Tampones para controlar el pH de las proteínas morfogenéticas óseas.

Solución que comprende una proteína morfogenética ósea y un tampón acuoso de glicilglicina.

Tampones para controlar el pH de las proteínas morfogenéticas óseas.

Referencia cruzada con las solicitudes relacionadas

La presente solicitud reivindica prioridad y los derechos de la solicitud de patente provisional US nº 61/243.383, presentada el 17 de septiembre 2009, cuyos contenidos se incorporan como referencia en la presente memoria.

Campo técnico de la invención

La presente invención se refiere a composiciones para estabilizar el pH de composiciones de proteínas morfogenéticas óseas.

Antecedentes

La estabilidad de las soluciones y las formulaciones liofilizadas de proteínas con nudo de cisteína y las proteínas de la superfamilia TGF-beta, que incluye la familia de proteínas morfogenéticas óseas (BMP) , depende del pH de la formulación. Estas proteínas son básicas y, cuando se añaden a un tampón neutro, aumenta el pH. La adición de bajas concentraciones de estas proteínas no afecta significativamente el pH resultante de la formulación. Sin embargo, a medida que aumenta la concentración de estas proteínas en la formulación, aumenta el pH de la formulación, con lo que se reduce la estabilidad de estas formulaciones. Por consiguiente, para devolver la formulación a un pH deseado, se añade un ácido fuerte, tal como HCl. Se utilizan ácidos fuertes para reducir el volumen requerido para devolver el pH al intervalo deseado. Sin embargo, la adición de HCl aumenta la fuerza iónica de las formulaciones, disminuyendo así su estabilidad. Por consiguiente, existe una necesidad de identificar nuevos procedimientos y composiciones que controlen mejor el pH de las proteínas con nudo de cisteína y las proteínas de la superfamilia TGF-beta, incluyendo BMP.

Murakami Narumichi et al. (2002) Journal of Biomedical Materials Research 62 (2) : 169-174 divulgan rhBMP-2 como solución en un tampón que contiene 2, 5% de glicina. Los documentos WO 01/78687, EP 1374905, EP 1348450 y WO 0023123 divulgan la utilización de agentes acidificantes en la preparación de composiciones farmacéuticas que comprenden varias proteínas morfogenéticas óseas. Sin embargo, ninguno de estos documentos da a conocer soluciones tampón que comprenden proteínas morfogenéticas óseas y tampones de glicilglicina o ácido tartárico.

Sumario de la invención

La presente invención se basa en el descubrimiento de que ciertos tampones aumentan la estabilidad de las formulaciones de proteínas con nudo de cisteína y de las proteínas de la superfamilia TGF-beta, que incluyen la familia de proteínas morfogenéticas óseas (BMP) , específicamente las formulaciones líquidas o en solución y las formulaciones liofilizadas. En particular, cuando estas proteínas, que son básicas, se añaden a ciertos tampones en altas concentraciones, el pH del tampón aumenta. Un factor restrictivo hasta la fecha para la utilización óptima de las BMP, en particular en regímenes terapéuticos, han sido las formulaciones de BMP en solución líquida con valores de pH superiores a 3, 0 ± 0, 2 y las formulaciones liofilizadas de BMP que tienen un pH superior a 3, 5 no son estables a largo plazo y están sometidas a desnaturalización y aglomeración. La utilización de tampones de la técnica anterior, tales como el lactato de sodio ha limitado las concentraciones BMP en formulaciones y también ha limitado la estabilidad de las BMP en estas formulaciones ya que deben añadirse ácidos fuertes para estabilizar el pH, aumentando así la fuerza iónica de las formulaciones. La presente invención permite al experto en la materia preparar una formulación de BMP estable, mucho más concentrada para su utilización en diversas indicaciones terapéuticas. Además, la invención proporciona un procedimiento de preparación más robusto que permite un mayor control del pH durante el procedimiento de preparación proporcionando con ello una mayor uniformidad entre lotes de formulaciones de BMP producidos.

