UN METODO PARA LA SECUENCIACION DIRECTA DE ACIDO NUCLEICO.
Un método para la secuenciación de base de nucleótido que comprende las etapas secuenciales de:
(a) introducir en una cámara de reacción que contiene una polimerasa inmovilizada sobre un soporte sólido una muestra de ácido nucleico, una pluralidad de cebadores de oligonucleótido diferentes, y una solución tamponada que contiene los cuatro nucleótidos diferentes, siendo cada nucleótido diferencialmente marcado con un grupo marcador desprendible y bloqueado en la porción 3'' con un grupo bloqueante desprendible, en el que dicha muestra de ácido nucleico se hibrida a un cebador, y dicha polimerasa extiende dicho cebador incorporando un nucleótido diferencialmente marcado que es complementario al ácido nucleico de la muestra; (b) eliminar los nucleótidos que no han sido incorporados en el cebador; (c) determinar la identidad del nucleótido incorporado en el cebador de elongación detectando su grupo marcador, identificando así el complemento del nucleótido 3''-bloqueado marcado; (d) separar el grupo bloqueante 3'' y el grupo marcador a partir del nucleótido incorporado; (e) eliminar el grupo bloqueante 3'' separado y el grupo marcador separado de la etapa (d); (f) confirmar la separación y la eliminación del grupo bloqueante 3'' a partir del nucleótido incorporado en el cebador monitorizando la presencia de nucleótidos marcados en la cámara de reacción mediante una segunda etapa de detección, en la que la presencia del nucleótido marcado en la cámara de reacción indica que el grupo bloqueante 3'' no ha sido eliminado; (g) introducir en la cámara de reacción solución tamponada recién preparada que contiene dichos cuatro nucleótidos diferentes para iniciar de nuevo la síntesis; y (h) repetir las etapas de (b) a (g) hasta que ningún nuevo nucleótido sea incorporado en la etapa (g) o el grupo bloqueante 3'' persista en no ser separado y eliminado en las etapas (d) y (e); por el cual el orden, en el cual los nucleótidos marcados en la etapa (c) son detectados, corresponde al complemento de la secuencia de al menos una parte de la muestra de ácido nucleico.
Tipo: Resumen de patente/invención.
Solicitante: ASM SCIENTIFIC, INC.
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 240 NORFOLK STREET,CAMBRIDGE, MA 02139.
Inventor/es: STEMPLE,DEREK LYLE, ARMES,NIALL ANTONY.
Fecha de Publicación: .
Fecha Concesión Europea: 28 de Mayo de 2008.
Clasificación PCT:
- C12Q1/68 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
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