COMPOSICION DE CEPAS DE LACTOBACILO Y APLICACION DE LA COMPOSICION DE CEPAS DE LACTOBACILO.

Uso de una composición de las cepas de bacterias Lactobacillus,

que incluyen tres cepas: Lactobacillus fermentum 57A depositada con el número B/00007, Lactobacillus plantarum 57B depositada con el número B/00008 y Lactobacillus gasseri 57C depositada con el número B/00009, que presentan la capacidad de coagregación y cuyas cantidades relativas se determinan por la proporción de 0,5:0,5:1, respectivamente, para la fabricación de un medicamento que puede administrarse por vía oral con afinidad diversificada por el epitelio del tracto digestivo y de la vagina, para la colonización de la vagina y el ano

Composición de cepas de lactobacilo y aplicación de la composición de cepas de lactobacilo.

El objeto de la solicitud es la composición de cepas de Lactobacillus en la producción de la preparación farmacéutica.

La composición de la microflora vaginal es diversa y depende de la etapa de la vida en la que está una mujer y es estrictamente dependiente de la actividad hormonal del cuerpo. Cruickshank y Sherman, quiénes describieron la microflora vaginal del feto en el útero, de lactantes, niñas antes de la pubertad, y mujeres en edad de procrear y tras la menopausia, presentaron conocimientos básicos del ecosistema vaginal. En el útero, la vagina fetal es estéril, sin embargo, 2-3 semanas tras el nacimiento, la composición cuantitativa de la microflora es casi la misma que la composición cuantitativa de la microflora de la vagina de una mujer adulta, lo que es la consecuencia de la estimulación de estrógenos por parte de la madre. Antes de la aparición de la primera menstruación, el entorno vaginal está dominado por bacterias tales como S. epidermidis, Bacteroides spp., Peptococcus spp., Porphyromonas spp., G. vaginalis. Durante el periodo reproductivo, el entorno vaginal está dominado en su mayoría por la población bacteriana del género Lactobacillus. En el pasado, se creía que este género estaba representado por una única cepa, es decir Lactobacillus acidophilus. Durante la última década, el desarrollo de métodos moleculares modernos permitió organizar la clasificación de la mayoría de las bacterias, lo que demostró que la especie Lactobacillus acidophilus no es homogénea y es parte de un complejo de algunas otras especies tales como L. crispatus, L. amylovorus, L. gallinarum, L. acidophilus sensu stricto, L. gasseri, L. johnsoni. Osando métodos moleculares modernos, especialmente la técnica de secuenciación de ADN, así como procedimientos de cultivo modificados se demostró que las especies más comunes encontradas en el entorno vaginal natural de mujeres sanas son algunas diversas especies, que son parte del complejo de acidophilus tales como L. johnsoni, L. gasseri, L. acidophilus, L. crispatus, y sobre todo L. plantarum y L. fermentum.

Los mecanismos mediante los cuales las bacterias del género Lactobacillus afectan al entorno vaginal todavía no se entienden completamente. Sin embargo, se conoce ampliamente que:

• sintetizan sustancias antimicrobianas, tales como ácidos láctico, acético, piroglutámico, con el fin de disminuir el pH del entorno vaginal para obtener los valores de 3,7-4,6,

• sintetizan proteínas y/o péptidos cortos con una estructura muy compleja, que se parecen a bacteriocinas, que se adhieren a los receptores en la superficie de bacterias susceptibles conduciendo a su lisis y finalmente su muerte,

• compiten con otros microorganismos, especialmente patógenos, por las sustancias nutritivas y por los receptores epiteliales de la vagina,

• modifican toxinas y receptores de toxinas,

• producen peróxido de hidrógeno, algunas cepas de Lactobacillus, que producen H₂O₂, dominan la población de microbios de la vagina sana,

• ejercen diferentes efectos inmunomoduladores sobre el sistema inmunológico del huésped.

Debido a estas muchas propiedades diferentes, las bacterias del género Lactobacillus pueden mantener un determinado estado biológico de equilibrio de la vagina, evitando el numeroso crecimiento de poblaciones de microorganismos patógenos que residen en el tracto genital de la mujer, lo que también disminuye el riesgo de aparición de vaginosis bacteriana.

Debido al hecho de que la mayoría de las infecciones del tracto genitourinario en mujeres están provocadas por el desequilibrio de la microflora vaginal, las formas de prevención así como el tratamiento están dirigidos hacia el reestablecimiento del equilibrio microbiano correcto.

