VACUNAS DE SENSIBILIZACIÓN/REFUERZO DE MALARIA.

La invención se refiere al campo de medicina. Específicamente, la invención se refiere a estrategias de vacuna de sensibilización/refuerzo novedosas que usan vectores adenovirales producidos de forma recombinante y proteínas purificadas en el contexto de un adyuvante para la prevención de malaria falciparum. Antecedentes de la invención La malaria actualmente representa una de las infecciones más frecuentes en áreas tropicales y subtropicales en todo el mundo. Cada año, las infecciones por malaria matan hasta 2,7 millones de personas en países en desarrollo y emergentes. La frecuencia ampliamente extendida y la incidencia elevada de la malaria son una consecuencia de los números crecientes de parásitos resistentes a fármacos y vectores de parásitos resistentes a insecticidas. Otros factores incluyen cambios ambientales y climáticos, alteraciones civiles y movilidad aumentada de las poblaciones. La malaria está causada por parásitos hemoprotozoarios transmitidos por mosquito que pertenecen al género Plasmodium. Cuatro especies de protozoarios de Plasmodium (P. falciparum, P. vivax, P. ovale y P. malariae) son responsables de la enfermedad en el ser humano; muchos otros provocan enfermedad en animales, tales como P. yoelii y P. berghei. P. falciparum es responsable de la mayoría de las infecciones en seres humanos y es el tipo más letal. Los parásitos de malaria tienen un ciclo de vida que consiste en cuatro etapas separadas. Cada una de estas etapas es capaz de inducir respuestas inmunes específicas dirigidas frente al parásito y los antígenos específicos de etapa que se originan de forma correspondiente, aunque la malaria inducida de forma natural no protege frente a la reinfección. Los parásitos de la malaria se transmiten al ser humano por varias especies de mosquitos Anopheles. Los mosquitos infectados inyectan la forma de esporozoito del parásito de malaria en el torrente sanguíneo del mamífero. Los esporozoitos permanecen por pocos minutos en la circulación antes de invadir los hepatocitos. En esta etapa el parásito se localiza en el entorno extracelular y está expuesto a ataque de anticuerpos, principalmente dirigido a la proteína de circumsporozoito (CS), un componente principal de la superficie del esporozoito. Una vez que está en el hígado, el parásito se replica y desarrolla en un esquizonte. Durante esta etapa, el parásito invasor experimentará multiplicación asexual, produciendo hasta 20.000 merozoitos por célula infectada. Durante esta etapa intracelular del parásito, los agentes principales de la respuesta inmune del huésped son los linfocitos T, especialmente los linfocitos T CD8+ (Romero y col. 1989). Después de aproximadamente una semana de la infección hepática, miles de merozoitos se liberan en el torrente sanguíneo y entran a los glóbulos rojos (RBC), volviéndose dianas de respuesta inmune mediada por anticuerpo y citoquinas secretadas por células T. Después de invadir los eritrocitos, los merozoitos experimentan varias etapas de replicación, se transforman en trofozoitos y esquizontes, que se rompen para producir una nueva generación de merozoitos que posteriormente infectan nuevos RBC. La etapa eritrocítica está asociada con enfermedad clínica manifiesta. Un número más pequeño de trofozoitos se puede desarrollar en gametocitos masculinos o femeninos, que son la etapa sexual del parásito. Cuando los mosquitos susceptibles ingieren gametocitos, la fertilización de estos gametos conduce a la formación de cigotos y a la posterior transformación en oocinetos, después en oocistos y finalmente en esporozoitos, que migran a la glándula salivar para completar el ciclo. Las dos ramas principales de la respuesta inmune específica de patógeno que se producen tras la entrada del parásito en el organismo son celular y humoral. El primer brazo, la respuesta celular, se refiere a células T CD8+ y CD4+ que participan en la respuesta inmune. Los linfocitos T citotóxicos (CTL) expresan CD8 y son capaces de destruir específicamente células infectadas que expresan antígenos patógenos en su superficie. Las células T CD4+ o células T auxiliares apoyan el desarrollo de CTL, producen diversas citoquinas y también ayudan a inducir a las células B a dividirse y producir anticuerpos específicos para los antígenos. Durante la respuesta humoral, las células B específicas de un antígeno particular se activan, se replican y se diferencian y producen anticuerpos específicos de antígeno. Ambas ramas de la respuesta inmune son relevantes para la protección frente a la infección de malaria. Cuando los esporozoitos infecciosos viajan al hígado y entran a los hepatocitos, los esporozoitos se vuelven patógenos intracelulares, pasando poco tiempo