PROCEDIMIENTO Y APARATO PARA PROCESAR MUESTRAS BIOLÓGICAS Y QUÍMICAS.

Procedimiento y aparato para procesar muestras biológicas y químicas. Campo de la invención Esta invención se refiere a procedimientos y aparatos para procesar muestras biológicas y químicas Antecedentes de la invención ES 2 367 328 T3 El depósito de muestras biológicas/químicas como pequeñas manchas de un sustrato sólido para posterior análisis o aplicación es una técnica útil en muchos campos, incluida la espectrometría y la tecnología de microhileras. En aplicaciones de microhileras, se depositan sobre un sustrato sólido pequeñas cantidades de muestras de soluciones muestra biológicas/químicas, tales como soluciones de anticuerpos, formando una hilera de manchas de alta densidad. Se inmovilizan los contenidos de las soluciones muestra, tales como anticuerpos, sobre la superficie del sustrato, dentro de una zona determinada por el tamaño de la mancha. La capacidad de depositar un gran número de diferentes muestras sobre la superficie en un formato de hilera de alta densidad es un fundamento para aplicaciones de las hileras. De hecho, el depósito como manchas de muestras biológicas/químicas sobre una placa muestra es una etapa clave de preparación de la muestra en aplicaciones de espectrometría de masas, incluidas MALDI (Ionización de Desorción con Láser Asistida con Matriz), SELDI (Desorción/Ionización de Superficie Intensificada con Láser) y DIOS (Desorción/Ionización sobre Silicio Poroso. Existen técnicas convencionales para realizar análisis espectrométricos de masas de moléculas grandes, por ejemplo usando placas MALDI. Típicamente, con estas técnicas se introducen inicialmente soluciones líquidas (incluidas, por ejemplo, de péptido, proteína y matriz absorbente de energia) en sitios diana definidos en una placa espectrométrica de masas. Puesto que los diámetros de los sitios diana generalmente son pequeños y a menudo están densamente empaquetados, se disponen sobre los sitios diana de la placa pequeñas gotitas (por ejemplo, de 0,5-2 microlitros) de las soluciones líquidas para conseguir una colocación apropiada de la muestra y evitar el solapamiento de muestras entre los sitios diana. Una vez dispuestas, se evaporan las muestras líquidas, quedando el conglomerado de cristales de la matriz que contienen moléculas del analito (por ejemplo, péptidos y proteínas) sobre los sitios diana que tienen características favorables para análisis por espectrometría de masas. Cuando se desean muestras de conglomerado mayores, se ha usado la colocación y evaporación en serie de las muestras de líquido para construir iterativamente un conglomerado. El documento WO 03/012392 describe un procedimiento para procesar muestras líquidas químicas y biológicas que se han de recoger en sitios de recogida en un dispositivo de dianas, que comprende el asegurar de forma fiable una placa soporte de dianas al dispositivo de dianas. En el documento US 2002/0094533 se apilan placas para obtener una estructura compuesta y se describe un procedimiento en el que se usa la evaporación para la concentración de muestras líquidas. Los documentos US 2002/0045270 y EP 1284495 describen una platina para preparación de MALDI-TOF, en la que las manchas muestra se secan en una placa. Puesto que las placas espectrométricas de masas generalmente son planas, se han desarrollado varias técnicas para atraer y/o mantener las muestras líquidas en los sitios diana de la placa. Por ejemplo, se han formado placas MALDI con una máscara hidrófoba, (por ejemplo politetrafluoroetileno) sobre un sustrato hidrófilo estando expuestos los sitios diana. Además, se han formado placas MALDI con rasgos de ataque químico que delimitan pocillos que abarcan los sitios diana dentro de los cuales se mantienen las muestras químicas debido a la tensión superficial. Estos enfoques son todavía limitados por el pequeño volumen (5-10 microlitros) de las soluciones líquidas que se pueden situar sobre los sitios diana de la placa para conseguir una situación apropiada de la muestra y evitar el solapamiento de muestras entre los sitios diana. Separadamente, se han conocido placas de filtro de multipocillos con una pequeña columna de cromatografía incorporada en el fondo de cada pocillo, a usar para la preparación de muestras en espectrometría de masas. Un ejemplo típico de una placa de filtro multipocillos se comercializa bajo el nombre comercial ZipPlate®. Usando el dispositivo ZipPlate, las muestras procesadas se hacen pasar a través de las columnas de cromatografía y se depositan directamente sobre una placa MALDI jusando un sistema de vacío. A causa de que las muestras procesadas que vienen de los pocillos necesariamente se desplazan al aire una distancia corta antes de llegar a la superficie de la placa MALDI, se requiere un diseño delicado para asegurar que las soluciones de las muestras que vienen de los pocillos vecinos no se contaminen mutuamente cuando se están depositando sobre la superficie de la placa. También, dado que un escape de aire en un pocillo puede dar por resultado una presión reducida de aire en otros pocillos, se requiere un diseño delicado para asegurar que la presión de aire aplicada sobre cada muestra sea coherente de pocillo a pocillo. 