En 1992, se llevó a cabo un experimento en los Estados Unidos (Hilton E, Isenberg HD, Alperstein P, France K, Borenstein MT. Ingésting of yogurt containing Lactobacillus acidophilus as prophylaxis for candidal vaginitis. Ann Item. Med 1992; 116: 353-357), que implicaba un consumo de yogur que contenia Lactobacillus acidophilus diariamente durante 6 meses por 35 mujeres con candidiasis recurrente de vulva y vagina con el fin de prevenir la enfermedad recurrente. El criterio de valoración del experimento era la colonización de la vagina y el ano por Candida y Lactobacillus así como la candidiasis. Trece pacientes terminaron el experimento, sin embargo, el análisis se realizó para 33 de ellas. Durante el periodo de 6 meses, se encontró una disminución relevante en el número de infecciones provocadas por Candida en personas que tenían colonización (ano y vagina) por Candida. Se realizó un experimento con el uso de un yogur regular que contenía L. acidophilus, que producía una cantidad moderada de H₂O₂. No se identificaron las cepas de L. acidophilus aisladas a partir de las mujeres. Sin embargo, se observó una relación estrecha entre la presencia de L. acidophilus en el ano y la vagina: si L. acidophilus estaba ausente en el ano, la probabilidad de su presencia en la vagina era del 15,5%, por otro lado, si estaba presente en el ano, la probabilidad de su presencia en la vagina era del 54,8% (P < 0,001). Los autores concluyeron que la cepa intestinal de L. acidophilus estaba colonizando la vagina, sin embargo, debido a la falta de evidencia molecular, era imposible de demostrar.

Se realizó un experimento similar en 1996 en Israel (Shalev E, Battino S, Weiner E, Colodner R, Keness Y. Ingestión of yogurt containing Lactobacillus acidophilus compared with pasteurized yogurt as prophylaxis for recurrent candidal vaginitis and bacterial vaginosis. Arch Fam Med 1996; 5: 593-596) basándose en el mismo protocolo y con el uso de yogur que contenía L. acidophilus que producía H₂O₂. Los datos obtenidos en este experimento no mostraron una actividad profiláctica sobre la blastomicosis vaginal recurrente (el yogur que contenia bacterias muertas mostró el mismo efecto), sin embargo, mostró un efecto sobre la vaginosis bacteriana, al mismo tiempo que aumentaba el número de mujeres con colonización por L. acidophilus. Además, se observó una colonización coexistente del ano y la vagina por Candida.

En 2001, se llevó a cabo un experimento aleatorizado abierto en Finlandia (Kontiokari T, Sundqvist K, Nuutinen M, Pokka T, Koskela M, Uhari M. Randomized trial of cranberry-lingonberry juice and Lactobacillus GG drink for the prevention of urinary tract infections in women. Brit Med J 2001; 322: 1571-1573) sobre la posibilidad de prevenir infecciones recurrentes del tracto urinario en mujeres con el uso de zumo de arándano agrio y arándano rojo o bebida de Lactobacillus GG. El experimento duró 12 meses e implicó la observación de infecciones recurrentes en 150 mujeres divididas en 3 grupos, a quienes se les diagnosticó previamente una infección del tracto urinario (>10⁵ bacterias/mi de orina). El parámetro final del experimento era la observación de una infección recurrente. En comparación con el zumo de arándano agrio/arándano rojo, no se observó un efecto positivo de Lactobacillus GG. La causa de esto puede ser que Lactobacillus GG, al ser una cepa intestinal tipica, no coloniza el orificio de la uretra/vagina.

En 2003, se llevó a cabo un experimento clínico aleatorizado con el uso de placebo (Reid G, Charbonneau D, Erb J, Kochanowski B, Beuerman D, Poehner R, Bruce AW. Oral use of Lactobacillus rhamnosus GR-1 and L. fermentum RC-14 significantly alters flora vaginal: randomized, placebo-controlled trial in 64 healthy women. FEMS Immunol Med Microbiol 2003; 35: 131-134) con el fin de verificar el efecto de Lactobacillus rhamnosus GR-1 y L. fermentum RC-14 administrados por vía oral durante 60 días sobre la flora vaginal de 64 mujeres sanas. El análisis microscópico mostró que el 37% de las mujeres examinadas volvían a su flora normal en comparación con el 13% de las mujeres del grupo control. El cultivo mostró un aumento relevante en el número de Lactobacillus, y una disminución en el número de levaduras y bacilos intestinales. El producto probiótico se consideró seguro en la administración diaria.

En 2004, los mismos autores llevaron a cabo otro experimento en el que se administraron...

1. Uso de una composición de las cepas de bacterias Lactobacillus, que incluyen tres cepas: Lactobacillus fermentum 57A depositada con el número B/00007, Lactobacillus plantarum 57B depositada con el número B/00008 y Lactobacillus gasseri 57C depositada con el número B/00009, que presentan la capacidad de coagregación y cuyas cantidades relativas se determinan por la proporción de 0,5:0,5:1, respectivamente, para la fabricación de un medicamento que puede administrarse por vía oral con afinidad diversificada por el epitelio del tracto digestivo y de la vagina, para la colonización de la vagina y el ano.

2. Uso según la reivindicación 1, caracterizado porque la composición de las cepas del género Lactobacillus se combina con un portador farmacéuticamente compatible.

3. Uso según la reivindicación 1, caracterizado porque la composición de las cepas del género Lactobacillus se prepara en forma de una cápsula.

4. Uso según la reivindicación 1, caracterizado porque a la composición de las cepas del género Lactobacillus se le añade lactosa, manitol, estearato de magnesio.