MÉTODO DE EVALUACIÓN DE UN RIESGO DE UN SUJETO QUE TIENDE A DESARROLLAR COMPLICACIONES VASCULARES.

Un método de evaluación del riesgo de un sujeto diabético a desarrollar complicaciones vasculares seleccionadas del grupo que consiste de isquemia del miocardio,

retinopatía, nefropatía, reestenosis después de la angioplastia coronaria, el método que comprende la etapa de determinación de un fenotipo de la haptoglobina del sujeto y por consiguiente la evaluación del riesgo del sujeto que tiende a desarrollar complicaciones vasculares, en donde el riesgo se reduce en pacientes con el fenotipo de la haptoglobina 1-1, en comparación con pacientes con los fenotipos de la haptoglobina 1-2 o de la haptoglobina 2-2

Método de evaluación de un riesgo de un sujeto que tiende a desarrollar complicaciones vasculares.

La presente invención, se relaciona con un método de evaluación de un riesgo de un sujeto diabético a desarrollar complicaciones vasculares, de acuerdo con la reivindicación 1 y la reivindicación 2, un método de evaluación de un riesgo de un sujeto que se sometió o es candidato a una angioplastia coronaria de acuerdo con la 5 reivindicación 3 de la presente invención.

La presente invención se relaciona con un método de evaluación de un riesgo de un sujeto, tal como un paciente hiperglicémico (diabético) o un paciente que se sometió o es un candidato a una angioplastia coronaria, opcionalmente acompañada por la colocación de una cánula intraluminal, que tiende a desarrollar complicaciones vasculares, determinando así la importancia de la reducción del estrés oxidativo en el sujeto específico probado y/o 10 el tratamiento del sujeto con anti-reestenosis y/o terapia anti-estenosis intra-stent. Más particularmente, la presente invención se relaciona con la determinación de un fenotipo de la haptoglobina de un sujeto como un medio de predicción de la probabilidad que el sujeto desarrolle complicaciones vasculares. Aún particularmente, la presente invención se relaciona con la determinación de un fenotipo de la haptoglobina del candidato diabético y de angioplastia o pacientes tratados como un medio de evaluación de la eficacia potencial de la terapia anti-oxidante u 15 otra terapia (por ejemplo, terapia anti-reestenosis, anti-estenosis intra-stent) como un adjunto al tratamiento de dichos pacientes.

La haptoglobina (Hp) es una proteína del suero unida a la hemoglobina que juega un papel importante en la protección contra el estrés oxidativo hemo-impulsado (Langlois MR and Delanghe JR (1996) Clin Chem 42: 1589-1600; Delanghe JR et al. (1998) AIDS 12: 1027-1032; Gutteridge JM. (1987) Biochim Biophys Acta 917: 219-223; 20 Miller YI et al. (1997) Biochem 36: 12189-12198; Vercellotti GM et al. (1994) Art Cell Blood Substit Imm Biotech 22: 207-213). Los ratones que carecen del gen Hp demuestran un incremento dramático en el estrés oxidativo y daño del tejido oxidativo particularmente en el riñón (Lim SK et al., (1998) Blood 92: 870-1877).

En el hombre, existen dos alelos comunes para Hp (1 y 2), que se manifiestan como los tres principales fenotipos 1-1, 2-1 y 2-2 (Bowman BH and Kurosky A. (1982) AdvHum Gen 12: 189-26). 25

Las diferencias funcionales en la capacidad de enlace de la hemoglobina de los tres fenotipos han sido demostradas. La Hp en pacientes con el fenotipo Hp 1-1, es capaz de unirse a la hemoglobina más por gramo base que las Hps que contienen productos del alelo Hp 2 (Langlois MR and Delanghe JR (1996) Clin Chem 42: 1589-1600). Las moléculas Fp en pacientes con el fenotipo Hp 1-1 también son antioxidantes más eficientes, dado que el tamaño más pequeño de Hp 1-1 facilita su entrada a sitios extravasculares de la lesión del tejido oxidativo en 30 comparación con los productos del alelo de Hp 2. También incluye un cribado glomerular de Hp significantemente más grande, en pacientes con Hp 1-1 (Bowman BH and Kurosky A. (1982) Adv Hum Gen 12: 189-26). Diferencias en protección contra el estrés oxidativo en pacientes con los diferentes fenotipos Hp, dan lugar a niveles en suero diferentes de otros antioxidantes tales como la vitamina C (Langlois MR et al., (1997) Am J Clin Nutr 66: 606-610).

