Método de detección de un rabdomiosarcoma que utiliza una muestra derivada de un líquido corporal.
Método para detectar un rabdomiosarcoma que comprende evaluar un aumento significativo en la expresión de por lo menos una clase de miARN seleccionada de entre el grupo que consiste en hsa-miR-133a,
hsa-miR-133b y hsa-miR-206 en una muestra derivada de líquido corporal, en el que el líquido corporal es la sangre y la muestra derivada de líquido corporal es el plasma o el suero.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/JP2011/058843.
Solicitante: LSIP, LLC.
Inventor/es: HOSOI,HAJIME, MIYACHI,MITSURU.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12Q1/68 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
PDF original: ES-2549452_T3.pdf
Fragmento de la descripción:
Método de detección de un rabdomiosarcoma que utiliza una muestra derivada de un líquido corporal.
Campo técnico
La presente invención se refiere a un método para detectar un rabdomiosarcoma que utiliza una muestra derivada de un líquido corporal.
Técnica anterior
Se ha planteado el desarrollo de una técnica de diagnóstico no invasiva utilizando ADN libre derivado de un tumor en suero (documentos no de patente 1 y 2) . En los últimos años se ha confirmado la existencia de microARN (miARN) , ARN no codificantes que no se traducen para proporcionar proteínas. Se ha informado de que sus perfiles de expresión son específicos de tejido o de tumor (documentos no de patente 3 y 4) . En cánceres pediátricos también, se informa en un estudio utilizando estirpes celulares (documento no de patente 5) e que los perfiles de expresión difieren dependiendo del tumor. En el rabdomiosarcoma, que es el sarcoma de tejidos blandos más común en cánceres pediátricos, se revela que se aumenta la expresión de miARN expresados específicamente en el músculo (documentos no de patente 5 y 6) . Adicionalmente, también se revela que existen miARN de origen tumoral en el suero. Por tanto, se sugiere la utilidad de miARN como biomarcadores en cáncer colorrectal, linfoma, cáncer de próstata, cáncer de hígado, y similares (documentos no de patente 7-10) .
Documentos de la técnica anterior
Documentos no de patente Documento no de patente 1: Gotoh, et al. J Clin Oncol 23: 5205-5210, 2005
Documento no de patente 2: Yagyu, et al. Clin Cancer Res 14: 7011-7019, 2008
Documento no de patente 3: Calin GA, et al. Nat Rev Cancer; 6: 857-866, 2006
Documento no de patente 4: Lu J, et al. Nature; 435: 834-838, 2005
Documento no de patente 5: Wei JS, et al. Clin Cancer Res; 15: 5560-5568, 2009
Documento no de patente 6: Subramanian S, et al. Oncogene; 27: 2015-2026, 2008
Documento no de patente 7: Ng EKO, et al. Gut; 58: 1375-1381, 2009
Documento no de patente 8: Mitchell PS, et al. PNAS; 105: 10513-10518, 2008
Documento no de patente 9: Lawrie CH, et al. Br J Haematol; 141: 672-675, 2008
Documento no de patente 10: Yamamoto Y, et al. Biomarkers; 14: 529-538, 2009 Descripción de la invención Problema que debe solucionar la invención Un objetivo de la presente invención es proporcionar un método de detección de un rabdomiosarcoma que es difícil de diagnosticar fácilmente.
Medios para solucionar el problema
Los inventores cuantificaron hsa-miR-1, hsa-miR-133a, hsa-miR-133b y hsa-miR-206, un grupo de miARN expresados específicamente en el músculo, en muestras derivadas de líquidos corporales de pacientes con tumor pediátrico; e investigaron la posibilidad de diagnóstico no invasivo de rabdomiosarcoma. Como resultado, los inventores descubrieron que podía detectarse rabdomiosarcoma mediante estos miARN.
La presente invención proporciona los siguientes métodos para detectar rabdomiosarcomas.
1. Un método para detectar rabdomiosarcoma que comprende evaluar un aumento significativo en la expresión de al menos una clase de miARN seleccionado del grupo que consiste en hsa-miR-133a, hsa-miR-133b y hsa-miR-206 en una muestra derivada de líquido corporal, en
el que el líquido corporal es sangre y la muestra derivada de líquido corporal es plasma o suero.
2. El método para detectar rabdomiosarcoma según el punto anterior 1, en el que el patrón de la detección es un aumento significativo en la cantidad de expresión del al menos uno seleccionado del grupo que consiste en hsa-miR-133a, hsa-miR-133b y hsa-miR-206 en la muestra derivada de líquido corporal, en comparación con la de un sujeto normal, en el que el líquido corporal es sangre y la muestra derivada de líquido corporal es plasma o suero.
3. El método para detectar rabdomiosarcoma según el punto anterior 1, en el que la evaluación comprende evaluar la expresión de al menos una clase de miARN seleccionado del grupo que consiste en hsa-miR-133a, hsa-miR-133b y hsa-miR-206.
4. El método para detectar rabdomiosarcoma según el punto anterior 1, en el que la evaluación comprende evaluar la expresión de al menos hsa-miR-206.
5. El método para detectar rabdomiosarcoma según el punto anterior 1 detectado mediante PCR en tiempo real.
Efectos de la invención
El rabdomiosarcoma es uno de los tumores que son difíciles de diagnosticar. Sin embargo, según la presente invención, la detección de un rabdomiosarcoma, que se consideraba imposible en el pasado, puede lograrse utilizando una muestra de líquido corporal.