fuera de la célula infectada. En esta etapa, las células T CD8+ y las células T CD4+ son especialmente importantes porque estas células T y sus productos de citoquina, tales como interferón (IFN-), contribuyen a la destrucción de hepatocitos huésped infectados. La eliminación de los parásitos hepáticos intracelulares en el modelo de malaria murino se ha observado que depende de la respuesta de células T CD8+ dirigidas frente a péptidos expresados por los parásitos en etapa hepática (Hoffman y Doolan, 2000). El agotamiento de células T CD8+ anula la protección frente a la exposición a esporozoito y la transferencia adoptiva de células T CD8+ a animales sin tratar confiere protección. Cuando una infección de malaria alcanza la etapa eritrocítica en la que los merozoitos se replican en RBC, también se observa que los merozoitos circulan libremente en el torrente sanguíneo. Debido a que el eritrocito no expresa moléculas de CMH de Clase I o Clase II necesarias para la interacción afín con células T, se piensa que las 2 E05808091 04-11-2011   respuestas de anticuerpos son más relevantes en esta etapa. En conclusión, un enfoque de vacuna de malaria posible sería más beneficioso si el mismo indujera una respuesta inmune celular marcada así como también una respuesta inmune humoral marcada para hacer frente a las diferentes etapas en las que el parásito aparece en el cuerpo humano. Los enfoques actuales hacia el desarrollo de vacuna de malaria se pueden clasificar de acuerdo con las diferentes etapas del desarrollo del parásito, como se ha descrito anteriormente. Se pueden distinguir tres tipos de vacunas posibles: - Vacunas pre-eritrocíticas, que se dirigen frente a hepatocitos infectados por esporozoitos y/o esquizontes. Históricamente, este enfoque ha estado dominado por estrategias basadas en (CS). Debido a que la fase pre-eritrocítica de infección es asintomática, una vacuna pre-eritrocítica conferiría de forma ideal inmunidad estéril, mediada por respuesta inmune humoral y celular y evitaría completamente la infección por malaria latente. - Las vacunas de etapa sanguínea asexual, que se dirigen frente a los RBC infectados o al propio merozoito, se diseñan para minimizar la gravedad clínica. Estas vacunas deberían reducir la morbilidad y la mortalidad y tienen por objeto evitar que el parásito entre y/o se desarrolle en los eritrocitos. - Las vacunas bloqueantes de la transmisión, que se diseñan para obstaculizar el desarrollo del parásito en el huésped de mosquito. Este tipo de vacuna favorecería la reducción de los índices de infección por malaria en toda la población. Finalmente, la fiabilidad del desarrollo de vacunas de malaria de combinación que se dirigen a etapas múltiples del ciclo de vida del parásito es lo que se está persiguiendo con las vacunas denominadas multicomponente y/o multietapa. Actualmente no está disponible una vacuna frente a la malaria disponible en el mercado, aunque el desarrollo de vacuna frente a la malaria se inició hace más de 30 años. La inmunización de roedores, primates no humanos y seres humanos con esporozoitos atenuados por radiación confería protección frente a la exposición posterior con esporozoitos viables (Nussenzweig y col. 1967; Clyde y col. 1973). Sin embargo, hasta ahora el gasto y la carencia de un sistema de cultivo a gran escala fiable para la producción de esporozoitos irradiados han evitado la aplicación generalizada de tales vacunas (Luke y col. 2003). Hasta la fecha los candidatos de vacuna más prometedores ensayados en seres humanos se han basado en un número pequeño de antígenos de superficie de esporozoitos. La proteína CS es el único antígeno de P. falciparum que se ha demostrado que previene de manera constante la malaria cuando se usa como la base de inmunización activa en seres humanos frente a la infección transmitida por mosquito, aunque a niveles que con frecuencia son insuficientes. El análisis teórico ha indicado que la protección de la vacuna así como la eficacia de la vacuna debe ser superior al 85 % o de otra forma pueden escapar mutantes que son más virulentos... [Seguir leyendo]

