Fragmento de anticuerpo humanizado que se une específicamente al antígeno de las células troncales de la próstata (PSCA) en la superficie de las células cancerosas,

en el que dicho fragmento se selecciona de entre el grupo constituido por scFv, un dímero scFv (diacuerpo), un dímero sc-Fv-CH3 (minicuerpo) y scFv-Fc, y en el que dicho fragmento de anticuerpo comprende las secuencias de las regiones de la cadena ligera variable (VL) y de la cadena pesada variable (VH) representadas en la figura 1

Antecedentes de la invención

El cáncer de próstata es la segunda causa principal de muertes por cáncer en hombres, con aproximadamente

27.000 muertes y 234.000 nuevos casos previstos este año en hombres de estadounidenses. El cáncer de próstata aparece en la próstata, una glándula del tamaño aproximadamente de una avellana encontrada en el sistema reproductor masculino que es responsable de la generación y almacenamiento del líquido seminal. La próstata contiene muchas pequeñas glándulas que producen aproximadamente el 20 por ciento del líquido que contiene el semen. En el cáncer de próstata, las células de estas glándulas prostáticas se transforman en células cancerosas. Debido a que la próstata rodea parte de la uretra, las enfermedades de la próstata con frecuencia afectan a la micción, la eyaculación o la defecación.

Debido a que el cáncer de próstata comienza cuando las células normales de la glándula prostática que segrega semen experimentan transformación en células cancerosas, el cáncer de próstata está clasificado como adenocarcinoma o cáncer glandular. La región de la glándula prostática donde el adenocarcinoma es más frecuente es la zona periférica. Inicialmente, pequeños grupos de células cancerosas quedan confinadas sino en las glándulas prostáticas normales, dando como resultado una enfermedad conocida como carcinoma in situ o neoplasia intraepitelial prostática (NIP). Con el paso del tiempo, estas células cancerosas comienzan a multiplicarse y difundirse al tejido prostático circundante (estroma) formando un tumor. Opcionalmente el tumor puede desarrollarse lo bastante grande como para invadir los órganos próximos tales como las vesículas seminales o el recto, o las células tumorales pueden desarrollar la capacidad para circular en el torrente sanguíneo y en el sistema linfático. El cáncer de próstata más frecuentemente se metastasiza a los huesos, los ganglios linfáticos, el recto y la vejiga.

La identificación del cáncer de próstata generalmente implica el examen digital del recto o la prueba del antígeno específico de la próstata (PSA). Durante el examen digital del recto, el sanitario profesional comprueba el tamaño, forma y textura de la próstata en las áreas que son irregulares, duras o con bulto que puedan ser indicio del cáncer de próstata. La prueba del PSA mide la concentración en la sangre del antígeno específico de la próstata, una enzima producida por la próstata. Las concentraciones de PSA inferiores a 4 ng/ml se consideran generalmente normales; las concentraciones de PSA entre 4 y 10 ng/ml indican un riesgo de cáncer de próstata superior al normal, pero el riesgo no parece aumentar en este intervalo de seis puntos. Cuando la concentración de PSA es superior a 10 ng/ml la asociación al cáncer se hace más acusada.

Mientras que la medición del ensayo del PSA en el suero ha demostrado ser una herramienta de diagnóstico muy útil, la utilidad de la prueba del PSA presenta limitaciones. Por ejemplo, la prueba del PSA no es capaz de identificar fiablemente la enfermedad en su etapa inicial. Asimismo, no existe ningún marcador disponible para predecir la aparición de la etapa metastásica por lo general mortal de la enfermedad. El diagnostico de cáncer de próstata metastásico se consigue mediante intervención quirúrgica abierta o linfadenectomía pélvica laparoscópìca, exploraciones con radionúclidos de todo el cuerpo, radiografía del esqueleto y/o análisis por biopsia de la lesión ósea. Evidentemente, es mejor la formación de imágenes y otros procedimientos de diagnóstico menos invasivos prometen facilitar la dificultad que estos procedimientos ponen sobre un paciente, así como opciones terapéuticas mejoradoras. Por consiguiente, hay necesidad de reactivos que sean capaces de identificar fiablemente la enfermedad en la etapa inicial, de predecir la sensibilidad a la metástasis y detectar con precisión los tumores para ayudar en el tratamiento, diagnóstico, pronóstico y control del cáncer de próstata. La presente invención satisface éstas y otras necesidades.

Breve sumario de la invención

La presente invención proporciona nuevos fragmentos de anticuerpo humanizado que se unen específicamente al antígeno de la superficie de las células de la próstata (PSCA) para su utilización en el diagnóstico del cáncer, para proporcionar un pronóstico de la evolución del cáncer, y para la formación de imágenes del cáncer, específicamente del cáncer de próstata, de vejiga y pancreático.

