Vacunas de poliproteína recombinante para el tratamiento y diagnóstico de leishmaniosis.

Un polipéptido de fusión que comprende una porción inmunogénica de al menos cuatro antígenos de Leishmania

, en el que los antígenos de Leishmania son KMP11, SMT, A2 y CPB, en el que el polipéptido de fusión comprende una secuencia aminoacídica exhibida en una cualquiera de las SEQ ID NO: 23, 33 o 37, o una secuencia que tiene al menos un 97 % de identidad con la misma; y en el que el polipéptido de fusión es capaz de inducir una respuesta inmunitaria protectora para prevenir la leishmaniosis o reducir la gravedad de la leishmaniosis en un mamífero.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2009/044098.

Solicitante: INFECTIOUS DISEASE RESEARCH INSTITUTE.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 1124 COLUMBIA STREET SUITE 400 SEATTLE, WASHINGTON 98104 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: REED, STEVEN G., GOTO,YASUYUKI.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Técnicas de mutación o de ingeniería genética;... > C12N15/62 (Secuencias de ADN que codifican proteínas de fusión)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas... > Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas;... > C07K14/44 (de protozoos)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen antígenos... > A61K39/008 (Antígenos de Leishmania)

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Fragmento de la descripción:

Vacunas de poliproteína recombinante para el tratamiento y diagnóstico de leishmaniosis

ANTECEDENTES

Campo técnico [0001] La presente descripción se refiere en general a composiciones y procedimientos para prevenir, tratar y detectar leishmaniosis en pacientes. Más particularmente, la descripción se refiere a composiciones y procedimientos que comprenden polipéptidos de fusión de Leishmania, así como a polinucleótidos que codifican dichos polipéptidos de fusión.

Descripción de la técnica relacionada [0002] Los organismos Leishmania son parásitos intracelulares obligados que causan un gran espectro clínico de enfermedades denominadas leishmaniosis. Los organismos Leishmania son parásitos protozoarios intracelulares del género Leishmania. Los organismos Leishmania se orientan a macrófagos hospedadores, causando por tanto un amplio espectro de enfermedades clínicas en seres humanos y animales domésticos, principalmente perros. En algunas infecciones, el parásito puede permanecer latente durante muchos años. En otros casos, el hospedador puede desarrollar una de una variedad de formas de leishmaniosis. Las leishmaniosis se clasifican a grandes rasgos en tres tipos de enfermedades, leishmaniosis cutánea (LC) , leishmaniosis mucosa (LM) y leishmaniosis visceral (LV) , según las manifestaciones clínicas.

La leishmaniosis es un problema grave en gran parte del mundo, incluyendo Brasil, China, Ã?frica oriental y zonas de Oriente medio. La enfermedad es también endémica en la región mediterránea, incluyendo el sur de Francia, Italia, Grecia, España, Portugal y norte de Ã?frica. El número de casos de leishmaniosis ha aumentado drásticamente en los últimos 20 años, y existen ahora millones de casos de esta enfermedad en todo el mundo. Se diagnostican aproximadamente 2 millones de casos nuevos cada año, un 25 % de los cuales son de leishmaniosis visceral.

La leishmaniosis visceral (LV) se ha reseñado en 88 países, pero aproximadamente un 90 % de los casos de LV aparecen en Brasil, India, Sudán, Bangladesh y Nepal (Méndez y col. J. Immunol. 2001; 166 (8) : pág. 5122-8) . La incidencia anual se estima que es de aproximadamente 500.000 casos de LV, y la población en riesgo es de 350 millones (Engwerda y col. Eur. J. Immunol. 1998; 28 (2) : pág. 669-80; Squires y col. J. Immunol. 1989; 143 (12) : pág. 4244-9) . La leishmaniosis visceral, está causada generalmente por especies del complejo L. donovani, concretamente L. donovani y L. infantum (chagasi) . L. donovani es el agente causante de leishmaniosis visceral en Ã?frica y Asia, L. infantumlchagasi en los países mediterráneos y en el Nuevo Mundo (Piedrafita y col. J. Immunol. 1999; 163 (3) : pág. 1467-72) . La LV es una enfermedad debilitante grave que evoluciona hasta infección visceral que afecta a bazo, hígado y nódulos linfáticos que, no tratada, es generalmente una enfermedad mortal. Los síntomas de leishmaniosis visceral aguda incluyen hepatoesplenomegalia, fiebre, leucopenia, anemia e hipergammaglobulinemia. La LV activa es generalmente mortal a menos que se trate apropiadamente.

