PROTEINA HIBRIDA Y VECTOR QUE CODIFICA PARA LA MISMA PARA LA INHIBICION DE LA ANGIOGENESIS.

Molécula de ácido nucleico aislado, purificado o recombinante que codifica para una proteína de fusión que comprende tanto:

a) un antagonista de un factor angiogénico como

b) un regulador de la estructura endotelial vascular

en la que la estructura de la secuencia de ácido nucleico de dicha molécula comprende la secuencia mostrada en la figura 3 y la secuencia mostrada en la figura 4; o una secuencia que tiene una identidad del 80% con la misma

Proteína híbrida y vector que codifica para la misma para la inhibición de la angiogénesis.

La presente invención se refiere a una secuencia de ácido nucleico recombinante que codifica tanto para un antagonista de un factor de la angiogénesis específico como para un regulador de la estructura endotelial vascular; a su preparación; a la expresión de la proteína; y al uso de la secuencia o la proteína en la inhibición de la angiogénesis y/o el tratamiento del cáncer.

La angiogénesis, la formación de vasos sanguíneos nuevos, es clave en el desarrollo y la progresión del cáncer. La angiogénesis se rige por una gama de factores angiogénicos y factores antiangiogénicos. Se conoce que los factores angiogénicos incluyen una gama de citocinas, tales como factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), factor de crecimiento de fibroblastos (FGF) por ejemplo FGF básico (bFGF), interleucinas (IL, por ejemplo IL-8) y factor de crecimiento de hepatocitos/factor de dispersión (HGF/SF). Sin vasos sanguíneos nuevos, un tumor no puede crecer más allá de 2 mm de diámetro debido al suministro de sangre y la difusión de nutrientes/oxígeno limi- tados.

Además, las células tumorales pueden diseminarse en el organismo y producir micro y macrometástasis en los órganos y tejidos, pero permanecer invisibles durante desde meses hasta años. Una vez que los vasos sanguíneos nuevos crezcan en estos tumores latentes, éstos crecerán a una velocidad mucho más rápida, empezarán a manifestar síntomas clínicos y se volverán letales para los pacientes. Los vasos sanguíneos nuevos en el tumor proporcionan no sólo nutrientes y oxígeno, sino también una vía para que las células tumorales entren en la circulación y por tanto ayudan al proceso de metástasis.

Por tanto, la antiangiogénesis se ha convertido en un centro de atención en el desarrollo de nuevos fármacos contra el cáncer. La importancia fundamental de la angiogénesis en el desarrollo y la metástasis del cáncer ha llevado al descubrimiento de un gran número de inhibidores de la angiogénesis, que incluyen agentes diseñados específicamente como agentes antiangiogénicos (tales como anticuerpo anti-VEGF, anticuerpo anti-bFGF, fumagilina y productos recombinantes a base de un único gen, tal como angiostatina), y aquellos descubiertos de manera no intencionada (tales como interferón beta, tamoxifeno e interleucinas 4 y 12).

Algunos de los antagonistas de los factores angiogénicos son adecuados para el propósito de la antiangiogénesis, pero otros no los son. Por ejemplo, cada antagonista trabaja específicamente sobre sólo un factor angiogénico particular, mientras que existen aproximadamente de 20-40 factores angiogénicos en el organismo, en cualquier tumor dado. Otro problema es que el uso de un antagonista específico dará como resultado un cambio del equilibrio en el que se suprime el factor angiogénico seleccionado como diana, pero otro(s) factor(es) aumenta(n) en compensación. Por tanto, el equilibrio se desplaza desde el factor angiogénico seleccionado como diana hacia otro u otros, dando como resultado resistencia al tratamiento antiangiogénico.

Por consiguiente, la presente invención se refiere a un agente para suprimir la angiogénesis, que puede obtenerse modificando mediante ingeniería genética dos reguladores importantes de la angiogénesis, un antagonista de un factor angiogénico y un regulador de la estructura endotelial (tal como la cadherina endotelial vascular).

Por tanto, se ha modificado mediante ingeniería genética una molécula recombinante que comprende tanto una secuencia que puede expresar un antagonista específico como una secuencia que puede expresar un marcador de células endoteliales específico, que es un regulador de la estructura endotelial vascular, que es esencial para la formación de vasos sanguíneos nuevos. Los productos recombinantes (denominados de manera colectiva en el presente documento productos KV, tales como aquéllos denominados KVEn, en el que n es un número entero, K representa el antagonista de un factor angiogénico, V representa las células endoteliales vasculares y E representa el vector de expresión, y otros denominados mediante números de J) ambos conservan las propiedades antagonistas de un factor antiangiogénico; y también reconocen específicamente células que producen vasos sanguíneos nuevos, es decir las células endoteliales vasculares.