En una primera forma de realización, la invención proporciona un fragmento de anticuerpo humanizado que se une específicamente al PSCA en la superficie de las células cancerosas. Ejemplos de fragmentos de anticuerpo de la presente invención incluyen un scFv, un dímero scFv (diacuerpo), un dímero sc-Fv-CH3 (minicuerpo) y un scFv-Fc, en el que el fragmento de anticuerpo comprende las secuencias de las regiones de la cadena ligera variable (VL) y de la cadena pesada variable (VH) tal como se muestra en figura 1. En aspectos de esta forma de realización, el dímero scFv puede incluir dos monómeros scFv unidos por un enlazador. Los enlazadores adecuados incluyen secuencias peptídicas, de las cuales, la secuencia [(GGGS)2] es un ejemplo favorable En otros aspectos de la presente forma de realización, el fragmento de anticuerpo presenta una afinidad de KD= 2,0 nM o inferior o KD= 5,5 nM o inferior. Los fragmentos de anticuerpos convenientes para la puesta en práctica de la invención incluyen los dímeros scFv (diacuerpos) y un dímero sc-Fv-CH3 (minicuerpos).

En una segunda forma de realización, la presente invención proporciona un procedimiento de diagnóstico de un cáncer que sobreexpresa el PSCA de la superficie de las células (a) administrando a un paciente un fragmento de anticuerpo humanizado que se une específicamente al PSCA sobre la superficie de las células cancerosas, en el que el fragmento de anticuerpo puede ser un scFv, un dímero scFv (diacuerpo), un dímero sc-Fv-CH3 (minicuerpo) o un scFv-Fc, y (b) determinando si la proteína PSCA se sobreexpresa o no en el paciente utilizando formación de imágenes moleculares in vivo, diagnosticando de este modo el cáncer que sobreexpresa el PSCA de la superficie celular. En un aspecto conveniente, el fragmento de anticuerpo comprende las secuencias de las regiones de la cadena ligera variable (VL) y cadena pesada variable (VH) como se muestra en la figura 1.

En una tercera forma de realización, la presente invención proporciona un procedimiento de diagnóstico de un cáncer que sobreexpresa el PSCA de la superficie de las células (a) administrando a un paciente un fragmento de anticuerpo humanizado que se une específicamente al PSCA sobre la superficie de las células cancerosas, en el que el fragmento de anticuerpo puede ser un scFv, un dímero scFv (diacuerpo), un dímero sc-Fv-CH3 (minicuerpo) o un scFv-Fc, y (b) determinando si la proteína PSCA se sobreexpresa o no en el paciente utilizando la formación de imágenes moleculares in vivo, proporcionando de este modo un pronóstico para el cáncer que sobreexpresa el PSCA de la superficie celular. En un aspecto conveniente, el fragmento de anticuerpo comprende las secuencias de las regiones de la cadena ligera variable (VL) y cadena pesada variable (VH) como se muestra en la figura 1.

En los aspectos de la segunda y tercera formas de realización, el cáncer que sobreexpresa el PSCA de la superficie celular incluye el cáncer de próstata, el cáncer de vejiga y el cáncer pancreático. En aspectos adicionales de la segundo y tercera formas de realización, el fragmento humanizado está unido a un resto detectable. Ejemplos de restos detectables incluyen un radionúclido, una nanopartícula, un colorante fluorescente, un marcador fluorescente

649911123124131

y una enzima. Ejemplos de restos detectables que son radionúclidos incluyen Cu, mTc, ln, l, l o l. Entre los procedimientos de formación de imágenes moleculares in vivo que pueden utilizarse en la puesta en práctica de la segunda y tercera formas de realización están MRI, SPECT, PET, y formación de imágenes moleculares en gamma-cámara planar.

Una cuarta forma de realización de la invención suministra un procedimiento para proveer un diagnostico o pronóstico para el cáncer que sobre expresa el PSCA de la superficie celular (a) poniendo en contacto una muestra biológica con un fragmento de anticuerpo humanizado que se une específicamente a PSCA en la superficie de las células cancerosas, en el que el fragmento de anticuerpo puede ser un scFv, un dímero... [Seguir leyendo]

1. Fragmento de anticuerpo humanizado que se une específicamente al antígeno de las células troncales de la próstata (PSCA) en la superficie de las células cancerosas, en el que dicho fragmento se selecciona de entre el grupo constituido por scFv, un dímero scFv (diacuerpo), un dímero sc-Fv-CH3 (minicuerpo) y scFv-Fc, y en el que dicho fragmento de anticuerpo comprende las secuencias de las regiones de la cadena ligera variable (VL) y de la cadena pesada variable (VH) representadas en la figura 1.

2. Fragmento de anticuerpo humanizado según la reivindicación 1, en el que dicho dímero scFv comprende dos monómeros scFv unidos por un enlazador.

3. Fragmento de anticuerpo humanizado según la reivindicación 2, en el que dicho enlazador comprende una secuencia peptídica.

