Dispositivo (1) de distribución en líneas para distribuir en líneas un inóculo microbiano (20) para obtener colonias individuales sobre la superficie de unos medios sólidos (16) de cultivo,

teniendo dicho dispositivo de distribución en líneas una fila de superficies (21) de contacto separadas para entrar en contacto con la superficie de los medios sólidos (16) de cultivo que se soportan de manera elásticamente flexible mediante un miembro común 6 de soporte, estando previstas cada una de dichas superficies de contacto sobre un miembro alargado (2), caracterizado porque el movimiento lateral relativo de la parte inferior de cada uno de los miembros alargados está limitado por unos medios (22) de unión

Dispositivo de distribución microbiana en líneas.

Esta invención se refiere a un distribuidor en líneas de muestras líquidas y, más particularmente, a un cepillo de distribución en líneas para distribuir en líneas muestras sobre la superficie de unos medios sólidos de cultivo para obtener colonias microbianas individuales, por ejemplo, a partir de muestras clínicas tomadas con fines de diagnóstico médico, y a un método de distribución en líneas de una muestra líquida usando el cepillo, y a un aparato para la distribución en líneas automatizada de muestras para obtener colonias individuales.

Antecedentes de la invención

El aislamiento de colonias individuales de microorganismos es un procedimiento importante por muchos motivos en el trabajo científico, y es específicamente importante para identificar microorganismos con fines de diagnóstico médico. Se usa para varios microorganismos diferentes, pero principalmente para bacterias.

Generalmente, el aislamiento de colonias individuales lo realizan manualmente los técnicos de laboratorio que utilizan un asa de siembra de metal o plástico para formar múltiples líneas distribuidas de un inóculo sobre una primera banda en una primera dirección de una placa de agar y producir una segunda banda de múltiples líneas distribuidas con un asa de siembre nueva o recién esterilizada que cruza la primera banda, y normalmente también una tercera y una cuarta bandas. Normalmente, se sujeta un asa de siembra de metal no oxidante (platino o Nichrome) en un soporte y se esteriliza o bien calentándola en la llama de un quemador Bunsen o bien en un calentador eléctrico, enfriándose rápidamente el asa de siembra en el aire o en el borde de los medios sólidos a base de agar que está usándose antes de tomar el inóculo de la primera, la segunda o la tercera banda u otra fuente del microorganismo. Alternativamente el técnico puede utilizar asas de siembra desechables de una manera similar a la descrita anteriormente.

Un inconveniente es que el trabajo es relativamente pesado y requiere el empleo de una persona experimentada para realizar a menudo cientos de aislamientos de una vez. Esto es costoso y la naturaleza altamente repetitiva del trabajo puede llevar a errores que pueden tener graves consecuencias en el establecimiento de un diagnóstico.

Ha habido varias sugerencias para la automatización de la distribución en líneas para colonias aisladas. Algunas de las sugerencias, tales como las de las memorias descriptivas de patente GB 2025457, EP 073774, US 3962040 y US 3623958, usan el movimiento de oscilación o en espiral de dilución de una cabeza conectada mediante un tubo a un recipiente que contiene una suspensión de microorganismos. Estas sugerencias no son adecuadas para aislar fácilmente colonias a partir de grandes números de muestras. Otras sugerencias están más avanzadas desde el punto de vista técnico y dan a conocer sistemas de aislamiento automatizado para múltiples muestras que pueden distribuir en líneas muestras sobre una serie de diferentes placas de Petri para realizar ensayos diferenciales, e incluyen mecanismos de entrega para recuperar placas de un almacén y colocar las placas en una estación de distribución en líneas, ejemplos de éstos se dan a conocer en las memorias descriptivas de patente US 4981802, US 4287301 y US 6617146.

Sin embargo, ninguna de ellas trata en particular la eficacia del mecanismo para esparcir y producir colonias microbianas individuales, aisladas, todas usan una cabeza con una superficie de contacto estrecha que requiere múltiples movimientos de arrastre, representando cada uno una distribución en líneas para cada banda. Ha habido sugerencias de dispositivos más eficaces para distribuir en líneas microorganismos y, en particular, la provisión de una superficie claramente independiente que puede usarse de manera secuencial que presenta una porción estéril independiente para distribuir en líneas la primera banda, la segunda banda y finalmente la tercera banda. Dos descripciones de este tipo, concretamente las memorias descriptivas de patente US 4010077 y US 4687746, aunque reducen la necesidad de esterilizar el dispositivo entre la distribución en líneas de bandas independientes, aún requieren la distribución en líneas repetitiva para cada banda.