Los parásitos de Leishmania se transmiten por la picadura de moscas de la arena y los promastigotes 45 infecciosos se diferencian y replican como amastigotes en macrófagos del hospedador mamífero. Al igual que con otros patógenos intracelulares, las respuestas inmunitarias celulares son críticas para la protección frente a leishmaniosis. Las respuestas inmunitarias Th1 desempeñan un papel importante en la mediación de la protección frente a Leishmania, incluyendo papeles para linfocitos T CD4+ y CD8+, IFN-γ, IL-12, TNF-α y NO, mientras que se han reseñado efectos inhibidores para IL-10 y TGF-β (Engwerda y col. Eur. J. Immunol. 1998; 28 (2) : pág. 669-80; Murphy y col. Eur. J. Immunol. 2001; 31 (10) : pág. 2848-56; Murray y col. J. Exp. Med. 1999; 189 (4) : pág. 741-6; Murray y col. Infect. Immun. 2000; 68 (11) : pág. 6289-93; Squires y col. J. Immunol. 1989; 143 (12) : pág. 4244-96; Taylor y Murray. J. Exp. Med. 1997; 185 (7) : pág. 1231-9; Kaye y Bancroft. Infect. Immun. 1992; 60 (10) : pág. 433542; Stern y col. J. Immunol. 1988; 140 (11) : pág. 3971-7; Wilson y col. J. Immunol. 1998; 161 (11) : pág. 6148-55) .

La inmunización contra leishmaniosis en modelos animales puede efectuarse mediante el suministro de vectores de ADN que codifica antígeno (Gurunathan y col. J. Exp. Med. 1997; 186 (7) : pág. 1137-47; Piedrafita y col.

J. Immunol. 1999; 163 (3) : 1467-72; Méndez y col. J. Immunol. 2001; 166 (8) : pág. 5122-8) o mediante la administración de proteínas formuladas con coadyuvantes inductores de Th1 incluyendo IL-12 (Afonso y col. Science. 1994; 263 (5144) : pág. 235-7; Stobie y col. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000; 97 (15) : pág. 8427-32; Kenney y col. J. Immunol. 1999; 163 (8) : pág. 4481-8) o ligandos de TLR tales como oligonucleótidos CpG (Rhee y col. J. Exp. Med. 2002; 195 (12) : pág. 1565-73; Stacey y Blackwell. Infect. Immun. 1999; 67 (8) : pág. 3719-26; Walker y col. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999; 96 (12) : pág. 6970-5) y monofosforil-lípido A (Coler y col. Infect. Immun. 2002; 70 (8) : pág. 4215-25; Skeiky y col. Vaccine. 2002; 20 (2728) : pág. 3292-303) .

A pesar de algunas pruebas de que las vacunas de subunidades pueden ser eficaces en ciertos modelos de LV (Basu y col. J. Immunol. 2005; 174 (11) : pág. 7160-71; Stager y col. J. Immunol. 2000; 165 (12) : pág.

7064-71; Ghosh y col. Vaccine. 2001; 20 (12) : pág. 59-66; Wilson y col. Infect. Immun. 1995; 63 (5) : pág. 2062-9; Tewar y y col. J. Infect. Dis. 2005; 191 (12) : pág. 2130-7; Aguilar-Be y col. Infect. Immun. 2005; 73 (2) : pág. 812-9. Rafati y col. Vaccine. 2006; 24 (12) : 2169-75) , faltan progresos hacia la definición de candidatos a antígeno eficaces contra LV in vivo.

Las estrategias que emplean vacunas consistentes en organismos enteros para prevenir o tratar leishmaniosis no han sido eficaces en seres humanos. En consecuencia, sigue habiendo una significativa necesidad de composiciones inmunogénicas y vacunas que puedan prevenir y/o tratar eficazmente la leishmaniosis en seres humanos y otros mamíferos (por ejemplo, caninos) . La presente descripción satisface estas necesidades y ofrece otras ventajas relacionadas.

BREVE SUMARIO

La presente invención proporciona un péptido de fusión que comprende una porción inmunogénica de al menos cuatro antígenos de Leishmania, en el que los antígenos de Leishmania son KMP11, SMT, A2 y CPB, en el que el polipéptido de fusión comprende una secuencia aminoacídica exhibida en una cualquiera de las SEQ ID NO: 23, 33 o 37, o una secuencia que tiene al menos un 97 % de identidad con ellas; y en el que el polipéptido de fusión es capaz de inducir una respuesta inmunitaria protectora para prevenir la leishmaniosis o reducir la gravedad de la leishmaniosis en un mamífero.

En un aspecto adicional, la presente invención proporciona un polinucleótido aislado que codifica un polipéptido de fusión de la presente invención.

En otro aspecto, la presente invención proporciona una composición que comprende al menos un 25 componente seleccionado del grupo consistente en un polipéptido según la presente invención y un polinucleótido según la presente invención, en combinación con al menos un inmunoestimulante.

La presente invención proporciona, en otro aspecto, la composición según la presente invención para uso en la estimulación de una respuesta inmunitaria contra leishmaniosis en un mamífero.

La presente invención proporciona, en un aspecto adicional, la composición según la presente invención para uso en la inducción de inmunidad protectora frente a leishmaniosis en un mamífero.