Las complicaciones microvasculares y macrovasculares, a largo plazo causan morbilidad principal y 35 mortalidad en pacientes con diabetes mellitus (DM) (Diabetes Control and Complications Trial Research Group. (1993) N Eng J Med 329: 977-986). Cuatro complicaciones son retinopatía diabética (DR), la nefropatía diabética (DN), infarto del miocardio y riesgo notablemente mayor de reestenosis después de una angioplastia coronaria transluminal percutánea (PTCA). Aproximadamente un tercio de los pacientes con DM desarrollaran enfermedad renal en etapa terminal, los cuales necesitaran terapia de reemplazo renal, dentro de los 25 años del inicio de la 40 diabetes. Estudios epidemiológicos han demostrado las contribuciones importantes de la edad de inicio, duración, tipo de DM, y adecuación del control metabólico para el desarrollo y severidad de DN (Diabetes Control and Complications Trial Research Group. (1993) N Eng J Med 329: 977-986.; Reichard P et al, (1993) N Eng J Med 329: 304-309). Los pacientes con DM también manifiestan un 50 % de aumento en la velocidad de reestenosis después de PTCA (Carrozza JP et al. (1993) Ann Int Med 118: 344-349) en comparación con los no-diabéticos con una 45 incidencia tan alta como el 70 % en algunos estudios. Esto es particularmente problemático, en vista del aumento de incidencia y el alcance de la enfermedad de arteria coronaria en esta población, a menudo requiere del tratamiento simultáneo de lesiones múltiples en el mismo paciente.

Si bien numerosas pruebas clínicas han demostrado predictores anatómicos de reestenosis en las poblaciones diabéticas y generales (longitud de la lesión, diámetro del vaso) (Popma JJ and Topol EJ (1990) Am J 50 Med 88: 16N-24N), en la actualidad existe poca información clínica disponible al médico clínico para predecir que pacientes con DM tienen un mayor riesgo de reestenosis (Lincoff AM and Topol EJ. (1997) Interventional catheterization techniques. In: Braunwald E, ed. Heart disease. 5th ed. Philadelphia: WB Saunders pp. 1372-1374).

DR es una de las cuatro principales causas de ceguera en los EE.UU. (Ferris FL. et al. (1999) N Engl J Med 341: 667-678). Estudios epidemiológicos han demostrado que la edad de inicio de la diabetes, la duración de la 55 diabetes, y la adecuación del control metabólico influyen el desarrollo y severidad de DR. Sin embargo, es bien

conocido que no todos los pacientes con DM desarrollaran DR y que no todos los pacientes con DR progresaran a DR proliferativa que amenaza la visión.

Considerable evidencia ha demostrado la importancia de la generación de especies de oxígeno reactivo (estrés oxidativo) en el desarrollo de complicaciones vasculares diabéticas (Low PA et al. (1997) Diabetes 46: S38-S42; Hotta N. (1997) Nagoya J Med Sc 60: 89-100; Khechai F. et al. (1997) Art Thromb Vasc Bio 17: 2885-2290; 5 Vlassara H. et al. (1986) Clin Chem 32: B37-41; Dominguez C. et al. (1998) Diab Care 21: 1736-1742; Ceriello A. et al. (1996) Diab 45: 471-477; Guigliano D. et al.(1996) Diab Care 19: 257-267; Asayama K. et al. (1993) Free Rad Biol Med 15: 597-602; Pfeiffer A and Schatz H.(1995) Exp Clin End Diab 103: 7-14).

