Cambio de temperatura para una expresión con mayor rendimiento de polipéptidos en levaduras y otras células transformadas.
Un método para producir una proteína deseada, que comprende:
(a) cultivar células eucariotas que comprenden uno o más genes que proporcionan la expresión de dicha proteína deseada a una primera temperatura;
y
(b) cultivar dichas células eucariotas a una segunda temperatura y permitir que dichas células eucariotas produzcan dicha proteína deseada, en donde el cultivo comprende una fase de alimentación discontinua;
en donde
(i) dichas células eucariotas comprenden células de levadura que son células de Pichia pastoris;
(ii) dicha proteína deseada comprende un anticuerpo de longitud completa que comprende dos cadenas pesadas idénticas y dos cadenas ligeras idénticas;
(iii) dicha primera temperatura es entre 27,5 grados C y 28,5 grados C y dicha segunda temperatura es entre 30 grados C y 31 grados C;
(iv) el promotor o promotores que regulan la transcripción del uno o más genes que codifican dicha proteína deseada no son inducibles por la temperatura;
(v) la etapa (a) comprende cultivar dichas células eucariotas en un medio de cultivo que comprende glicerol como una fuente de carbono hasta que dicho glicerol se agota;
(vi) el método incluye la adición de un bolo de etanol al cultivo concurrentemente con el agotamiento del glicerol; y
(vii) dicho método aumenta el rendimiento de dicha proteína y/o disminuye la abundancia relativa de una o más variantes asociadas al producto en relación con el mismo método realizado sin una diferencia entre dicha primera temperatura y dicha segunda temperatura.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2014/030453.
Solicitante: Alder Biopharmaceuticals, Inc.
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 11804 North Creek Parkway South Bothell, WA 98011 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.
Inventor/es: HARTNER,Franz, McNeill,Patricia,Dianne, LESNICKI,GARY, YOUNG,MARK.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C07K16/00 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales.
- C07K16/18 C07K […] › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › contra materiales animales o humanos.
- C07K16/24 C07K 16/00 […] › contra citoquinas, linfoquinas o interferones.
- C12N1/16 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 1/00 Microorganismos, p.ej. protozoos; Composiciones que los contienen (preparaciones de uso médico que contienen material de protozoos, bacterias o virus A61K 35/66, de algas A61K 36/02, de hongos A61K 36/06; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos bacterianos, p. ej. vacunas bacterianas, A61K 39/00 ); Procesos de cultivo o conservación de microorganismos, o de composiciones que los contienen; Procesos de preparación o aislamiento de una composición que contiene un microorganismo; Sus medios de cultivo. › Levaduras; Sus medios de cultivo.
- C12P21/02 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA. › C12P 21/00 Preparación de péptidos o de proteínas (proteína monocelular C12N 1/00). › que tienen una secuencia conocida de varios aminoácidos, p. ej. glutation.
PDF original: ES-2749751_T3.pdf
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