- un adenovirus recombinante sin capacidad de replicación en un excipiente farmacéuticamente aceptable, comprendiendo dicho adenovirus un ácido nucleico heterólogo que codifica un antígeno de circumsporozoito (CS) que procede de un parásito que provoca la malaria; y - un antígeno proteináceo potenciado con adyuvante; en el que dicho adenovirus recombinante se selecciona entre el grupo que consiste en adenovirus humano de serotipo 11, 24, 26, 34, 35, 48, 49 y 50 y en el que dicho adenovirus recombinante sin capacidad de replicación es una composición de sensibilización y dicho antígeno proteináceo potenciado con adyuvante es una composición de refuerzo. 2. Un kit de partes de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho adenovirus recombinante es adenovirus humano de serotipo 35. 3. Un kit de partes de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en el que dicho antígeno proteináceo comprende una proteína CS, o un fragmento inmunogénico de la misma, que procede de un parásito que provoca la malaria. 4. Un kit de partes de acuerdo con la reivindicación 3, en el que dicho antígeno proteináceo comprende una proteína híbrida de proteína CS o un fragmento inmunogénico de la misma fusionado al antígeno de superficie del virus de la hepatitis B (HBsAg), en forma de partículas de lipoproteína con HBsAg. 5. Un kit de partes de acuerdo con la reivindicación 4 en el que el antígeno proteináceo comprende RTS,S. 6. Un kit de partes de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en el que dicho antígeno proteináceo está potenciado con adyuvante con un adyuvante que comprende QS21 y 3D-MPL. 7. Un kit de partes de acuerdo con la reivindicación 6, en el que el adyuvante comprende además liposomas que contienen colesterol. 8. Un kit de partes de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que dicho parásito que provoca la malaria es Plasmodium falciparum. 9. Un kit de partes de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en el que dicho ácido nucleico heterólogo está optimizado con codón para aumentar la producción de la proteína codificada en un mamífero, preferentemente un ser humano. 10. Un kit de partes de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en el que dicho adenovirus recombinante está presente en una mezcla con un adyuvante. 11. Un kit de partes que comprende: - un adenovirus de simio, canino o bovino recombinante sin capacidad de replicación en un excipiente farmacéuticamente aceptable, comprendiendo dicho adenovirus un ácido nucleico heterólogo que codifica un antígeno de circumsporozoito (CS) optimizado con codón y que procede de Plasmodium falciparum; y - un antígeno proteináceo potenciado con adyuvante que comprende RTS,S; en el que dicho adenovirus recombinante sin capacidad de replicación es una composición de sensibilización y dicho antígeno proteináceo potenciado con adyuvante es una composición de refuerzo. 12. Un kit de partes de acuerdo con la reivindicación 11, en el que dicho antígeno proteináceo está potenciado con adyuvante con un adyuvante que comprende QS21 y 3D-MPL. 13. Un kit de partes de acuerdo con la reivindicación 12, en el que el adyuvante comprende además liposomas que contienen colesterol. 14. Uso de un adenovirus recombinante sin capacidad de replicación que comprende un ácido nucleico heterólogo que codifica un antígeno de CS, y que procede de un parásito que provoca la malaria, y de un antígeno proteináceo potenciado con adyuvante en la preparación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de la malaria, en el que dicho adenovirus recombinante es un adenovirus de simio, canino o bovino o un adenovirus humano de serotipo 11, 24, 26, 34, 35, 48, 49 ó 50 y en el que dicho adenovirus recombinante sin capacidad de replicación se usa como una composición de sensibilización y dicho antígeno proteináceo potenciado con adyuvante se usa como una composición de refuerzo. 15. Uso de acuerdo con la reivindicación 14, en el que dicho antígeno proteináceo comprende una proteína CS o un fragmento inmunogénico de la misma, que procede de un parásito que provoca la malaria. 16. Uso de acuerdo con la reivindicación 14 ó 15, en el que dicho parásito que provoca la malaria es Plasmodium 28 E05808091 04-11-2011   falciparum. 17. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 14-16, en el que dicho antígeno proteináceo comprende una proteína híbrida de proteína CS o un fragmento inmunogénico de la misma fusionado al antígeno de superficie del virus de la hepatitis B (HBsAg), en forma de partículas de lipoproteína con HBsAg. 18. Uso de acuerdo con la reivindicación 17, en el que dicho antígeno proteináceo potenciado con adyuvante comprende RTS,S. 19. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 14-18, en el que dicho antígeno proteináceo está potenciado con adyuvante con QS21 y 3D-MPL. 20. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 14-19, en el que dicho ácido nucleico heterólogo está optimizado con codón para aumentar la producción de la proteína codificada en un mamífero, preferentemente un ser humano. 29 E05808091 04-11-2011   E05808091 04-11-2011   31 E05808091 04-11-2011   32 E05808091 04-11-2011   33 E05808091 04-11-2011   34 E05808091 04-11-2011   E05808091 04-11-2011   36 E05808091 04-11-2011   37 E05808091 04-11-2011   38 E05808091 04-11-2011   39 E05808091 04-11-2011   E05808091 04-11-2011   41 E05808091 04-11-2011