PROCEDIMIENTO PARA LA ESTABILIZACIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS EN MATERIALES BIOLÓGICOS.

Procedimiento para la estabilización de ácidos nucleicos, caracterizado porque una muestra biológica con contenido en ácidos nucleicos se pone en contacto con una composición acuosa que comprende un compuesto catiónico de la fórmula general Y + R1R2R3R4X - en la cual pueden significar Y nitrógeno o fósforo R1, R2, R3 y R4, independientemente entre sí, un radical alquilo

(C1-C20) no ramificado o ramificado y/o un radical arilo(C8-C20), así como un radical aralquilo(C8-C28), y X - un anión de un ácido mono o polibásico, inorgánico u orgánico, y con al menos un donante de protones como aditivo

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E07010591.

Solicitante: QIAGEN GMBH.

Nacionalidad solicitante: Alemania.

Dirección: QIAGEN STRASSE 1 40724 HILDEN ALEMANIA.

Inventor/es: .

Fecha de Publicación: .

Fecha Solicitud PCT: 22 de Mayo de 2001.

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > COMPUESTOS ACICLICOS O CARBOCICLICOS (compuestos... > Compuestos que contienen grupos amino unidos a una... > C07C211/63 (con átomos de nitrógeno cuaternizados unidos a átomos de carbono acíclicos)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > COMPUESTOS ACICLICOS, CARBOCICLICOS O HETEROCICLICOS... > Compuestos que contienen elementos de los grupos... > C07F9/54 (Compuestos de fosfonio cuaternario)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > COMPUESTOS ACICLICOS O CARBOCICLICOS (compuestos... > Compuestos que contienen grupos amino unidos a una... > C07C211/64 (con átomos de nitrógeno cuaternizados unidos a átomos de carbono de ciclos aromáticos de seis miembros)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > COMPUESTOS ACICLICOS O CARBOCICLICOS (compuestos... > Compuestos que contienen grupos amino unidos a una... > C07C211/62 (Compuestos de amonio cuaternario)
  • C12N15/10A

Clasificación PCT:

  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Técnicas de mutación o de ingeniería genética;... > C12N15/10 (Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34))
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > ACEITES, GRASAS, MATERIAS GRASAS O CERAS ANIMALES... > COMPOSICIONES DETERGENTES; UTILIZACION DE UNA SOLA... > C11D3/00 (Otros compuestos que entran en las composiciones detergentes cubiertas por C11D 1/00)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > COMPUESTOS ACICLICOS O CARBOCICLICOS (compuestos... > Compuestos que contienen grupos amino unidos a una... > C07C211/63 (con átomos de nitrógeno cuaternizados unidos a átomos de carbono acíclicos)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > COMPUESTOS ACICLICOS, CARBOCICLICOS O HETEROCICLICOS... > Compuestos que contienen elementos de los grupos... > C07F9/54 (Compuestos de fosfonio cuaternario)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > COMPUESTOS ACICLICOS O CARBOCICLICOS (compuestos... > Compuestos que contienen grupos amino unidos a una... > C07C211/64 (con átomos de nitrógeno cuaternizados unidos a átomos de carbono de ciclos aromáticos de seis miembros)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > COMPUESTOS ACICLICOS O CARBOCICLICOS (compuestos... > Compuestos que contienen grupos amino unidos a una... > C07C211/62 (Compuestos de amonio cuaternario)

Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Finlandia, Chipre.

PDF original: ES-2373784_T3.pdf

 

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Fragmento de la descripción:

Procedimiento para la estabilización de ácidos nucleicos en materiales biológicos La presente invención se refiere a un procedimiento para la estabilización de ácidos nucleicos en materiales de origen biológico. Conforme al procedimiento según la invención, una muestra biológica con contenido en ácidos nucleicos se pone en contacto con una solución acuosa de estabilización que, como componente esencial, comprende un compuesto catiónico de la fórmula general Y+R1R2R3R4X

en la cual pueden significar Y nitrógeno o fósforo R1, R2, R3 y R4, independientemente entre sí, un radical alquilo (C1-C20) ramificado o no ramificado y/o un radical arilo (C8-C20) , así como un radical aralquilo (C8-C28) , y X-un anión de un ácido mono o polibásico, inorgánico u orgánico, y con al menos un donante de protones como aditivo.