Con respecto al rabdomiosarcoma, es importante para la mejora del pronóstico extirpar completamente el tumor de rabdomiosarcoma antes de la quimioterapia y radioterapia; también es importante realizar un diagnóstico provisional de manera preoperatoria con el fin de determinar un plan de operación cuyo fin sea la extirpación completa inicial. La presente invención permite un diagnóstico más rápido y más preciso del rabdomiosarcoma, y puede esperarse una mejora en los resultados del tratamiento del rabdomiosarcoma.
Breve descripción de los dibujos
La figura 1 representa un aumento en la expresión de microARN específicos de músculo en estirpes celulares de rabdomiosarcoma. El eje de ordenadas es una razón de cada miARN específico de músculo con respecto a hsamiR-16. RMS: rabdomiosarcoma, NB: neuroblastoma, EWS: sarcoma de Ewing, MRT: tumor rabdoide maligno.
La figura 2 representa un aumento en la expresión de microARN específicos de músculo en muestras de tumor de rabdomiosarcoma. El eje de ordenadas es una razón de cada miARN específico de músculo con respecto a hsamiR-16. RMS: rabdomiosarcoma, no RMS: tumores distintos de rabdomiosarcoma.
La figura 3 representa las cantidades de expresión de hsa-miR-1, hsa-miR-206, hsa-miR-133a y hsa-miR-133b en sobrenadantes de cultivo de las estirpes celulares de rabdomiosarcoma. El eje de ordenadas es una razón de miARN específico de músculo con respecto a hsa-miR-16. RMS: rabdomiosarcoma, NB: neuroblastoma, EWS: sarcoma de Ewing, MRT: tumor rabdoide maligno.
La figura 4 es una comparación de hsa-miR-1 en suero entre sujetos normales, niños afectados por cáncer y niños afectados por rabdomiosarcoma (RMS) . El eje de ordenadas es una razón de hsa-miR-1 con respecto a hsa-miR-16. RMS: rabdomiosarcoma, no RMS: tumores distintos de rabdomiosarcoma.
La figura 5 es una comparación de hsa-miR-133a en suero entre sujetos normales, niños afectados por cáncer y niños afectados por rabdomiosarcoma (RMS) . El eje de ordenadas es una razón de hsa-miR-133a con respecto a hsa-miR-16. RMS: rabdomiosarcoma, no RMS: tumores distintos de rabdomiosarcoma.
La figura 6 es una comparación de hsa-miR-133b en suero entre sujetos normales, niños afectados por cáncer y niños afectados por rabdomiosarcoma (RMS) . El eje de ordenadas es una razón de hsa-miR-133b con respecto a hsa-miR-16. RMS: rabdomiosarcoma, no RMS: tumores distintos de rabdomiosarcoma.
La figura 7 es una comparación de hsa-miR-206 en suero entre sujetos normales, niños afectados por cáncer y niños afectados por rabdomiosarcoma (RMS) . El eje de ordenadas es una razón de hsa-miR-206 con respecto a hsa-miR-16. RMS: rabdomiosarcoma, no RMS: tumores distintos de rabdomiosarcoma.
La figura 8 representa una disminución en la razón de cada miARN específico de músculo con respecto a hsa-miR16 en niños afectados por RMS tras el tratamiento. El eje de ordenadas es una razón del miARN específico de músculo con respecto a hsa-miR-16.
La figura 9 representa la estabilidad de miARN en suero humano. La estabilidad de microARN en suero se estudió en almacenamiento a 4ºC. Los valores de Ct tanto de hsa-miR-16 como de hsa-miR-133b tienden a aumentar
gradualmente a medida que transcurre el tiempo de almacenamiento, y aumentaron en 3 y 4 en el día 30 (disminución hasta 1/16 y 1/8 como cantidad absoluta) . Por otro lado, no se observó un gran cambio en la razón de hsa-miR-133b con respecto a hsa-miR-16.
La figura 10 representa el reflejo del miARN específico de músculo en suero sobre la actividad patológica de rabdomiosarcoma.
La figura 11 representa la detección adicional del miARN específico de músculo en líquido corporal (líquido cefalorraquídeo y efusión pleural) distinto de suero de niños con rabdomiosarcoma.
La figura 12 representa el reflejo del miARN específico de músculo en líquido corporal sobre el estado del rabdomiosarcoma.
Modos de poner en práctica la invención
A continuación se muestran las secuencias de hsa-miR-1, hsa-miR-133a, hsa-miR-133b y hsa-miR-206,... [Seguir leyendo]
Reivindicaciones:
1. Método para detectar un rabdomiosarcoma que comprende evaluar un aumento significativo en la expresión de por lo menos una clase de miARN seleccionada de entre el grupo que consiste en hsa-miR-133a, hsa-miR-133b y hsa-miR-206 en una muestra derivada de líquido corporal, en el que el líquido corporal es la sangre y la muestra derivada de líquido corporal es el plasma o el suero.
2. Método para detectar un rabdomiosarcoma según la reivindicación 1, en el que el patrón de la detección es un aumento significativo en la cantidad de expresión de dicha por lo menos una seleccionada de entre el grupo que consiste en hsa-miR-133a, hsa-miR-133b y hsa-miR-206 en la muestra derivada de líquido corporal, en comparación con la de un sujeto normal, en el que el líquido corporal es la sangre y la muestra derivada de líquido corporal es el plasma o el suero.
3. Método para detectar un rabdomiosarcoma según la reivindicación 1, en el que la evaluación comprende evaluar la expresión de una clase de miARN seleccionada de entre el grupo que consiste en hsa-miR-133a, hsa-miR-133b y hsa-miR-206.
4. Método para detectar un rabdomiosarcoma según la reivindicación 1, en el que la evaluación comprende evaluar la expresión de por lo menos hsa-miR-206. 20
5. Método para detectar un rabdomiosarcoma según la reivindicación 1, detectado mediante PCR en tiempo real.
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