Ensayos de actividad de serotipo A de toxina botulínica de base inmunológica.

Método de detección de actividad de NTBo/A en un mamífero, que comprende las etapas de:



a. tratar una célula de una línea celular establecida que expresa SNAP-25 con una muestra de prueba que comprende una NTBo/A, en el que la célula de una línea celular establecida es susceptible de intoxicación por NTBo/A, en el que la célula de una línea celular establecida es susceptible de intoxicación por NTBo/A en aproximadamente 500 pM o menos de una NTBo/A, y en el que dicha célula se selecciona del grupo que consiste en una línea celular SiMa, y una línea celular Neuro-2a;

b. aislar de las células tratadas un producto de corte de SNAP-25 que tiene un extremo carboxilo-terminal en el residuo P1 del enlace escindible del sitio de corte de NTBo/A;

c. poner en contacto el producto de corte de SNAP-25 con un anticuerpo monoclonal anti-SNAP-25 unido a un soporte de fase sólida, en el que el anticuerpo anti-SNAP-25 se une a un epítopo que comprende un extremo carboxilo-terminal en el residuo P1 del enlace escindible del sitio de corte de NTBo/A de un producto de corte de SNAP-25, en el que el anticuerpo anti-SNAP-25 tiene una constante de velocidad de asociación para un epítopo que no comprende una glutamina en el extremo carboxilo-terminal del enlace escindible del sitio de corte de NTBo/A de un producto de corte de SNAP-25 de menos de 1 x 101 M-1 s-1; y el anticuerpo anti-SNAP-25 tiene una constante de disociación de equilibrio para el epítopo de menos de 0,450 nM;

d. detectar la presencia de un complejo antígeno-anticuerpo que comprende el anticuerpo anti-SNAP-25 y el producto de corte de SNAP-25 que comprende un extremo carboxilo-terminal en el residuo P1 del enlace escindible del sitio de corte de NTBo/A del producto de corte de SNAP-25;

en el que la detección del complejo antígeno-anticuerpo en la etapa d es indicativa de actividad de NTBo/A.

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E16153819.

Solicitante: ALLERGAN, INC..

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 2525 DUPONT DRIVE IRVINE, CA 92612 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: AOKI, KEI, ROGER, FERNANDEZ-SALAS,ESTER, WANG,JOANNE, HODGES,D. DIANE, GARAY,PATTON E, WONG,LINA S.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C07K16/12 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › contra materiales bacterianos.
  • C12Q1/37 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › peptidasa o proteinasa.
  • G01N33/50 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Análisis químico de material biológico, p. ej. de sangre o de orina; Ensayos mediante métodos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas con grupos coordinadores; Ensayos inmunológicos (procedimientos de medida o ensayos diferentes de los procedimientos inmunológicos en los que intervienen enzimas o microorganismos, composiciones o papeles reactivos a este efecto, procedimientos para preparar estas composiciones, procedimientos de control sensibles a las condiciones del medio en los procedimientos microbiológicos o enzimáticos C12Q).
  • G01N33/566 G01N 33/00 […] › utilizando un soporte específico o proteínas receptoras como reactivos para la formación de uniones por ligando.
  • G01N33/569 G01N 33/00 […] › para microorganismos, p. ej. protozoarios, bacterias, virus.
  • G01N33/68 G01N 33/00 […] › en los que intervienen proteínas, péptidos o aminoácidos.

PDF original: ES-2755505_T3.pdf

 

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