Composición adhesiva para su uso en un inmunosensor.

Un inmunosensor que comprende:

un electrodo inferior que tiene un primer reactivo líquido que comprende un anticuerpo conjugado con unaenzima en un tampón,

y un segundo reactivo líquido que comprende ferrocianuro, un sustrato para la enzima,y un mediador electroquímico en una solución ácida diluida, siendo aplicados en bandas el 5 primer y segundoreactivo líquido sobre el electrodo inferior y después secándose;

un electrodo superior que tiene microesferas magnéticas conjugadas con un antígeno aplicado en banda ysecado sobre el mismo;

un separador dispuesto entre el electrodo inferior y el superior;

una cámara de reacción formada en el separador y que tiene el primer reactivo y las microesferas magnéticasconjugados con el antígeno dispuesto en ella;

una cámara de detección formada en el separador y que tiene el segundo reactivo dispuesto en ella;

una cámara de llenado formada al menos parcialmente en el separador y uno del electrodo inferior y superior,separado a una distancia de la cámara de detección, y que se solapa al menos con una parte de la cámarade reacción;

un conducto de ventilación formado al menos parcialmente en cada uno del separador, el electrodo inferior yel electrodo superior, separado a una distancia de la cámara de reacción, y que se solapa al menos con unaparte de la cámara de detección;

una cinta adhesiva hidrófila que tiene un anticoagulante incorporado acoplado a uno del electrodo inferior ysuperior, dispuesta sobre el conducto de ventilación, y configurada para formar una pared de la cámara dellenado y sellar el conducto de ventilación; y

un componente de sellado acoplado al otro del electrodo inferior y superior, dispuesto sobre el conducto deventilación, y configurado para sellar el conducto de ventilación.

Composición adhesiva para su uso en un inmunosensor

Campo

La presente divulgación se refiere a composiciones adhesivas para su uso en dispositivos en contacto con la sangre, tales como un inmunosensor, y a procedimientos para medir una concentración de un componente asociado con una muestra, tal como un antígeno en una muestra de sangre.

Antecedentes

La detección de analitos en fluidos fisiológicos, por ejemplo, sangre o productos derivado de la sangre, tiene cada vez más importancia para la sociedad actual. Los ensayos de detección de analitos encuentran uso en una variedad de aplicaciones, que incluyen pruebas clínicas en laboratorio, pruebas caseras, etc., en las que los resultados de tales pruebas juegan un papel prominente en el diagnóstico y gestión en una variedad de condiciones de enfermedades. Los analitos de interés incluyen glucosa para la gestión de diabetes, colesterol y similares. En respuesta a esta creciente importancia de la detección de analitos, se ha desarrollado una variedad de protocolos y dispositivos de detección de analitos para su uso clínico y casero.

Un tipo de dispositivo usado para detectar y analizar muestras de sangre son los inmunosensores. Los inmunosensores generalmente incluyen una pluralidad de electrodos y cámaras que están configuradas para recibir y analizar una muestra. Las diferentes cámaras de los inmunosensores cumplen diferente fines. Por ejemplo, una cámara de llenado de un inmunosensor puede estar configurada para recibir una muestra, una cámara de reacción puede estar configurada para hacer reaccionar la muestra con un anticuerpo dispuesto en el inmunosensor, y una cámara de detección puede estar configurada para detectar la presencia o concentración de una proteína o antígeno dentro de la muestra después de la reacción con la muestra y el anticuerpo. Los varios componentes del inmunosensor pueden fabricarse usando, por ejemplo, una combinación de sustratos, plásticos, laminados y adhesivos.

Los adhesivos convencionales se usan para adherir materiales como los sustratos y los plásticos. Esto puede conseguirse, por ejemplo, cubriendo el adhesivo sobre el sustrato, laminando el adhesivo, y después adhiriendo la combinación laminada adhesivo-sustrato con la capa de plástico. Los adhesivos convencionales son generalmente hidrofóbo para que puedan mantener su unión en un ambiente húmedo. Sin embargo, esto es un detrimento para el flujo de líquido porque las propiedades hidrofóba del adhesivo pueden impedir el flujo líquido. De este modo, a menudo puede ser difícil para las muestras de sangre moverse entre varias cámaras de un inmunosensor. En particular, puede haber una tendencia a que la muestra se coagule dentro del inmunosensor, bloqueando de ese modo el movimiento de la muestra a través del inmunosensor. Esto puede dar como resultado complicaciones no deseable, errores, y retrasos en el análisis de la muestra.

Por consiguiente, sería deseable mejorar el flujo de sangre a través de un inmunosensor, así como mejorar la precisión y velocidad de las mediciones tomadas con un inmunosensor.