Se prefieren procedimientos en los que se emplean compuestos catiónicos que se componen de una sal de amonio, en la que R1 significa un radical alquilo superior, preferentemente con 12, 14 ó 16 átomos de carbono, y R2, R3 y R4, significan en cada caso un grupo metilo.

Se prefieren, además, procedimientos en los que se emplean compuestos catiónicos, en los cuales R1 significa un grupo aralquilo -preferentemente un grupo bencilo -, R2 un radical alquilo superior – preferentemente con 12, 14 ó 16 átomos de carbono – y R3 y R4 un grupo metilo.

Como aniones se prefieren bromuro, cloruro, fosfato, sulfato, formiato, acetato, propionato, oxalato o succinato.

Alquilo (C1-C6) representa, en general, un radical hidrocarburo ramificado o no ramificado con 1 a 6 átomos de carbono, el cual puede estar sustituido eventualmente con uno a varios átomos de halógeno – preferentemente flúor -, los cuales pueden ser iguales o diferentes entre si. Como ejemplos se pueden citar los siguientes radicales de hidrocarburos:

Metilo, etilo, propilo, 1-metiletilo (iso-propilo) , butilo, 1-metilpropilo, 2-metilpropilo, 1, 1-dimetiletilo, n-pentilo, 1-metilbutilo, 2-metilbutilo, 3-metilbutilo, 1, 1-dimetilpropilo, 1, 2-dimetilpropilo, 2, 2-dimetilpropilo, 1-etilpropilo, hexilo, 1-metilpentilo, 2-metilpentilo, 3-metilpentilo, 4-metilpentilo, 1, 1-dimetilbutilo, 1, 2-dimetilbutilo, 1, 3dimetilbutilo, 2, 2-dimetilbutilo, 2, 3-dimetilbutilo, 3, 3-dimetilbutilo, 1-etilbutilo, 2-etilbutilo, 1, 1, 2-trimetilpropilo, 1, 2, 2-trimetilpropilo, 1-etil-1-metilpropilo y 1-etil-2-metilpropilo, Radical alquilo superior representa un radical alquilo (C7-C20) , ramificado o no ramificado el cual puede estar eventualmente sustituido con uno o varios átomos de halógeno – preferentemente flúor -, los cuales pueden ser iguales o diferentes entre si. Como ejemplos se pueden citar los siguientes radicales hidrocarburo:

heptilo, octilo, nonilo, decilo, undecilo, dodecilo, tetradecilo, hexadecilo, dodecadecilo y elcosilo, ramificados o no ramificados.

Alquenilo (C3-C6) representa en general un radical hidrocarburo ramificado o no ramificado, con 3 a 6 átomos de carbono, con uno o eventualmente varios enlaces dobles, el cual eventualmente puede estar sustituido con uno o varios átomos de halógeno – preferentemente flúor -, los cuales pueden ser iguales o diferentes entre si. Como ejemplos se pueden citar los siguientes radicales hidrocarburo:

2. propenilo (alilo) , 2-butenilo, 3-butenilo, 1-metil-2-propenilo, 2-metil-2-propenilo, 2-pentenilo, 3-pentenilo, 4pentenilo, 1-metil-2-butenilo, 2-metil-2-butenilo, 3-metil-2-butenilo, 1-metil-3-butenilo, 2-metil-3-butenilo, 3metil-3-butenilo, 1, 1-dimetil-2-propenilo, 1, 2-dimetil-2-propenilo, 1-etil-2-propenilo, 2-hexenilo, 3-hexenilo, 4hexenilo, 5-hexenilo, 1-metil-2-pentenilo, 2-metil-2-pentenilo, 3-metil-2-pentenilo, 4-metil-2-pentenilo, 1metil-3-pentenilo, 2-metil-3-pentenilo, 3-metil-3-pentenilo, 4-metil-3-pentenilo, 1-metil-4-pentenilo, 3-metil-4pentenilo, 4-metil-4-pentenilo, 1, 1-dimetil-1-butenilo, 1, 1-dimetil-2-butenilo, 1, 1-dimetil-3-butenilo, 1, 2dimetil-2-butenilo, 1, 2-dimetil-3-butenilo, 1, 3-dimetil-2-butenilo, 1, 3-dimetil-3-butenilo, 2, 2-dimetil-3-butenilo, 2, 3-dimetil-2-butenilo, 2, 3-dimetil-3-butenilo, 1-etil-2-butenilo, 1-etil-3-butenilo, 2-etil-1-butenilo, 2-etil-2butenilo, 2-etil-3-butenilo, 1, 1, 2-trimetil-2-propenilo, 1-etil-1-metil-2-propenilo y 1-etil-2-metil-2-propenilo.