4. Fragmento de anticuerpo humanizado según la reivindicación 3, en el que dicha secuencia peptídica comprende la secuencia [(GGGS)2].

5. Fragmento de anticuerpo humanizado según la reivindicación 1, en el que dicho fragmento de anticuerpo presenta una afinidad de KD = 5,5 nM o inferior, preferentemente KD= 2,0 nM o inferior.

6. Fragmento de anticuerpo humanizado según la reivindicación 1, en el que dicho fragmento de anticuerpo es un dímero scFv (diacuerpo), o un dímero sc-Fv-CH3 (minicuerpo).

7. Fragmento de anticuerpo humanizado según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, para su utilización en el tratamiento o la prevención de un cáncer que sobreexpresa el PSCA de la superficie celular en un paciente.

8. Fragmento de anticuerpo humanizado que se une específicamente al PSCA en la superficie de las células cancerosas, en el que dicho fragmento se selecciona de entre el grupo constituido por scFv, un dímero scFv (diacuerpo), un dímero sc-Fv-CH3 (minicuerpo) y scFv-Fc para su utilización en un procedimiento de diagnóstico de un cáncer que sobreexpresa el PSCA de la superficie celular, comprendiendo el procedimiento las etapas siguientes:

(a) administrar dicho fragmento de anticuerpo humanizado a un paciente; y

(b) determinar si la proteína PSCA se sobreexpresa o no en el paciente utilizando la formación de imágenes moleculares in vivo, diagnosticando de este modo el cáncer que sobreexpresa el PSCA de la superficie celular,

en la que dicho fragmento de anticuerpo comprende las secuencias de las regiones de la cadena ligera variable (VL) y cadena pesada variable (VH) representadas en la figura 1.

9. Fragmento de anticuerpo humanizado que se une específicamente al PSCA en la superficie de las células cancerosas, en el que dicho fragmento se selecciona de entre el grupo constituido por scFv, un dímero scFv (diacuerpo), un dímero sc-Fv-CH3 (minicuerpo) y scFv-Fc para su utilización en un procedimiento de pronóstico de un cáncer que sobreexpresa el PSCA de la superficie celular, comprendiendo el procedimiento las etapas siguientes:

(a) administrar dicho fragmento de anticuerpo humanizado a un paciente; y

(b) determinar si la proteína PSCA se sobreexpresa o no en el paciente utilizando la formación de imágenes moleculares in vivo, pronosticando de este modo el cáncer que sobreexpresa el PSCA de la superficie celular,

en la que dicho fragmento de anticuerpo comprende las secuencias de las regiones de la cadena ligera variable (VL) y cadena pesada variable (VH) como se muestra en la figura 1.

10. Fragmento de anticuerpo humanizado según la reivindicación 8 ó 9, en el que la formación de imágenes moleculares in vivo se selecciona de entre el grupo constituido por detección por formación de imágenes por resonancia magnética (MRI), tomografía computarizada de emisión de un fotón único (SPECT), tomografía de emisión de positrones (PET) y formación de imágenes en gamma-cámara planar.

11. Procedimiento in vitro para proporcionar un diagnóstico o pronóstico de un cáncer que sobreexpresa el PSCA de la superficie celular, comprendiendo el procedimiento las etapas siguientes:

(a) poner en contacto una muestra biológica con un fragmento de anticuerpo humanizado que se une específicamente al PSCA en la superficie de las células cancerosas, en el que dicho fragmento se selecciona de entre el grupo constituido por scFv, un dímero scFv (diacuerpo), un dímero sc-Fv-CH3 (minicuerpo) y scFv-Fc, en el que dicho fragmento de anticuerpo comprende las secuencias de las regiones de la cadena ligera variable (VL) y cadena pesada variable (VH) representadas en la figura 1; y

(b) determinar si la proteína PSCA se sobreexpresa o no en la muestra biológica, proporcionando así un diagnóstico

o pronóstico del cáncer que sobreexpresa el PSCA de la superficie celular.

12. Procedimiento según la reivindicación 11, en el que la muestra biológica es una biopsia de tejido o una muestra 5 de líquido corporal, preferentemente sangre, orina o líquido prostático.

13. Fragmento de anticuerpo humanizado según la reivindicación 8 ó 9 o procedimiento según la reivindicación 11, en el que el fragmento de anticuerpo humanizado está unido a un resto detectable, seleccionándose preferentemente de entre el grupo constituido por un radionúclido, una nanopartícula, un colorante fluorescente, un

10 marcador fluorescente y una enzima.

14. Fragmento de anticuerpo humanizado según la reivindicación 8 ó 9 o procedimiento según la reivindicación 11, en el que el cáncer que sobreexpresa el PSCA de la superficie celular se selecciona de entre el grupo constituido por cáncer de próstata, cáncer de vejiga y cáncer pancreático.