La hiperglicemia persistente, como se ve en pacientes diabéticos da lugar a auto-oxidación de la glucosa, productos de glicación de la proteína, aumento de la síntesis de prostanoides y activación de la proteína quinasa, 10 todo lo cual conduce al aumento de la producción de radicales libres de oxígeno. La acumulación del producto terminal de glicación avanzado (AGE) (Makita Z. et al. (1991) N Eng J Med 325: 836-842), se ha implicado directamente en daño del tejido asociado con DN (Clements RS. et al. (1998) J Diab Comp 12: 28-33). AGE y aductos específicos de la oxidación relacionados, tales como carboximetilisina y malondialdehido-lisina, se ha demostrado que se acumulan en la matriz mesangial y las lesiones nodulares de DN (Suzuki D. et al. (1999) J Am 15 Soc Neph 10: 822-832; Suzuki D. and Miyata T. (1999) Int Med 38: 309-314; Horrie K. et al. (1997) J Clin Invest 100: 2995-3004). Los niveles de antioxidantes endógenos tales como vitamina C (Retsky KL. And Frei B. (1995) Biochim Biophys A 1257: 279-287) se disminuyen en pacientes con la nefropatía diabética, además aumenta la carga de estrés oxidativo (Hirsch IB. et al. (1998) J Diab Comp 12: 259-263). Un mecanismo potencial del beneficio de los inhibidores de AGE en el desarrollo de DN (Lewis EJ. et al. (1993) N Engl J Med 329: 1456-1462; Bain R. et al. 20 (1992) J Am Soc Nephr 3: S97-103), puede ser su capacidad de reducir el estrés oxidativo y la producción y deposición de AGE en el riñón diabético.

Múltiples estudios han demostrado la importancia del estrés oxidativo en la reestenosis después de PTCA. La hemoglobina libre liberada como resultado de la fragmentación de glóbulos rojos en el sitio de lesión vascular (Jacob HS. (1994) J Lab Clin Med 123: 808-816), puede actuar como un potente agente de oxidación. Un cambio en 25 el estado de oxidación del ambiente vascular en el sitio de la lesión del globo se ha unido directamente a la apoptosis de las células del músculo liso medio (Pollman MJ. et al. (1999) Circ Res; 84:...

1. Un método de evaluación del riesgo de un sujeto diabético a desarrollar complicaciones vasculares seleccionadas del grupo que consiste de isquemia del miocardio, retinopatía, nefropatía, reestenosis después de la angioplastia coronaria, el método que comprende la etapa de determinación de un fenotipo de la haptoglobina del sujeto y por consiguiente la evaluación del riesgo del sujeto que tiende a desarrollar complicaciones vasculares, en donde el riesgo se reduce en pacientes con el fenotipo de la haptoglobina 1-1, en comparación con pacientes con 5 los fenotipos de la haptoglobina 1-2 o de la haptoglobina 2-2.

2. Un método de evaluación de un riesgo, de un sujeto que tiene diabetes, a desarrollar complicaciones vasculares, en donde las complicaciones vasculares son complicaciones macrovasculares, el método que comprende la etapa de determinación de un fenotipo de la haptoglobina del sujeto y por consiguiente la evaluación del riesgo del sujeto que tiende a desarrollar complicaciones vasculares, en donde el riesgo se reduce en pacientes 10 con el fenotipo de la haptoglobina 1-1, en comparación con pacientes con los fenotipos de la haptoglobina 1-2 o de la haptoglobina 2-2.

