneizado leucocitario: Se transportan los concentrados leucocitarios obtenidos de donantes particulares y se almacenan en estado congelado. En cuanto se descongela a +37ºC, se combina el material bruto originario de donantes separados para conseguir un mayor volumen. El procedimiento debe efectuarse en zonas de fabricación de pureza ambiental definida. Como la siguiente etapa, se lisan todos los componentes de membrana mediante congelación y descongelación repetidas, en algunos casos mediante destrucción celular por ultrasonidos o ambos enfoques combinados.

Preparación del homogeneizado usando el procedimiento de congelación-descongelación: Se efectúa la congelación en baño de alcohol desnaturalizado a una temperatura de al menos -35ºC usando dispositivos de congelación rotativos. Se efectúa la descongelación en un baño de agua a no más de +37ºC. Se repite 6 veces el ciclo completo de congelación-descongelación. Después del 6º ciclo, se lleva el homogeneizado en los frascos originales a una cámara de congelación fijada al menos a -17ºC hasta el siguiente procedimiento. Preparación del homogeneizado usando el procedimiento de ultrasonidos: Después de la descongelación, se obtiene un homogeneizado leucocitario mediante destrucción ultrasónica de células a 20 kHz durante 10 minutos a una temperatura de +2ºC-+8ºC. Después de esta disgregación, se almacena el homogeneizado obtenido en cámara de congelación a menos de -17ºC hasta la siguiente descongelación.

Preparación de homogeneizado usando el procedimiento combinado: Es un procedimiento alternativo de homogeneización de leucocitos un procedimiento combinado. El ciclo de congelación y descongelación se repite 5 veces sucesivamente con disgregación ultrasónica a 20 kHz durante 3 minutos a una temperatura de +2ºC-+8ºC. Después de esta disgregación, se pone el homogeneizado en una cámara de congelación a no más de -17ºC hasta el siguiente procedimiento.

Ninguna de las temperaturas usadas en esta etapa de producción debe variar con una amplitud mayor de 30ºC

arriba y abajo y la variación no debería durar más de varios minutos. Durante la preparación de homogeneizado leucocitario originado mediante el mezclado de concentrados leucocitarios separados (obtenidos de donantes particulares en unidades de transfusión) , se mezclan conjuntamente concentrados leucocitarios en un homogeneizado después de su descongelación (véase la descripción de fabricación descrita anteriormente) . Se destruye entonces la sustancia, resultando biológicamente inerte, y no apareciendo interacción entre las sustancias obtenidas de diferentes donantes. Puede encontrarse una interacción indeseada entre las... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento de fabricación de un medicamento "factor de transferencia", que tiene efectos terapéuticos basados especialmente en la normalización del sistema inmunitario del donante y que contiene un complejo y una combinación de sustancias biológicamente activas que tienen un PM inferior a 10.000, con al menos 200 actividades biológicas incluyendo factores de transferencia en la sangre de donantes, ya que son particularmente precursores de la maduración y activación de células, caracterizado porque implica las siguientes etapas consecutivas en orden:

1) preparación de homogeneizado leucocitario 2) diálisis o ultrafiltración 3) concentración mediante liofilización 4) preparación de una solución médica bruta 5) ensayos interoperativos 6) homogeneización 7) prefiltración 8) ultrafiltración 9) filtración estéril 10) pasteurización 11) relleno en ampollas y 12) liofilización.

2. Procedimiento de fabricación del medicamento "factor de transferencia" según la reivindicación 1, en el que el homogeneizado leucocitario se prepara mediante congelación, descongelación, ultrasonidos o una combinación de los mismos de concentrado leucocitario humano obtenido a partir de donantes individuales combinados.

3. Procedimiento de fabricación del medicamento "factor de transferencia" según las reivindicaciones 1 y 2, en el que la temperatura del proceso de fabricación en cada etapa de fabricación consecutiva se regula para no superar los 37ºC, excepto para la pasteurización.

4. Procedimiento de fabricación del medicamento "factor de transferencia" según las reivindicaciones 1-3, en el que la etapa de fabricación "diálisis" se lleva a cabo con el uso de una unidad de diálisis comercial que retiene las sustancias de PM mayor de 10.000.

5. Procedimiento de fabricación del medicamento "factor de transferencia" según las reivindicaciones 1-3, en el que la etapa de fabricación "diálisis" puede reemplazarse ventajosamente por ultrafiltración.

6. Procedimiento de fabricación del medicamento "factor de transferencia" según las reivindicaciones 1-4, en el que el dializado obtenido se rellena a 0, 2 l antes de concentración por liofilización y se congela a -30ºC y temperaturas menores, se concentra entonces en liofilizador durant.

2. 30 horas a una temperatura del material de cómo máximo 30ºC hasta que el material es semiseco o semilíquido.

7. Procedimiento de fabricación del medicamento "factor de transferencia" según las reivindicaciones 1-4, en el que el dializado obtenido se rellena a 0, 2 l y se almacena a -17ºC y temperaturas menores hasta el siguiente procesamiento.

8. Procedimiento de fabricación del medicamento "factor de transferencia" según las reivindicaciones 1-5 y 7, en el que la solución bruta se prepara mediante disolución cuantitativa del concentrado en agua para inyecciones "WFI" inmediatamente después de la concentración, de modo que 1, 5 ml de preparación contengan una dosis, que es una dosis terapéutica que contiene la cantidad de sustancias de bajo PM obtenida procesando 2 x 108 leucocitos.

9. Procedimiento de fabricación del medicamento "factor de transferencia" según la reivindicación 8, en el que la solución bruta no se procesa inmediatamente después de la disolución en WFI, sino que se almacena en frascos de 0, 5 l de volumen a -17ºC y temperaturas menores durante como máximo 12 meses hasta el siguiente procesamiento.

10. Procedimiento de fabricación del medicamento "factor de transferencia" según las reivindicaciones 1-9, en el que se obtiene una dosis terapéutica del medicamento bruto a partir de leucocitos cuya cantidad oscila entre 1x106 y 1x109.

11. Procedimiento de fabricación del medicamento "factor de transferencia" según las reivindicaciones 1 a 10, en el que la filtración de esterilización se realiza usando un filtro desechable con un diámetro de poro máximo de 0, 22 µm y la esterilidad del medicamento se asegura mediante fabricación aséptica sin adición de conservantes antimicrobianos.

12. Procedimiento de fabricación del medicamento "factor de transferencia" según las reivindicaciones 1-11, en el que se somete a inactivación térmica por pasteurización en baño de agua a 60ºC durante 10 horas.

13. Procedimiento de fabricación del medicamento "factor de transferencia" según las reivindicaciones 1-12, en el que el periodo de secado de la liofilización no es menor de 10 horas ni mayor de 60 horas.