Método de detección de un rabdomiosarcoma que utiliza una muestra derivada de un líquido corporal.

Método para detectar un rabdomiosarcoma que comprende evaluar un aumento significativo en la expresión de por lo menos una clase de miARN seleccionada de entre el grupo que consiste en hsa-miR-133a

, hsa-miR-133b y hsa-miR-206 en una muestra derivada de líquido corporal, en el que el líquido corporal es la sangre y la muestra derivada de líquido corporal es el plasma o el suero.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/JP2011/058843.

Solicitante: LSIP, LLC.

Inventor/es: HOSOI,HAJIME, MIYACHI,MITSURU.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS... > Procesos de medida, investigación o análisis en... > C12Q1/68 (en los que intervienen ácidos nucleicos)

PDF original: ES-2549452_T3.pdf

 

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Fragmento de la descripción:

Método de detección de un rabdomiosarcoma que utiliza una muestra derivada de un líquido corporal.

Campo técnico

La presente invención se refiere a un método para detectar un rabdomiosarcoma que utiliza una muestra derivada de un líquido corporal.

Técnica anterior

Se ha planteado el desarrollo de una técnica de diagnóstico no invasiva utilizando ADN libre derivado de un tumor en suero (documentos no de patente 1 y 2) . En los últimos años se ha confirmado la existencia de microARN (miARN) , ARN no codificantes que no se traducen para proporcionar proteínas. Se ha informado de que sus perfiles de expresión son específicos de tejido o de tumor (documentos no de patente 3 y 4) . En cánceres pediátricos también, se informa en un estudio utilizando estirpes celulares (documento no de patente 5) e que los perfiles de expresión difieren dependiendo del tumor. En el rabdomiosarcoma, que es el sarcoma de tejidos blandos más común en cánceres pediátricos, se revela que se aumenta la expresión de miARN expresados específicamente en el músculo (documentos no de patente 5 y 6) . Adicionalmente, también se revela que existen miARN de origen tumoral en el suero. Por tanto, se sugiere la utilidad de miARN como biomarcadores en cáncer colorrectal, linfoma, cáncer de próstata, cáncer de hígado, y similares (documentos no de patente 7-10) .

Documentos de la técnica anterior

Documentos no de patente Documento no de patente 1: Gotoh, et al. J Clin Oncol 23: 5205-5210, 2005

Documento no de patente 2: Yagyu, et al. Clin Cancer Res 14: 7011-7019, 2008

Documento no de patente 3: Calin GA, et al. Nat Rev Cancer; 6: 857-866, 2006

Documento no de patente 4: Lu J, et al. Nature; 435: 834-838, 2005

Documento no de patente 5: Wei JS, et al. Clin Cancer Res; 15: 5560-5568, 2009

Documento no de patente 6: Subramanian S, et al. Oncogene; 27: 2015-2026, 2008

Documento no de patente 7: Ng EKO, et al. Gut; 58: 1375-1381, 2009

Documento no de patente 8: Mitchell PS, et al. PNAS; 105: 10513-10518, 2008

Documento no de patente 9: Lawrie CH, et al. Br J Haematol; 141: 672-675, 2008

Documento no de patente 10: Yamamoto Y, et al. Biomarkers; 14: 529-538, 2009 Descripción de la invención Problema que debe solucionar la invención Un objetivo de la presente invención es proporcionar un método de detección de un rabdomiosarcoma que es difícil de diagnosticar fácilmente.

Medios para solucionar el problema

Los inventores cuantificaron hsa-miR-1, hsa-miR-133a, hsa-miR-133b y hsa-miR-206, un grupo de miARN expresados específicamente en el músculo, en muestras derivadas de líquidos corporales de pacientes con tumor pediátrico; e investigaron la posibilidad de diagnóstico no invasivo de rabdomiosarcoma. Como resultado, los inventores descubrieron que podía detectarse rabdomiosarcoma mediante estos miARN.

La presente invención proporciona los siguientes métodos para detectar rabdomiosarcomas.

1. Un método para detectar rabdomiosarcoma que comprende evaluar un aumento significativo en la expresión de al menos una clase de miARN seleccionado del grupo que consiste en hsa-miR-133a, hsa-miR-133b y hsa-miR-206 en una muestra derivada de líquido corporal, en

el que el líquido corporal es sangre y la muestra derivada de líquido corporal es plasma o suero.

2. El método para detectar rabdomiosarcoma según el punto anterior 1, en el que el patrón de la detección es un aumento significativo en la cantidad de expresión del al menos uno seleccionado del grupo que consiste en hsa-miR-133a, hsa-miR-133b y hsa-miR-206 en la muestra derivada de líquido corporal, en comparación con la de un sujeto normal, en el que el líquido corporal es sangre y la muestra derivada de líquido corporal es plasma o suero.

3. El método para detectar rabdomiosarcoma según el punto anterior 1, en el que la evaluación comprende evaluar la expresión de al menos una clase de miARN seleccionado del grupo que consiste en hsa-miR-133a, hsa-miR-133b y hsa-miR-206.

4. El método para detectar rabdomiosarcoma según el punto anterior 1, en el que la evaluación comprende evaluar la expresión de al menos hsa-miR-206.