Alquinilo (C3-C6) representa en general un radical hidrocarburo ramificado o no ramificado, con 3 a 6 átomos de carbono, con uno o eventualmente varios enlaces triples, el cual eventualmente puede estar sustituido con uno o varios átomos de halógeno – preferentemente flúor -, los cuales pueden ser iguales o diferentes entre si. Como ejemplos se pueden citar los siguientes radicales de hidrocarburos:

2. propinilo (propargilo) , 2-butinilo, 3-butinilo, 1-metil-2-propinilo, 2-metil-2-propinilo, 2-pentinilo, 3-pentinilo, 4-pentinilo, 1-metil-2-butinilo, 2-metil-2-butinilo, 3-metil-2-butinilo, 1-metil-3-butinilo, 2-metil-3-butinilo, 3metil-3-butinilo, 1, 1-dimetil-2-propinilo, 1, 2-dimetil-2-propinilo, 1-etil-2-propinilo, 2-hexinilo, 3-hexinilo, 4hexinilo, 5-hexinilo, 1-metil-2-pentinilo, 2-metil-2-pentinilo, 3-metil-2-pentinilo, 4-metil-2-pentinilo, 1-metil-3pentinilo, 2-metil-3-pentinilo, 3-metil-3-pentinilo, 4-metil-3-pentinilo, 1-metil-4-pentinilo, 3-metil-4-pentinilo, 4metil-4-pentinilo, 1, 1-dimetil-1-butinilo, 1, 1-dimetil-2-butinilo, 1, 1-dimetil-3-butinilo, 1, 2-dimetil-2-butinilo, 1, 2dimetil-3-butinilo, 1, 3-dimetil-2-butinilo, 1, 3-dimetil-3-butinilo, 2, 2-dimetil-3-butinilo, 2, 3-dimetil-2-butinilo, 2, 3dimetil-3-butinilo, 1-etil-2-butinilo, 1-etil-3-butinilo, 2-etil-1-butinilo, 2-etil-2-butinilo, 2-etil-3-butinilo, 1, 1, 2trimetil-2-propinilo, 1-etil-1-metil-2-propinilo y 1-etil-2-metil-2-propinilo.

Arilo representa -siempre que no se defina de otro modo – un radical aromático mono o polinuclear con 4 a 22 átomos de C, el cual puede contener eventualmente uno o dos heteroátomos. Como ejemplos se pueden citar: fenilo, naftilo, antracilo o, respectivamente, pirrol, furano, tiofeno, piridina, piridazina, pirimidina o pirazina, y el cual eventualmente, independientemente entre sí puede estar sustituido una o varias veces con halógeno (F, Cl, Br, I) – preferentemente flúor – o con un grupo alquilo.

Aralquilo significa un radical arilo mono o polinuclear en el sentido de la definición precedente, el cual a través de un puente de alquileno (C1-C6) , alquenileno (C3-C6) o alquinileno (C3-C6) , para los cuales valen respectivamente las definiciones de los grupos alquilo (C1-C6) , alquenilo (C3-C6) y alquinilo (C3-C6) , está unido a la estructura parcial catiónica. En el sentido de la presente invención se prefiere el grupo bencilo.

Como iones conjugados X- son adecuados preferentemente todos los aniones de los hidrácidos halogenados o los aniones de ácidos orgánicos mono o dibásicos tales como acetato u oxalato, malonato, succinato o citrato.