Por tanto, los productos recombinantes trabajarán sobre el mecanismo general para formar vasos sanguíneos nuevos así como sobre un mecanismo específico operado por un factor angiogénico específico; y tienen la ventaja adicional de impedir el cambio del equilibrio y la resistencia a la angiogénesis a la que se enfrenta actualmente el tratamiento antiangiogénico.

Por consiguiente, la presente invención proporciona una molécula de ácido nucleico aislado, purificado o recombinante que codifica para una proteína de fusión que comprende tanto:

Por "homóloga" en el presente documento se entiende una secuencia que tiene una identidad de nucleótidos (o, en el caso de una secuencia de aminoácidos, bases) de al menos el 80% en el mismo orden dentro de la secuencia. Preferiblemente, la secuencia tiene una homología de al menos el 85% y más preferiblemente de al menos el 90%, tal como superior al 95%.

La presente invención proporciona además una secuencia (de aminoácidos) de un polipéptido (proteína) codificada por una secuencia de nucleótidos de la invención.

Por tanto, ahora se describirán realizaciones específicas de la presente invención, con referencia a las figuras adjuntas, en las que:

la figura 1 es la secuencia de ácido nucleico de la KVE702 recombinante, que tiene 1695 ácidos nucleicos;

la figura 2 es la secuencia de aminoácidos prevista de la proteína KVE702, codificada por la secuencia de KVE702 recombinante, que se lee desde la posición 1 y que tiene 566 aminoácidos;

la figura 3 es aquella parte de la secuencia de la figura 1 derivada de MRC-5 (el componente antagonista angiogénico, KS2101);

la figura 4 es aquella parte de la secuencia de la figura 1 derivada de HUVEC (el componente regulador de la estructura endotelial vascular, VC503);

la figura 5 es la secuencia de ácido nucleico de KS2105;

la figura 6 es la secuencia de ácido nucleico de VC1;

la figura 7 es la secuencia de ácido nucleico de J12;

la figura 8 es la secuencia de ácido nucleico de la J35 recombinante;

la figura 9 es la secuencia de ácido nucleico de J11;

la figura 10 es la secuencia de ácido nucleico de la J36 recombinante;

la figura 11 es la secuencia de ácido nucleico de J8;

la figura 12 es la secuencia de ácido nucleico de J37;

la figura 13 es la secuencia de aminoácidos prevista para la proteína J35, que corresponde a la secuencia de ácido nucleico de la figura 8;

la figura 14 es la secuencia de aminoácidos prevista para la proteína J36, que corresponde a la secuencia de ácido nucleico de la figura 10;

la figura 15 es la secuencia de aminoácidos prevista para la proteína J37, que corresponde a la secuencia de ácido nucleico de la figura 12;

la figura 16 es la secuencia de ácido nucleico de J9;

la figura 17 es la secuencia de ácido nucleico de J10; y

la figura 18 es la secuencia de ácido nucleico de J6.

Los oligonucleótidos (d) particulares que se incluyen en esta invención son aquéllos que codifican para el regulador de la estructura endotelial vascular. El regulador de la estructura endotelial se deriva adecuadamente de VE-cadherina, E-selectina, ocludina, claudina-5 y/o molécula de adhesión de células vasculares (VCAM), especialmente VE-cadherina, ocludina y claudina-5.

Por consiguiente, la presente patente enseña además una secuencia de ácido nucleico aislado, purificado o recombinante (a continuación en el presente documento, una secuencia de KV) que comprende:

1. Molécula de ácido nucleico aislado, purificado o recombinante que codifica para una proteína de fusión que comprende tanto:

en la que la estructura de la secuencia de ácido nucleico de dicha molécula comprende la secuencia mostrada en la figura 3 y la secuencia mostrada en la figura 4; o una secuencia que tiene una identidad del 80% con la misma.

2. Molécula según la reivindicación 1, en la que la molécula de ácido nucleico recombinante comprende la secuencia mostrada en la figura 1.

3. Polipéptido codificado por una molécula de ácido nucleico según cualquier reivindicación anterior.

4. Polipéptido según la reivindicación 3, que comprende la secuencia mostrada en la figura 2.

5. Vector que tiene incorporado de manera expresable en el mismo una molécula según las reivindicaciones 1 ó 2.

6. Célula, plásmido, virus, bacteria u otro organismo vivo que tiene incorporado de manera expresable en el mismo una molécula según las reivindicaciones 1 ó 2.

7. Célula huésped transfectada o transformada con un vector según la reivindicación 5.

8. Uso de un polipéptido según la reivindicación 3 o la reivindicación 4 en la preparación de un medicamento para el tratamiento o la prevención de la angiogénesis o el cáncer.

9. Formulación que comprende un polipéptido según la reivindicación 3 o la reivindicación 4 en asociación con un vehículo farmacéuticamente aceptable para la misma.