Dispositivo multipozo.

Un conjunto de placa multipozo que tiene una placa de pozos con una pluralidad de pozos abiertos hacia arriba(38),

una placa (14) de inserción encajada a dicha placa (12) de pozos, teniendo dicha placa (14) de inserción unapared (48) superior para cubrir sustancialmente todos dichos pozos (38) de dicha placa (12) de pozos, estandoformada dicha pared (48) superior con una pluralidad de insertos (64) alineados respectivamente con dichos pozos(38), teniendo cada uno de dichos insertos (64) una pared (66) lateral que sobresale hacia abajo desde dicha pared(48) superior y una pluralidad de orificios (80) de acceso alineados respectivamente con dichos pozos (38),incluyendo dicho orificio (80) de acceso una primera poción formada a través de dicha pared (48) superior y unasegunda porción que define una muesca (76) formada en dicha pared (66) lateral de dicho inserto (64) adyacente adicha pared (48) superior de dicha placa (14) de inserción,

caracterizado porque

cada uno de dichos pozos (38) tiene una sección transversal sustancialmente cuadrada definiendo unos pares deparedes (34, 36) adyacentes unos pares de esquinas opuestas en cada uno de dichos pozos (38), estando dichoinserto (64) sustancialmente encajado en uno de dichas esquinas de dicho pozo (38) y siendo cada uno de dichosorificios (80) de acceso adyacente a una esquina de dicho pozo (38) opuesta a dicha esquina en la que estáencajada dicha pared (66) lateral de inserto.

Dispositivo multipozo.

1. Campo de la técnica La invención se refiere a un conjunto de placas de celdas para el cultivo de células o tejidos in vitro e incluye insertos para soportar células o cultivos de tejidos en un medio fluido que contiene nutrientes para promover el crecimiento de los cultivos de células o tejidos.

2. Descripción de la técnica relacionada Los conjuntos de placa multipozo se han desarrollado para hacer crecer cultivos de células o de tejido in Vitro. El conjunto de placa de pozos típico incluye una placa de pozos con una pluralidad de pozos para contener un medio fluido que tiene los nutrientes para promover el crecimiento del cultivo de células o tejidos. El conjunto de placa de pozos incluye además una placa de inserción configurada para encajar en la placa de pozos. La placa de inserción incluye insertos, cada uno de los cuales tiene una parte superior abierta y una parte inferior abierta. Una membrana porosa se extiende a través de la parte inferior abierta del inserto y está formada a partir de un material que permite la difusión y transporte de iones y macromoléculas a través de la membrana. El inserto se extiende suficientemente dentro del pozo como para comunicar con el medio fluido rico en nutrientes del pozo. Por tanto, se puede fijar una capa de células a la membrana y hacerla crecer, recibiendo los nutrientes a través de la membrana microporosa del medio fluido en el pozo.

Se debe acceder a los pozos periódicamente para añadir o quitar fluido. Este acceso se consigue típicamente por medio de orificios de acceso que se extienden a través de la pared superior de la placa de inserción en posiciones que están alineadas con los pozos respectivos. Los orificios de acceso están dimensionados para recibir pipetas de modo que el nivel del medio fluido del pozo se pueda ajustar o de modo que se puedan aspirar porciones del medio antiguo sin extraer la placa de inserción y sin contactar con el cultivo de células o tejidos que se está haciendo crecer sobre la membrana del inserto. Ejemplos de conjuntos de placa multipozo se muestran, por ejemplo, en la patente US 5, 652, 142, la patente US 5, 801, 055 y la patente US 5, 972, 694.

Los conjuntos de placa multipozo se fabrican típicamente con unas ciertas dimensiones externas estándar y con un cierto número de pozos estándar para asegurar su compatibilidad con el equipamiento de laboratorio. Un estándar industrial incluye 96 pozos dispuestos en una matriz rectangular de 8x12. El equipamiento de laboratorio incluye dispositivos robóticos de pipeta para entrar automáticamente en los orificios de acceso de la placa de inserción para ajustar el nivel de fluido en los pozos respectivos. El diseño de los conjuntos de placa multipozo debería facilitar la inserción robotizada de las pipetas en el orificio de acceso. Por tanto, tanto los insertos como los orificios de acceso deberían ser lo más grande posible sin exceder el espaciado necesario de los pozos entre un centro y otro y sin permitir la contaminación entre los cultivos de célula o tejidos que se están cultivando en los insertos y las pipetas que se insertan a través de los orificios de acceso.