5. El método para detectar rabdomiosarcoma según el punto anterior 1 detectado mediante PCR en tiempo real.

Efectos de la invención

El rabdomiosarcoma es uno de los tumores que son difíciles de diagnosticar. Sin embargo, según la presente invención, la detección de un rabdomiosarcoma, que se consideraba imposible en el pasado, puede lograrse utilizando una muestra de líquido corporal.

Con respecto al rabdomiosarcoma, es importante para la mejora del pronóstico extirpar completamente el tumor de rabdomiosarcoma antes de la quimioterapia y radioterapia; también es importante realizar un diagnóstico provisional de manera preoperatoria con el fin de determinar un plan de operación cuyo fin sea la extirpación completa inicial. La presente invención permite un diagnóstico más rápido y más preciso del rabdomiosarcoma, y puede esperarse una mejora en los resultados del tratamiento del rabdomiosarcoma.

Breve descripción de los dibujos

La figura 1 representa un aumento en la expresión de microARN específicos de músculo en estirpes celulares de rabdomiosarcoma. El eje de ordenadas es una razón de cada miARN específico de músculo con respecto a hsamiR-16. RMS: rabdomiosarcoma, NB: neuroblastoma, EWS: sarcoma de Ewing, MRT: tumor rabdoide maligno.

La figura 2 representa un aumento en la expresión de microARN específicos de músculo en muestras de tumor de rabdomiosarcoma. El eje de ordenadas es una razón de cada miARN específico de músculo con respecto a hsamiR-16. RMS: rabdomiosarcoma, no RMS: tumores distintos de rabdomiosarcoma.

La figura 3 representa las cantidades de expresión de hsa-miR-1, hsa-miR-206, hsa-miR-133a y hsa-miR-133b en sobrenadantes de cultivo de las estirpes celulares de rabdomiosarcoma. El eje de ordenadas es una razón de miARN específico de músculo con respecto a hsa-miR-16. RMS: rabdomiosarcoma, NB: neuroblastoma, EWS: sarcoma de Ewing, MRT: tumor rabdoide maligno.

La figura 4 es una comparación de hsa-miR-1 en suero entre sujetos normales, niños afectados por cáncer y niños afectados por rabdomiosarcoma (RMS) . El eje de ordenadas es una razón de hsa-miR-1 con respecto a hsa-miR-16. RMS: rabdomiosarcoma, no RMS: tumores distintos de rabdomiosarcoma.

La figura 5 es una comparación de hsa-miR-133a en suero entre sujetos normales, niños afectados por cáncer y niños afectados por rabdomiosarcoma (RMS) . El eje de ordenadas es una razón de hsa-miR-133a con respecto a hsa-miR-16. RMS: rabdomiosarcoma, no RMS: tumores distintos de rabdomiosarcoma.

La figura 6 es una comparación de hsa-miR-133b en suero entre sujetos normales, niños afectados por cáncer y niños afectados por rabdomiosarcoma (RMS) . El eje de ordenadas es una razón de hsa-miR-133b con respecto a hsa-miR-16. RMS: rabdomiosarcoma, no RMS: tumores distintos de rabdomiosarcoma.

La figura 7 es una comparación de hsa-miR-206 en suero entre sujetos normales, niños afectados por cáncer y niños afectados por rabdomiosarcoma (RMS) . El eje de ordenadas es una razón de hsa-miR-206 con respecto a hsa-miR-16. RMS: rabdomiosarcoma, no RMS: tumores distintos de rabdomiosarcoma.

La figura 8 representa una disminución en la razón de cada miARN específico de músculo con respecto a hsa-miR16 en niños afectados por RMS tras el tratamiento. El eje de ordenadas es una razón del miARN específico de músculo con respecto a hsa-miR-16.

La figura 9 representa la estabilidad de miARN en suero humano. La estabilidad de microARN en suero se estudió en almacenamiento... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Método para detectar un rabdomiosarcoma que comprende evaluar un aumento significativo en la expresión de por lo menos una clase de miARN seleccionada de entre el grupo que consiste en hsa-miR-133a, hsa-miR-133b y hsa-miR-206 en una muestra derivada de líquido corporal, en el que el líquido corporal es la sangre y la muestra derivada de líquido corporal es el plasma o el suero.

2. Método para detectar un rabdomiosarcoma según la reivindicación 1, en el que el patrón de la detección es un aumento significativo en la cantidad de expresión de dicha por lo menos una seleccionada de entre el grupo que consiste en hsa-miR-133a, hsa-miR-133b y hsa-miR-206 en la muestra derivada de líquido corporal, en comparación con la de un sujeto normal, en el que el líquido corporal es la sangre y la muestra derivada de líquido corporal es el plasma o el suero.

3. Método para detectar un rabdomiosarcoma según la reivindicación 1, en el que la evaluación comprende evaluar la expresión de una clase de miARN seleccionada de entre el grupo que consiste en hsa-miR-133a, hsa-miR-133b y hsa-miR-206.

4. Método para detectar un rabdomiosarcoma según la reivindicación 1, en el que la evaluación comprende evaluar la expresión de por lo menos hsa-miR-206. 20

5. Método para detectar un rabdomiosarcoma según la reivindicación 1, detectado mediante PCR en tiempo real.