2 La técnica anterior descrita en lo que antecede adolece de inconvenientes, incluidos el de estar formada por plásticos rígidos (por ejemplo, poliestireno o polipropileno) y el de no tener la capacidad de acoplarse a la placa diana MALDI para posibilitar la centrifugación con ella. Sumario de la invención La presente invención concierne a un procedimiento para procesar muestras químicas y biológicas según se define en la reivindicación 1. Breve descripción de los dibujos Las Figs. 1(a)-1(d) muestran varias configuraciones de columnas de una placa soporte de dianas; las Figs. 2 y 3 muestran un conjunto de placa soporte de dianas y un dispositivo de dianas; las Figs. 4 y 5 muestran una placa soporte de dianas que tiene una sección en rebaje delimitada para acomodar un dispositivo de dianas; la Fig. 6 muestra una sección transversal de un conjunto de placa de soporte de diana/dispositivo de dianas, en el que se usa una fijación mecánica para asegurar de forma liberable el dispositivo de dianas a la placa soporte de dianas; la Fig. 7 es una vista ampliada de la sección 7 de la Fig. 6; la Fig. 8 es una sección transversal parcial de un conjunto de placa soporte de dianas/dispositivo de dianas, en el que se usa adhesivo para asegurar de forma liberable el dispositivo de dianas a la placa soporte de dianas; la Fig.9 es una sección transversal parcial de un conjunto de placa soporte de dianas/dispositivo de dianas, en el que se usa adhesivo para asegurar de forma liberable el dispositivo de dianas a la placa soporte de dianas; la Fig. 10 muestra una representación esquemática de un procedimiento usado para preparar un dispositivo de dianas para análisis, en el que el dispositivo de dianas es una placa espectrométrica de masas (por ejemplo, una placa MALDI); la Figura 11 muestra un conjunto de una placa soporte de dianas y un dispositivo de dianas, en el que la placa soporte de dianas incluye un filtro y un medio de filtración y el dispositivo de dianas es una placa multipocilllo; la Fig. 12 muestra un conjunto de una primera placa soporte de dianas, que tiene un filtro y un medio filtrante dispuesto en él, una placa soporte de dianas secundaria y un dispositivo de dianas en forma de una placa espectrométrica de masas (por ejemplo, una placa MALDI) asegurada de forma que se puede liberar a la placa soporte secundaria; la Fig. 13 muestra una representación esquemática de un procedimiento para preparar un dispositivo de dianas para análisis usando el conjunto de la Fig. 12, en el que el dispositivo de dianas es una placa espectrométrica de masas (por ejemplo una placa MALDI), y la Fig. 14 muestra una variación del procedimiento de la Fig. 13, en el que la muestra para análisis puede purificarse. Descripción detallada de la invención ES 2 367 328 T3 Se muestran y se describen varias configuraciones de una placa soporte de dianas. Ventajosamente, con la presente invención, un dispositivo de dianas (por ejemplo, una placa multipocillo, una placa de muestras para espectrometría de masas, una placa soporte de dianas secundaria) está asegurado de forma liberable a la placa soporte de dianas para preparar muestras químicas y biológicas. Las muestras se pueden pasar eficientemente a un dispositivo de dianas habiendo sido filtradas o procesadas, y se pueden pasar sin que se requiera el uso de pipeta, u otro medio, con lo que se minimiza la contaminación por cruce. Más específicamente, y con referencia a las Figs. 1(a)-1(d), se muestran varias configuraciones de una placa soporte 10 de diana que tienen un cuerpo 12 con las superficies de arriba 14 y del fondo 16 y una pluralidad de paredes laterales 18. Entre las superficies... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para procesar muestras químicas y biológicas (54) que se han de colectar en sitios de recogida (34) en un dispositivo de dianas (30), procedimiento que comprende: fijar de forma liberable una placa soporte de dianas (10) a un dispositivo de dianas (30) poniendo en contacto a presión una porción elastómera de la mencionada placa soporte de dianas (10) con el dispositivo de dianas (30) o interponiendo una junta elastómera (50) entre la mencionada placa soporte de dianas (10) y el dispositivo de dianas (30), teniendo la mencionada placa soporte de dianas (10) superficies superior y de fondo (14, 16) distanciadas, una pluralidad de columnas (20) que se extienden entre y a través de las mencionadas superficies superior y de fondo (14, 16), en el que la mencionada placa soporte de dianas (10) está fijada de forma liberable al dispositivo de dianas (30) de manera que las mencionadas columnas (20) se acoplan al menos parcialmente con los sitios de recogida (34) del dispositivo de dianas (30; depositar las muestras líquidas (54) en al menos una porción de las mencionadas columnas (20); liberar el dispositivo de dianas (30) de la placa soporte de dianas (10) con los mencionados conglomerados (56) en los sitios de recogida (34), caracterizado por evaporar centrifugando la muestras líquidas depositadas (54) de manera que se formen conglomerados (56) en los sitios de recogida (34). 2. Un procedimiento según la reivindicación 1, en el que la fijación liberable incluye adherir la mencionada placa soporte de dianas (10) al dispositivo de dianas (30) con adhesivo (48). 3. Un procedimiento según la reivindicación 1, en el que el dispositivo de dianas es una placa multipocillos, preferiblemente una placa espectrométrica de masas. 4. Un procedimiento según la reivindicación 1, en el que el dispositivo de dianas (30) es una placa soporte de dianas secundaria que tiene las superficies superior y de fondo distanciadas, una pluralidad de columnas que se extienden entre y a través de las mencionadas superficies superior y de fondo, definiendo las mencionadas columnas de la mencionada placa soporte de dianas secundaria los sitios de recogida (34). 5. Un procedimiento según la reivindicación 1, en el que la fijación de forma liberable incluye delimitar al menos cierres impermeables a fluidos entre la mencionada placa soporte de dianas (10) y el dispositivo de dianas (30) en posiciones entre los sitios de recogida (34) de manera que se evite la contaminación por cruce en los sitios de recogida (34). 6. Un procedimiento según la reivindicación 1, en el que la mencionada placa soporte de dianas (10) está formada totalmente de un material elastómero. 7. Un procedimiento según las reivindicación es 1 o 6, en el que el mencionado material elastómero incluye un polímero de silicona, preferiblemente poli(dimetil)siloxano. 8. Un procedimiento según la reivindicación 1, en el que al menos una porción de cada una de las mencionadas columnas (20) tiene forma cilíndrica, con una forma troncocónica, convergente hacia la mencionada superficie del fondo (16), y/o con secciones transversales no constantes. 9. Un procedimiento según la reivindicación 1, en el que la mencionada superficie del fondo (16) de la mencionada placa soporte de dianas (10) está rebajada. 10. Un procedimiento según la reivindicación 9, en el que la mencionada superficie del fondo (16) delimita una sección rebajada situada dentro de la mencionada placa soporte de dianas (10), sección rebajada (36) que está conformada para acomodar el mencionado dispositivo de dianas (30) dentro de la base de la mencionada placa soporte de dianas (10). 11. Un procedimiento según la reivindicación 3, en el que la mencionada espectrometría de masas es para una finalidad seleccionada entre el grupo constituido por espectrometría de masas MALDI (ionización por desorción con láser asistida por matriz), espectrometría de masas SELDI (ionización/desorción con láser intensificada en la superficie) y espectrometría de masas DIOS (desorción/ionización sobre silicio poroso). 12. Un procedimiento según la reivindicación 1, en el que al menos una porción de las mencionadas columnas (20) está provista de un filtro (58), con un medio filtrante (60), está modificada químicamente, está modificada para proporcionar reactividad para ciertas moléculas biológicas/químicas, está modificada por unión a ella de entidades biológicas/médicas, está modificada para minimizar la unión específica de varias sustancias biológicas/químicas y/o está modificada para unir específicamente una clase de sustancias biológicas/químicas. 8 ES 2 367 328 T3 9 ES 2 367 328 T3 ES 2 367 328 T3 11 ES 2 367 328 T3 12 ES 2 367 328 T3 13 ES 2 367 328 T3 14 ES 2 367 328 T3 ES 2 367 328 T3 16 ES 2 367 328 T3 17