COMPENDIO DE LA INVENCIÓN La invención es un conjunto de placa multipozo que comprende una placa de pozos y una placa de inserción. La placa de pozos incluye un faldón sustancialmente rectangular con paredes laterales opuestas y sustancialmente paralelas y paredes de extremo opuestas y sustancialmente paralelas que se extienden en perpendicular entre las paredes laterales. Una esquina situada entre una de las paredes de extremo y al menos una de las paredes laterales puede estar truncada para permitir una orientación direccional requerida para el conjunto de la placa de inserción y la placa de pozos, y por tanto para evitar así la contaminación cruzada si la placa de inserción se extrae y se sustituye. La placa de pozos incluye además una pluralidad de paredes longitudinales igualmente espaciadas que se extienden ortogonalmente entre las paredes de extremo del faldón periférico y en paralelo a las paredes laterales del faldón periférico. La placa de pozos incluye además una pluralidad de paredes transversales igualmente espaciadas que se extienden ortogonalmente entre las paredes laterales del faldón periférico y sustancialmente en paralelo a las paredes de extremo del faldón periférico. Las paredes longitudinales y las paredes transversales definen una matriz rectangular de pozos sustancialmente cuadrados en la placa de pozos. Cada pozo tiene una pared inferior que intersecciona con las respectivas paredes longitudinales y paredes transversales del pozo respectivo. Las paredes inferiores preferiblemente no son perpendiculares a las paredes longitudinales y las paredes transversales del pozo respectivo. Más bien, las paredes inferiores están inclinadas según una diagonal de los pozos respectivos de modo que cada pozo tiene una esquina profunda y una esquina menos profunda. En una realización preferida, según se describe más adelante, la placa de pozos define una matriz rectangular de 8x12 con un total de 96 pozos.

La placa de inserción incluye una pared superior sustancialmente rectangular y un faldón periférico que pende hacia abajo desde la pared superior. El faldón periférico de la placa de inserción está definido por un par de paredes laterales paralelas y un par de paredes de extremo paralelas que se extienden en perpendicular entre las paredes laterales. El faldón periférico de la placa de inserción está dimensionado para encajar holgadamente encima del faldón periférico de la placa de pozos. Un reborde de esquina está formado junto al menos una esquina definida en una pared de extremo del faldón periférico de la placa de inserción. El reborde de esquina está dimensionado para acoplarse a la esquina truncada de la placa de pozos para asegurar una única orientación direccional posible de la placa de inserción en la placa de pozos.

La placa de inserción incluye además una matriz rectangular de insertos en posiciones que se alinearán con los pozos respectivos cuando la placa de inserción se acople sobre la placa de pozos. Cada inserto incluye una pared lateral con una parte superior abierta en la pared superior de la placa de inserción y una parte inferior separada de la pared superior de la placa de inserción una distancia menor que la profundidad mínima del pozo correspondiente. Por tanto, cada inserto estará separado una determinada distancia por encima de la pared inferior del pozo respectivo cuando la placa de inserción se acopla adecuadamente sobre la placa de pozos. Una lámina de material poroso se fija sobre la parte inferior de cada inserto. El material poroso puede ser cualquiera de los materiales porosos utilizados en insertos para cultivos de célula familiares para los expertos en la materia.

La pared lateral de cada inserto puede tener una forma generalmente troncocónica que se estrecha de modo que la parte superior abierta tiene una sección transversal mayor que la parte inferior de cada inserto. Adicionalmente, cada inserto puede estar dispuesto de manera que sea aproximadamente tangente a una pared longitudinal y una pared transversal del pozo respectivo. En consecuencia, una parte superior de sección transversal grande de la pared lateral del inserto se acopla efectivamente en la esquina del pozo cuadrado correspondiente. Sin embargo, las porciones inferiores de cada pared lateral troncocónica están separadas de la pared de la célula para evitar el efecto de mecha del medio fluido. Preferiblemente, cada inserto está cerca de la esquina poco profunda del pozo correspondiente. La pared lateral de cada inserto no es perfectamente troncocónica. En particular, cada inserto incluye una muesca en la pared lateral en una posición diagonalmente opuesta a la esquina del pozo respectivo en al que se acoplará el inserto. Adicionalmente, la pared lateral preferiblemente incluye una región convexa hacia dentro/cóncava hacia fuera que se extiende desde la muesca en dirección al extremo interior del inserto respectivo. La región convexa/cóncava preferiblemente tiene una altura que se reduce gradualmente en posiciones cercanas a la parte inferior del inserto respectivo, y preferiblemente tiene de manera efectiva una altura cero en el extremo inferior del inserto respectivo, de modo que la parte inferior del inserto respectivo puede ser sustancialmente circular. Para mayor eficiencia en el moldeo, la región internamente convexa/externamente cóncava puede tener una ligera pendiente en la misma dirección que la pared lateral, y la dimensión radial entre el eje del inserto respectivo y la región interiormente convexa del inserto puede aumentar en distancias más... [Seguir leyendo]