En un aspecto, la invención comprende una solución que incluye una proteína morfogenética ósea y un tampón acuoso de glicilglicina. Según una forma de realización, la proteína morfogenética ósea puede ser cualquiera de entre BMP-2, BMP-4, BMP-5, BMP-6, BMP-7, GDF-5, GDF-6 o GDF-7. En una forma de realización preferida, la BMP es BMP-7. El pH de la solución puede estar comprendido entre aproximadamente 2, 5 y 4, 0, más preferentemente entre aproximadamente 2, 8 y 3, 5, y aún más preferentemente entre aproximadamente 2, 8 y 3, 2. El tampón de glicilglicina puede tener una concentración entre aproximadamente 1 mM y 100 mM, entre aproximadamente 2 mM y 20 mM, aún más entre aproximadamente 5 mM y 15 mM, o aproximadamente 10 mM. La concentración de las proteínas morfogenéticas óseas en la solución puede ser de aproximadamente 0, 01 mg/ml a 40 mg/ml, de aproximadamente 0, 1 mg/ml a 1 mg/ml, o de aproximadamente 0, 1 mg/ml a aproximadamente 20 mg/ml,

o de aproximadamente 1 mg/ml a 20 mg/ml. Según una forma de realización, el pH de la solución no varía en más de aproximadamente 0, 2 unidades de pH en el almacenamiento entre 5 y 40°C durante seis meses o como má ximo 36 meses.

La solución también puede incluir un lioprotector, por ejemplo, azúcar, tal como manitol, manosa, lactosa, sacarosa o

trehalosa, o cualesquiera de las combinaciones de estos azúcares. En otra forma de realización, el lioprotector es preferentemente manitol, manosa o trehalosa. Por ejemplo, la trehalosa se pueden incluir en la cantidad de aproximadamente 1% a 15% (p/v) , o desde aproximadamente 3% a 10% (p/v) . En una forma de realización preferida, la trehalosa no excede de 9% (p/v) .

La solución también puede incluir un antioxidante. Por ejemplo, el antioxidante puede ser metionina, ácido ascórbico, alcohol bencílico, glutatión, m-cresol, EDTA, metabisulfito de sodio o tioglicerol. En una forma de realización preferida, el antioxidante es la metionina. En otra forma de realización, la solución no contiene un antioxidante.

En otro aspecto, la invención comprende una composición sólida que incluye una proteína morfogenética ósea y glicilglicina, una sal de glicilglicina, o una combinación de glicilglicina y una sal de glicilglicina. En otra forma de realización, la sal de glicilglicina es la glicilglicina HCl. La composición sólida puede incluir una lioprotector, por ejemplo, un azúcar. El azúcar puede ser manitol, lactosa, sacarosa o trehalosa o cualquier combinación de estos azúcares. Por ejemplo, el azúcar puede ser trehalosa que puede incluirse, por ejemplo, en una proporción de proteína morfogenética ósea a trehalosa de aproximadamente 7xl0-5:1 (p/p) a 1, 3:1 (p/p) . La proporción de proteína morfogenética ósea a glicilglicina, sal de glicilglicina, glicilglicina HCl o combinación de glicilglicina y sal de glicilglicina puede ser, por ejemplo, de aproximadamente 8x10-4:1 (p/p) a aproximadamente 300:1 (p/p) La composición sólida puede incluir también un antioxidante. El antioxidante puede ser, por ejemplo, ácido ascórbico, alcohol bencílico, glutatión, m-cresol, tioglicerol y metionina. En una forma de realización preferida, el antioxidante es la metionina.

La composición sólida puede incluir también un tensioactivo. Por ejemplo, en una forma de realización, el tensioactivo es uno de entre polisorbato 20, polisorbato 80 o poloxámero 407. El agente tensioactivo puede estar presente en un intervalo de aproximadamente 0, 001% a 0, 5% (p/p) . En una forma de realización preferida, el tensioactivo es polisorbato 20 a aproximadamente 0, 01% (p/p) . En una forma de realización, la composición no incluye un agente tensioactivo.

Una composición sólida puede prepararse liofilizando la solución de proteína morfogenética ósea y glicilglicina. En una forma de realización, la composición liofilizada no incluye manitol.

En otro aspecto aún, la invención comprende una solución que incluye una proteína morfogenética ósea y un tampón de ácido tartárico acuoso. En una forma de realización, la proteína morfogenética ósea puede ser cualquiera de entre BMP-2, BMP-4, BMP-5, BMP-6, BMP-7, GDF-5, GDF-6 o GDF-7. En una forma de realización preferida, la BMP es la BMP-7. El pH de la solución puede estar comprendido entre aproximadamente 2, 5 a aproximadamente 4, 0, más preferentemente de aproximadamente 2, 8 a 3, 5, y aún más preferentemente de aproximadamente 2, 8 a 3, 2. El tampón de ácido tartárico puede tener una concentración desde aproximadamente 1 mM hasta 100 mM, desde aproximadamente 2... [Seguir leyendo]

1. Solución que comprende una proteína morfogenética ósea y un tampón acuoso de glicilglicina.

2. Solución según la reivindicación 1, en la que la concentración de proteína es:

(i) desde aproximadamente 1 mg/ml a aproximadamente 20 mg/ml;

(ii) desde aproximadamente 0, 1 mg/ml a aproximadamente 20 mg/ml;

(iii) desde aproximadamente 0, 1 mg/ml a aproximadamente 1 mg/ml; o 10 (iv) desde aproximadamente 0, 1 mg/ml a aproximadamente 40 mg/ml.