La memoria descriptiva de patente estadounidense 4102748 divulga una herramienta para esparcir que proporciona tres superficies relativamente alargadas para sembrar tres bandas sobre una superficie de crecimiento sólida. Sin embargo, tal herramienta no es ideal para todos los tipos de inóculos. Por tanto, cuando se proporciona un depósito líquido de la muestra, el uso de esta herramienta para esparcir tenderá a llevarse consigo una gran cantidad del inóculo, a diferencia de las múltiples líneas distribuidas formadas por un asa de siembra con las que sólo se arrastra una pequeña muestra del líquido, y por tanto la herramienta del documento 4102748 en algunas muestras puede que no proporcione una dilución adecuada dentro de los límites de una placa de Petri para obtener colonias aisladas.

Uno de los problemas asociados con una superficie de cabeza ancha es que los medios sólidos no siempre se forman perfectamente lisos o exactamente a nivel con la placa de Petri y por tanto es necesario prever que una cabeza en un sistema automatizado pueda adaptarse a tal variación. La otra desventaja principal del dispositivo divulgado en el documento US 4102748 es que el dispositivo está diseñado para su funcionamiento manual y no existe indicación de cómo puede adaptarse este dispositivo a un sistema automatizado de gran volumen.

La publicación WO 01/66686 divulga un sistema cerrado para cultivar cultivos de gérmenes que comprende un peine conectado con una tapa colocada sobre una placa de cultivo, las púas (o miembros de contacto alargados) del peine entran en contacto con los medios de cultivo dentro del disco de cultivo y pueden hacerse girar mediante la rotación de la tapa para inocular los medios en arco. Sin embargo, este documento no describe unos medios para unir la parte inferior de miembros de contacto elásticamente flexibles con el fin de limitar su movimiento relativo.

Sumario de la invención

En una primera forma de un primer aspecto se puede decir que la invención reside en un dispositivo de distribución en líneas para distribuir en líneas un inóculo microbiano para colonias individuales sobre la superficie de unos medios sólidos de cultivo, teniendo dicho dispositivo de distribución en líneas una fila de superficies de contacto separadas para entrar en contacto con la superficie de los medios sólidos de cultivo y que se soportan de manera elásticamente flexible mediante un miembro de soporte común. Cada miembro alargado está provisto de una superficie de contacto. El movimiento lateral relativo de la parte inferior de los miembros alargados está limitado por unos medios de unión.

Cada miembro alargado puede tener forma de fibra y la superficie de contacto puede proporcionarse mediante un extremo libre de la fibra. Las fibras en cada fila pueden formar un cepillo que tiene una profundidad de más de una fibra. El extremo libre de la fibra puede presentar una superficie curvada para minimizar la posibilidad de introducirse en la superficie de los medios de crecimiento, sin embargo, dada la naturaleza flexible de las fibras, se prevé que en cierta medida los lados redondeados de las fibras puedan en última instancia entrar en contacto con la superficie de los medios de crecimiento.

En una forma preferida, los miembros alargados son cada uno una tira formada junto con el resto del dispositivo de distribución en líneas de plástico moldeado en una sola pieza. Preferiblemente, la tira es flexible aunque no es necesario, puede ser relativamente rígida y estar separada de una región de articulación flexible proporcionada por un adelgazamiento en la dimensión de sección transversal en la región de articulación. La región de articulación está prevista preferiblemente adyacente al miembro de soporte común.

Se prefiere que cada tira alargada muestre una porción axialmente curvada en una parte inferior. Por tanto, en uso, los extremos de las tiras alargadas están curvados hacia arriba de la porción curvada de modo que las superficies de contacto se proporcionan por la porción curvada y se evita que los extremos entren en contacto con la superficie de los medios de crecimiento. Esto minimiza el riesgo de que los extremos relativamente delgados potencialmente se adentren en la superficie de los medios de crecimiento. En realizaciones que no forman parte de la invención,...