1. Un conjunto de placa multipozo que tiene una placa de pozos con una pluralidad de pozos abiertos hacia arriba (38) , una placa (14) de inserción encajada a dicha placa (12) de pozos, teniendo dicha placa (14) de inserción una pared (48) superior para cubrir sustancialmente todos dichos pozos (38) de dicha placa (12) de pozos, estando formada dicha pared (48) superior con una pluralidad de insertos (64) alineados respectivamente con dichos pozos (38) , teniendo cada uno de dichos insertos (64) una pared (66) lateral que sobresale hacia abajo desde dicha pared (48) superior y una pluralidad de orificios (80) de acceso alineados respectivamente con dichos pozos (38) , incluyendo dicho orificio (80) de acceso una primera poción formada a través de dicha pared (48) superior y una segunda porción que define una muesca (76) formada en dicha pared (66) lateral de dicho inserto (64) adyacente a dicha pared (48) superior de dicha placa (14) de inserción, caracterizado porque cada uno de dichos pozos (38) tiene una sección transversal sustancialmente cuadrada definiendo unos pares de paredes (34, 36) adyacentes unos pares de esquinas opuestas en cada uno de dichos pozos (38) , estando dicho inserto (64) sustancialmente encajado en uno de dichas esquinas de dicho pozo (38) y siendo cada uno de dichos orificios (80) de acceso adyacente a una esquina de dicho pozo (38) opuesta a dicha esquina en la que está encajada dicha pared (66) lateral de inserto.

2. El conjunto de placa multipozo de la reivindicación 1, que además comprende una cubierta (16) encajada sobre dicha placa (14) de inserción.

3. El conjunto de placa multipozo de la reivindicación 1, donde cada uno de dichos pozos (38) tiene una pared (40) inferior, y donde dicha pared (66) lateral de dicho inserto (46) está separada de dicha pared (40) inferior de dicho pozo (38) respectivo.

4. El conjunto de placa multipozo de la reivindicación 3, donde cada inserto (64) comprende además una membrana (72) porosa fijada a la parte inferior de dicha pared (66) lateral.

5. El conjunto de placa multipozo de la reivindicación 4, donde cada uno de dichos insertos (64) incluye una porción interiormente convexa y exteriormente cóncava alineada con dicha muesca (76) de dicho orificio (80) de acceso, donde se puede insertar una pipeta al menos parcialmente dentro de dicho orificio (80) de acceso y dicha porción exteriormente cóncava de dicha pared (66) lateral.

6. El conjunto de placa multipozo de la reivindicación 1, donde porciones de dicho orificio (80) de acceso formado sobre dicha pared (48) superior de dicha placa (14) de inserción están achaflanadas hacia abajo y hacia dentro en dirección a dicho pozo (38) respectivo.

7. El conjunto de placa multipozo de la reivindicación 6, donde porciones de dicho orificio (80) de acceso definidas por dicha muesca (76) están achaflanadas hacia abajo y hacia dentro en dicho pozo (38) respectivo.

8. El conjunto de placa multipozo de la reivindicación 3, donde dicha pared (66) lateral de dichos insertos (64) está dispuesta sustancialmente tangente a dos de dichas paredes (34, 36) adyacentes definiendo una de dichas esquinas de dicho pozo (38) respectivo.

9. El conjunto de placa multipozo de la reivindicación 8, donde cada uno de dichos orificios (80) de acceso está alineado sustancialmente tangente a dos de dichas paredes (34, 36) adyacentes que definen una de dichas esquinas de dicho pozo (38) opuesta a dicha esquina en la que está encajada dicha pared (66) lateral de dicho inserto (64) .

10. El conjunto de placa multipozo de la reivindicación 3, donde la pared inferior de cada uno de dichos pozos (38) está inclinada, de manera que dicho pozo (38) tiene una esquina profunda y una esquina poco profunda, estando encajado dicho inserto (64) en dicha esquina poco profunda de dicho pozo.

11. Un conjunto de placa multipozo que comprende:

una placa que tiene una superficie (48) superior y una pluralidad de componentes (12, 14) de pozo; teniendo cada uno de dichos componentes (12, 14) de pozo una porción (14) superior, una cámara (38) inferior, y una pared (66) lateral que se extiende entre dicha porción (14) superior y dicha cámara (38) inferior; teniendo dicha porción (14) superior una cámara (64) superior y separando una membrana (72) dicha cámara (64) superior de dicha cámara (38) inferior;

caracterizado porque dicha porción (14) superior tiene al menos dos orificios (80) de acceso que son adyacentes a una esquina de dicho pozo (38) opuesto a dicha esquina en la que está encajada dicha pared lateral del inserto, de modo que dichos orificios (80) de acceso incluye cada uno una primera porción formada a través de dicha superficie (48) superior y una porción (76) inferior que define un escalón formado con dicha pared (66) lateral.