3. Composición sólida que comprende:

(i) una proteína morfogenética ósea; y 15 (ii) glicilglicina, una sal de glicilglicina o una combinación de las mismas.

4. Composición sólida según la reivindicación 3, en la que:

(i) la sal de glicilglicina es la glicilglicina HCl; y/o

(ii) la proporción de proteína morfogenética ósea a glicilglicina, sal de glicilglicina, o la combinación de las mismas es de aproximadamente 8x10-4:1 a aproximadamente 310:1 (p/p) .

5. Solución que comprende una proteína morfogenética ósea y un tampón acuoso de ácido tartárico.

6. Solución según la reivindicación 5, en la que la concentración de proteína es:

(i) desde aproximadamente 0, 01 mg/ml a aproximadamente 40 mg/ml;

(ii) desde aproximadamente 1 mg/ml a aproximadamente 20 mg/ml;

(iii) desde aproximadamente 0, 1 mg/ml a aproximadamente 1 mg/ml; o 30 (iv) desde aproximadamente 0, 1 mg/ml a aproximadamente 20 mg/ml.

7. Composición sólida que comprende:

(i) una proteína morfogenética ósea; y 35

(ii) ácido tartárico, una sal de tartrato o una combinación de los mismos,

opcionalmente en la que la proporción de proteína morfogenética ósea a ácido tartárico, sal tartrato, o la combinación de los mismos es de aproximadamente 7x10-4:1 a aproximadamente 270:1 (p/p) . 40

8. Solución o composición según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la proteína morfogenética ósea se selecciona de entre BMP-2, BMP-4, BMP-5, BMP-6, BMP-7, GDF-5, GDF-6 y GDF-7.

9. Solución según cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 5, 6 u 8, en la que el pH de la solución es de

45 aproximadamente:

(i) 2, 5 a aproximadamente 4, 0;

(ii) 2, 8 a aproximadamente 3, 5; o

(iii) 2, 8 a aproximadamente 3, 2. 50

10. Solución según cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 5, 6, 8 o 9, concentración de glicilglicina o ácido tartárico:

(i) de aproximadamente 1 mM a aproximadamente 100 mM; 55 (ii) de aproximadamente 2 mM a aproximadamente 20 mM;

(iii) de aproximadamente 5 mM a aproximadamente 15 mM; o

(iv) de aproximadamente 10 mM.

en la que el tampón presenta una

11. Solución según cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 5, 6, 8, 9 o 10, en la que el pH no varía más de 60 aproximadamente:

(i) 0, 2 unidades de pH al almacenar a 40°C durante seis meses; o

(ii ) 0, 2 unidades de pH al almacenar a 40°C durant e 36 meses.

12. Solución o composición según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende además un lioprotector, en la que opcionalmente el lioprotector es un azúcar.

13. Solución o composición según la reivindicación 12, en la que el lioprotector se selecciona de entre manitol, 5 lactosa, sacarosa y trehalosa y combinaciones de los mismos.

14. Solución o composición según la reivindicación 13, en el que el lioprotector es la trehalosa y:

(i) la trehalosa está presente en una cantidad de aproximadamente 1% a aproximadamente 15% (p/v) ;

(ii) la trehalosa está presente en una cantidad de aproximadamente 3% a aproximadamente 9%, por ejemplo aproximadamente 9%; o

(iii) la proporción de proteína morfogenética ósea a trehalosa es de aproximadamente 7x10-5:1 a

aproximadamente 1, 3:1 (p/p) . 15

15. Solución o composición según cualquiera de las reivindicaciones anteriores que comprende además un antioxidante, seleccionado opcionalmente de entre metionina, ácido ascórbico, alcohol bencílico, glutatión, m-cresol y tioglicerol.

16. Composición sólida que puede obtenerse por un procedimiento que comprende la etapa que consiste en liofilizar la solución según cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 5, 6, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ó 15.

17. Solución según la reivindicación 1 ó 5, que comprende además un estabilizante seleccionado de entre prolina,

glicina, valina, isoleucina y leucina, en la que opcionalmente el estabilizador comprende prolina. 25

18. Composición sólida que comprende:

(i) una proteína morfogenética ósea;

(ii) una sal de glicilglicina o una sal de tartrato; y 30

(iii) un compuesto seleccionado de entre prolina, glicina, valina, isoleucina, leucina, una sal de prolina, una sal de glicina , una sal de valina, una sal de isoleucina o una sal de leucina.