Resumen

Generalmente se proporcionar dispositivos y procedimientos para medir una presencia o una concentración de un cierto material dentro de una muestra, como se describe en las reivindicaciones adjuntas. También se proporcionan composiciones adhesivas para su uso en tales dispositivos y procedimientos. En una realización de una composición adhesiva para su uso en un inmunosensor de la invención, la composición incluye un adhesivo, agua, un poloxámero y un anticoagulante. El adhesivo y el agua pueden combinarse para formar una mezcla antes de incluirse con el poloxámero y el anticoagulante. El adhesivo puede tener un número de diferentes propiedades asociadas con él, que incluyen ser sensible a la presión, que se active con calor y que sea soluble en agua. En una realización el adhesivo es un sulfopoliéster. El anticoagulante puede seleccionarse de un grupo que incluye heparina, citrato, ácido etilendiaminotetraacético y oxalato. El poloxámero puede incluir unidades derivadas de óxido de etileno y óxido de propileno. En una realización el óxido de etileno y el óxido de propileno sirven como monómeros en copolímeros en bloque. Una concentración del poloxámero con respecto al adhesivo puede estar aproximadamente en el intervalo comprendido entre aproximadamente 0, 05 y aproximadamente 0, 5 por ciento. En una realización en la que el anticoagulante es heparina, una concentración de la heparina con respecto al adhesivo puede estar aproximadamente en el intervalo comprendido entre aproximadamente 0, 1 y aproximadamente 10 miligramos por mililitro.

Una realización ejemplar de un inmunosensor puede incluir un electrodo inferior, un electrodo superior y un separador dispuesto entre ellos. El inmunosensor puede también incluir una pluralidad de cámaras, que incluyen una cámara de reacción, una cámara de detección y una cámara de llenado. Las cámaras de reacción y detección puede estar cada una formada en el separador, mientras que la cámara de rellano puede estar formada al menos parcialmente en el separador y uno del electrodo inferior y superior. La cámara de llenado puede estar separada a una distancia de la cámara de detección, solapándose al menos con una parte de la cámara de reacción. Además, puede formarse un conducto de ventilación al menos parcialmente en cada uno del separador, el electrodo inferior y

el electrodo superior. El conducto de ventilación puede estar separado a una distancia de la cámara de reacción, solapándose al menos con una parte de la cámara de detección. Una cinta adhesiva hidrófila puede acoplarse a uno del electrodo inferior y electrodo superior y disponerse sobre el conducto de ventilación, mientras que un componente de sellado puede acoplarse al otro del electrodo inferior y superior y también disponerse sobre el conducto de ventilación. La cinta adhesiva hidrófila y el componente de sellado pueden estar fabricados de uno o más de los mismos materiales, que incluyen en su totalidad el mismo material o los mismos materiales, o alternativamente, pueden estar hechos de uno o más materiales diferentes. La cinta adhesiva hidrófila puede formar una pared de la cámara de llenado, y además, puede tener un anticoagulante incorporado en él.

El electrodo inferior puede tener un primer reactivo en forma líquida y un segundo reactivo en forma líquida dispuesto sobre él. El primer reactivo líquido puede incluir un anticuerpo conjugado con una enzima en un tampón, mientras que el segundo reactivo líquido puede incluir ferricianuro, un sustrato para la enzima, y un mediador electroquímico en una solución ácida diluida. El primer y segundo reactivo líquido pueden ser aplicados en bandas sobre el electrodo inferior y secarse. El electrodo superior puede tener microesferas conjugadas con un antígeno aplicado en bandas y secado en el mismo. El inmunosensor puede construirse de tal manera que la cámara de reacción tenga el primer reactivo del electrodo inferior y las microesferas magnéticas conjugadas con el antígeno del electrodo superior dispuestos en ella y la cámara de detección tenga el segundo reactivo del electrodo inferior dispuesto en ella.

La enzima del primer reactivo líquido del electrodo inferior del inmunosensor puede ser glucosa deshidrogenasa-PQQ y el tampón en el que la enzima puede estar colocada puede incluir citraconato, poloxámeros e iones de calcio. El segundo reactivo líquido del electrodo inferior del inmunosensor puede incluir ferricianuro, glucosa y etosulfato de fenazina en una solución de ácido citracónico diluido. En una realización, el anticoagulante de la cinta adhesiva puede ser heparina. Una concentración de la heparina con respecto a una concentración del adhesivo hidrófilo puede estar aproximadamente en el intervalo comprendido entre aproximadamente 0, 1 a aproximadamente 10 miligramos por mililitro. El inmunosensor puede además incluir un medidor dispuesto debajo de la cámara de reacción. En una realización ejemplar el medidor puede contener un imán. El medidor puede estar configurado para aplicar un potencial entre el electrodo inferior y superior, así como para medir una corriente resultante. En una realización un elemento térmico puede estar asociado con el medidor. En otra realización el medidor puede incluir un componente de perforación que está configurado para perforar al menos uno de la cinta hidrófila y el componente de sellado dispuesto sobre el conducto de ventilación.