3. Un método de evaluación de un riesgo de un sujeto, que se sometió o es candidato a una angioplastia coronaria, opcionalmente acompañada por la colocación de una cánula intraluminal, a desarrollar la reestenosis o estenosis intra-stent, el método que comprende la etapa de determinación de un fenotipo de la haptoglobina del 15 sujeto y por consiguiente la evaluación del riesgo del sujeto que tiende a desarrollar la reestenosis o estenosis intra-stent, en donde el riesgo se reduce en pacientes con el fenotipo de la Haptoglobina 1-1 en comparación con los pacientes con los fenotipos de la haptoglobina 1-2 o de la haptoglobina 2-2.

4. El método de la reivindicación 3, en donde el sujeto tiene diabetes.

5. El método de la reivindicación 3, en donde el sujeto no es diabético. 20

6. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en donde la complicación vascular es una complicación macrovascular seleccionada del grupo que consiste del infarto del miocardio y la angioplastia coronaria asociada con la reestenosis.

7. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en donde dicha complicación vascular es la isquemia del miocardio. 25

8. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en donde la complicación vascular es la retinopatía.

9. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en donde la complicación vascular es la nefropatía.

10. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en donde la complicación vascular es la 30 reestenosis después de la angioplastia coronaria.

11. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en donde la complicación vascular es la estenosis intra-stent después de la colocación dla cánula intraluminal.

12. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en donde la complicación vascular es menos vasos sanguíneos colaterales de la arteria coronaria. 35

13. El método de la reivindicación 1, en donde la complicación vascular es la retinopatía diabética.

14. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en donde la complicación vascular es la nefropatía diabética.

15. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en donde el sujeto se sometió o es un candidato a una angioplastia coronaria. 40

16. El método de una o cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en donde el sujeto se sometió o es un candidato a una angioplastia coronaria acompañada por la colocación de una cánula intraluminal.

17. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en donde el sujeto tiene estenosis.

18. El método de la reivindicación 1, en donde el sujeto tiene estenosis coronaria.

19. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en donde la citada etapa de determinación de 45 dicho fenotipo de la haptoglobina comprende la determinación de un genotipo de la haptoglobina del sujeto.

20. El método de la reivindicación 19, en donde la citada etapa de determinación de dicho genotipo de la haptoglobina del sujeto comprende un método seleccionado del grupo que consiste de un método de amplificación de la señal, un método de detección directo y de la detección de al menos una modificación de la secuencia.

21. El método de la reivindicación 20, en donde dicho método de amplificación de la señal amplifica una molécula seleccionada del grupo que consiste de una molécula de ADN y una molécula de ARN. 5

22. El método de la reivindicación 20, en donde dicho método de amplificación de la señal se selecciona del grupo que consiste de PCR, LCR (LAR), Reacción Sintética Auto-Sostenida (3SR/NASBA) y reacción de la Replicasa Q-Beta (Qp).

23. El método de la reivindicación 20, en donde dicho método de detección directa se selecciona del grupo que consiste de una reacción de ciclación de sonda (CPR) y un análisis de ADN ramificado. 10

24. El método de la reivindicación 20, en donde dicha detección de al menos una modificación de la secuencia, emplea un método seleccionado del grupo que consiste de análisis de fragmento de restricción de longitud polimórfica (análisis RFLP), oligonucleótidos de alelos específicos (ASO), Electroforesis en Gel con Gradiente de Temperatura/Desnaturalización (DWE/TGGE), análisis de Polimorfismo de Conformación de Cadena Sencilla (SSCP) y Obtención de huella genética por didesoxi (ddF). 15

25. El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en donde dicha etapa de determinación del citado fenotipo de la haptoglobina comprende directamente la determinación del fenotipo de la haptoglobina del sujeto.

26. El método de la reivindicación 25, en donde dicha etapa de determinación del citado fenotipo de la haptoglobina comprende un método de detección inmunológica.

27. El método de la reivindicación 26, en donde dicho método de detección inmunológica se selecciona del 20 grupo que consiste de un radio-inmunoensayo (RIA), un ensayo de inmunoabsorción con enzimas ligadas (ELISA), un western blot, un análisis inmunohistoquímico, y de Clasificación celular activado por fluorescencia (FACS).