1. Dispositivo (1) de distribución en líneas para distribuir en líneas un inóculo microbiano (20) para obtener colonias individuales sobre la superficie de unos medios sólidos (16) de cultivo, teniendo dicho dispositivo de distribución en líneas una fila de superficies (21) de contacto separadas para entrar en contacto con la superficie de los medios sólidos (16) de cultivo que se soportan de manera elásticamente flexible mediante un miembro común 6 de soporte, estando previstas cada una de dichas superficies de contacto sobre un miembro alargado (2), caracterizado porque el movimiento lateral relativo de la parte inferior de cada uno de los miembros alargados está limitado por unos medios (22) de unión.

2. Dispositivo de distribución en líneas según la reivindicación 1, en el que los medios de unión comprenden un miembro lateral inferior (22) que une cada uno de los miembros alargados (2) para inhibir el movimiento lateral relativo de superficies (21) de contacto adyacentes y en el que cada miembro alargado (2) es una tira.

3. Dispositivo de distribución en líneas según la reivindicación 2, en el que dicha tira es flexible.

4. Dispositivo de distribución en líneas según la reivindicación 3, en el que una porción (23) curvada axialmente está formada en una parte inferior de cada uno de los miembros alargados, estando prevista la superficie (21) de contacto en la porción curvada.

5. Dispositivo de distribución en líneas según la reivindicación 4, en el que el miembro lateral inferior (22) está formado de manera solidaria siguiendo la porción curvada de cada una de las tiras alargadas de modo que, en uso, el miembro lateral inferior se mantiene por encima de la superficie de los medios sólidos (16) de cultivo.

6. Dispositivo de distribución en líneas según la reivindicación 4 ó 5, en el que el radio de la porción (23) curvada axialmente es de 3,2 mm.

7. Dispositivo de distribución en líneas según una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 6, en el que la porción inferior de cada tira alargada (2) está curvada lateralmente.

8. Dispositivo de distribución en líneas según la reivindicación 7, en el que la porción (21) curvada lateralmente tiene un radio de aproximadamente 0,5 mm.

9. Dispositivo de distribución en líneas según una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 8, en el que las tiras alargadas (2) están separadas (8) al menos aproximadamente 0,1 mm.

10. Dispositivo de distribución en líneas según una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 9, en el que las tiras alargadas (2) tienen un ancho de aproximadamente 2 mm.

11. Dispositivo de distribución en líneas según una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 10, en el que las tiras alargadas (2) están inclinadas en ángulo hacia atrás respecto a la dirección (30) prevista de movimiento.

12. Dispositivo de distribución en líneas según la reivindicación 11, en el que el ángulo es de aproximadamente 45º respecto a la horizontal.

13. Dispositivo de distribución en líneas según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en el que un conector (35) para la conexión a una cabeza de una máquina se extiende desde el miembro común (6) de soporte.

14. Dispositivo de distribución en líneas según una cualquiera de las reivindicaciones 3 a 13, en el que la tira (2) alargada puede flexionarse aproximadamente 1 cm sin romper la superficie de unos medios de crecimiento de agar al 1%.

15. Método de distribución en líneas para colonias individuales de un microorganismo sobre la superficie de una placa (17) de cultivo usando un dispositivo (1) de distribución en líneas según una de las reivindicaciones 1 a 14, incluyendo el método las etapas de

16. Método de distribución en líneas para colonias individuales según la reivindicación 15, en el que la formación de la banda de líneas distribuidas se consigue mediante una rotación relativa de la placa (17) y el dispositivo (1) de distribución en líneas.

17. Método de distribución en líneas para colonias individuales según la reivindicación 16, en el que la rotación es de la placa (17).

18. Método de distribución en líneas para colonias individuales según la reivindicación 17, en el que una velocidad de la rotación es de al menos aproximadamente 10 r.p.m.

19. Método de distribución en líneas para colonias individuales según la reivindicación 18, en el que la velocidad de la rotación se mantiene durante un arco de al menos aproximadamente 80º.

20. Método de distribución en líneas para colonias individuales según reivindicación 17, en el que una velocidad de la rotación es de al menos aproximadamente 35 r.p.m. durante al menos un 25% final de la rotación.