Un procedimiento... [Seguir leyendo]

1. Un inmunosensor que comprende:

un electrodo inferior que tiene un primer reactivo líquido que comprende un anticuerpo conjugado con una enzima en un tampón, y un segundo reactivo líquido que comprende ferrocianuro, un sustrato para la enzima, y un mediador electroquímico en una solución ácida diluida, siendo aplicados en bandas el primer y segundo reactivo líquido sobre el electrodo inferior y después secándose; un electrodo superior que tiene microesferas magnéticas conjugadas con un antígeno aplicado en banda y secado sobre el mismo; un separador dispuesto entre el electrodo inferior y el superior; una cámara de reacción formada en el separador y que tiene el primer reactivo y las microesferas magnéticas conjugados con el antígeno dispuesto en ella; una cámara de detección formada en el separador y que tiene el segundo reactivo dispuesto en ella; una cámara de llenado formada al menos parcialmente en el separador y uno del electrodo inferior y superior, separado a una distancia de la cámara de detección, y que se solapa al menos con una parte de la cámara de reacción; un conducto de ventilación formado al menos parcialmente en cada uno del separador, el electrodo inferior y el electrodo superior, separado a una distancia de la cámara de reacción, y que se solapa al menos con una parte de la cámara de detección; una cinta adhesiva hidrófila que tiene un anticoagulante incorporado acoplado a uno del electrodo inferior y superior, dispuesta sobre el conducto de ventilación, y configurada para formar una pared de la cámara de llenado y sellar el conducto de ventilación; y un componente de sellado acoplado al otro del electrodo inferior y superior, dispuesto sobre el conducto de ventilación, y configurado para sellar el conducto de ventilación.

2. El inmunosensor de la reivindicación 1, en el que el primer reactivo líquido comprende un anticuerpo conjugado con glucosa deshidrogenasa PPQ, y el tampón comprende citraconato, sacarosa, poloxámeros e iones de calcio.

3. El inmunosensor de la reivindicación 1 o reivindicación 2, en el que el anticoagulante comprende heparina.

4. El inmunosensor de la reivindicación 3, en el que la concentración de heparina con respecto a una concentración del adhesivo hidrófilo está aproximadamente en el intervalo comprendido entre aproximadamente 0, 1 y aproximadamente 10 miligramos por mililitro.

5. El inmunosensor de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que el segundo reactivo líquido comprende ferricianuro, glucosa y etosulfato de fenazina en una solución de ácido citracónico diluido.

6. El inmunosensor de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, que además comprende un medidor que contiene un imán dispuesto debajo de la cámara de reacción, estando configurado el medidor para aplicar un potencial entre el electrodo inferior y superior y para medir una corriente resultante.

7. El inmunosensor de la reivindicación 6, que además comprende un elemento térmico asociado con el medidor.

8. El inmunosensor de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, que además comprende un componente de perforación configurado para perforar al menos uno de la cinta hidrófila y el componente de sellado dispuesto sobre el conducto de ventilación.

9. Un procedimiento in vitro para medir una muestra de sangre, que comprende:

proporcionar:

una cámara de reacción y una cámara de detección formadas en un separador dispuesto entre dos electrodos; una cámara de llenado al menos parcialmente formada en el separador y uno de los electrodos, separada a una distancia de la cámara de detección, y que se solapa al menos con una parte de la cámara de reacción; y un conducto de ventilación al menos parcialmente formado en el separado y los dos electrodos, separado a una distancia de la cámara de reacción, y que se solapa al menos con una parte de la cámara de detección;

proporcionar:

un conjugado anticuerpo-enzima en una primer tampón y microesferas magnéticas unidas a un antígeno en un segundo tampón en la cámara de reacción; ferricianuro, glucosa y un mediador en un ácido diluido en la cámara de detección; un primer sello sobre un primer lado del conducto de ventilación por medio de una cinta adhesiva hidrófila, en el que la cinta adhesiva hidrófila también forma una pared de la cámara de llenado; y un segundo sello sobre un segundo lado del conducto de ventilación por medio de un componente de sellado;

proporcionar una muestra de sangre a la cámara de llenado, en el que al menos una parte de la muestra de 12

sangre se mueve de la cámara de llenado a la cámara de reacción; abrir el conducto de ventilación después de un tiempo predeterminado perforando al menos uno de la cinta adhesiva hidrófila y el componente de sellado, permitiendo de ese modo que partes de la muestra de sangre que contengan el conjugado anticuerpo-enzima que no está unido a las microesferas magnéticas se muevan a la

cámara de detección; catalizar la oxidación de la glucosa en la cámara de detección, que da como resultado la formación de ferrocianuro; aplicar un potencial entre los dos electrodos; detectar electroquímicamente una corriente del ferrocianuro; y

calcular una concentración del antígeno en la muestra de sangre en base a la señal detectada.

10. El procedimiento de la reivindicación 9, que además comprende calentar los dos electrodos.

11. El procedimiento de la reivindicación 9 o reivindicación 10, en el que el adhesivo hidrófilo comprende además heparina.

12. El procedimiento de la reivindicación 11, en el que una concentración de la heparina con respecto a una 15 concentración del adhesivo hidrófilo es aproximadamente 1 miligramo por mililitro.

13. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 9-12, en el que el adhesivo hidrófilo comprende además un poloxámero.