En otro aspecto, la... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Un polipéptido de fusión que comprende una porción inmunogénica de al menos cuatro antígenos de Leishmania, en el que los antígenos de Leishmania son KMP11, SMT, A2 y CPB, en el que el polipéptido de fusión comprende una secuencia aminoacídica exhibida en una cualquiera de las SEQ ID NO: 23, 33 o 37, o una secuencia que tiene al menos un 97 % de identidad con la misma; y en el que el polipéptido de fusión es capaz de inducir una respuesta inmunitaria protectora para prevenir la leishmaniosis o reducir la gravedad de la leishmaniosis en un mamífero.

2. El polipéptido de fusión de la reivindicación 1, en el que el polipéptido de fusión comprende una secuencia aminoacídica exhibida en la SEQ ID NO: 37, o una secuencia que tiene al menos un 97 % de identidad con la misma.

3. El polipéptido de fusión de la reivindicación 1, en el que el polipéptido de fusión comprende una secuencia aminoacídica exhibida en la SEQ ID NO: 33, o una secuencia que tiene al menos un 97 % de identidad con la misma.

4. El polipéptido de fusión de la reivindicación 1, en el que el polipéptido de fusión comprende una secuencia aminoacídica exhibida en la SEQ ID NO: 23, o una secuencia que tiene al menos un 97 % de identidad con la misma.

5. El polipéptido de fusión de la reivindicación 1, en el que el polipéptido de fusión comprende una secuencia aminoacídica exhibida en la SEQ ID NO: 23.

6. El polipéptido de fusión según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que la leishmaniosis está causada por infección por L. major, L. infantum y/o L. donovani.

7. Un polinucleótido aislado que codifica un polipéptido de fusión de la reivindicación 1.

8. Una composición que comprende al menos un componente seleccionado del grupo consistente en un polipéptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 y un polinucleótido según la reivindicación 7, en combinación con al menos un inmunoestimulante.

9. La composición según la reivindicación 8, en la que el inmunoestimulante se selecciona del grupo consistente en un oligonucleótido que contiene CpG, lípido A sintético, MPL™.

3. MPL™, saponinas, miméticos de saponina, AGP, agonistas de receptores de tipo Toll o una combinación de los mismos.

10. La composición según la reivindicación 8, en la que el inmunoestimulante se selecciona del grupo consistente en un agonista de TLR4, un agonista de TLR7/8 y un agonista de TLR9.

11. La composición según la reivindicación 8, en la que el inmunoestimulante se selecciona del grupo consistente en GLA, oligonucleótido que contiene CpG, imiquimod, gardiquimod y resiquimod.

12. La composición según la reivindicación 8 para uso en la estimulación de una respuesta inmunitaria frente a leishmaniosis en un mamífero.

13. La composición según la reivindicación 8 para uso en la inducción de inmunidad protectora frente a leishmaniosis en un mamífero.

14. La composición según la reivindicación 8 para uso en la inducción de inmunidad protectora frente a leishmaniosis en un canino, en la que el inmunoestimulante es GLA y en la que la composición se formula como una emulsión de aceite en agua estable.

15. La composición para uso según la reivindicación 14, en la que la composición comprende adicionalmente al menos un componente seleccionado de un agonista de TLR7/8 y un agonista de TLR9.

16. La composición para uso según la reivindicación 15, en la que el agonista de TLR7/8 se selecciona del grupo consistente en imiquimod, gardiquimod y resiquimod, y el agonista de TLR9 es un oligonucleótido que contiene CpG.

17. La composición para uso según la reivindicación 14, en la que la composición comprende un polipéptido de fusión KSAC que tiene una secuencia aminoacídica exhibida en una cualquiera de las SEQ ID NO: 23, 33º 37.

18. La composición para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 12 a 17, en la que la leishmaniosis está causada por infección por L. major, L. infantum y/o L donovani.

19. Un procedimiento para detectar infección por Leishmania en una muestra biológica, que comprende: a) poner en contacto una muestra biológica con un polipéptido de fusión de la reivindicación 1; y b) detectar en la muestra biológica la presencia de anticuerpos que se unen al polipéptido de fusión, detectando así

infección por Leishmania en una muestra biológica.

20. El procedimiento de la reivindicación 19, en el que la muestra biológica se selecciona del grupo consistente en sueros, sangre y saliva.

21. El procedimiento de la reivindicación 19, en el que el polipéptido de fusión comprende una secuencia aminoacídica exhibida en una cualquiera de las SEQ ID NO: 23, 33 o 37.

22. El procedimiento de la reivindicación 19, en el que el polipéptido de fusión está unido a un soporte sólido.

23. Un kit de diagnóstico para detectar infección por Leishmania en una muestra biológica, que comprende:

a) un polipéptido de fusión de la reivindicación 1; y b) un reactivo de detección.