Como donantes de protones en el sentido de la presente invención son adecuados en primer lugar ácidos monocarboxílicos alifáticos saturados, ácidos alquenilcarboxílicos insaturados, ácidos dicarboxílicos (C2-C6) alifáticos saturados y/o insaturados, ácidos cetocarboxílicos o ácidos cetodicarboxílicos alifáticos, así como aminoácidos, junto con ácidos minerales o sus sales, solos o en combinación. En este caso se pueden emplear todos los ácidos orgánicos citados en forma no sustituida o como derivados sustituidos, entre los cuales se prefieren – siempre que no se indique de otro modo – los no sustituidos o los derivados una o, respectivamente, varias veces sustituidos con grupos hidroxilo.

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Reivindicaciones:

1. Procedimiento para la estabilización de ácidos nucleicos, caracterizado porque una muestra biológica con contenido en ácidos nucleicos se pone en contacto con una composición acuosa que comprende un compuesto catiónico de la fórmula general Y+R1R2R3R4X

en la cual pueden significar Y nitrógeno o fósforo R1, R2, R3 y R4, independientemente entre sí, un radical alquilo (C1-C20) no ramificado o ramificado y/o un radical arilo (C8-C20) , así como un radical aralquilo (C8-C28) , y X-un anión de un ácido mono o polibásico, inorgánico u orgánico, y con al menos un donante de protones como aditivo.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque R1 significa un radical alquilo superior y R2, R3 y R4 significan respectivamente un grupo metilo.

3. Procedimiento según la reivindicación 2, caracterizado porque R1 significa un radical alquilo con 12, 14 ó 16 átomos de carbono y R2, R3 y R4 significan respectivamente un grupo metilo.

4. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque el anión X-se elige del grupo de los aniones de hidrácidos halogenados o de aniones de ácidos orgánicos monobásicos o dibásicos.

5. Procedimiento según la reivindicación 4, caracterizado porque el anión X-se elige de los aniones del grupo bromuro, cloruro, fosfato, sulfato, formiato, acetato, propionato, oxalato, malonato, succinato o citrato.

6. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque el donante de protones se elige del grupo de los ácidos monocarboxílicos alifáticos saturados, de los ácidos alquenilcarboxílicos insaturados, de los ácidos dicarboxílicos (C2-C6) alifáticos saturados, de los ácidos hidroxi-di-o tri-carboxílicos, de los ácidos tricarboxílicos insaturados, de los ácidos cetodicarboxílicos alifáticos, de los aminoácidos o del grupo de los ácidos minerales o de sus sales, solos o en combinación.

7. Procedimiento según la reivindicación 6, caracterizado porque como ácido monocarboxílico alifático saturado se emplea un ácido alquil (C1-C6) carboxílico o mezclas de estos ácidos.

8. Procedimiento según la reivindicación 6, caracterizado porque como ácidos monocarboxílicos alifáticos saturados se emplean ácido acético, ácido propiónico, ácido n-butírico, ácido n-valérico, ácido isovalérico, ácido etilmetil-acético (ácido 2-metil-butírico) , ácido 2, 2-dimetilpropiónico (ácido pivalínico) , ácido n-hexanoico, ácido noctanoico, ácido n-decanoico, respectivamente ácido n-dodecanoico (ácido láurico) o mezclas de los citados ácidos.

9. Procedimiento según la reivindicación 6, caracterizado porque como ácido alquenilcarboxílico alifático se emplean ácido acrílico (ácido propenoico) , ácido metacrílico, ácido crotónico, ácido iso-crotónico o ácido vinilacético

o mezclas de los citados ácidos.

10. Procedimiento según la reivindicación 6, caracterizado porque como ácido dicarboxílico (C2-C6) alifático saturado se emplea un ácido dicarboxílico del grupo ácido oxálico, ácido malónico, ácido succínico, ácido glutárico o, respectivamente, ácido adípico o mezclas de los citados ácidos.

11. Procedimiento según la reivindicación 6, caracterizado porque como ácidos hidroxi-di-o tri-carboxílicos alifáticos se emplean ácido tartrónico, ácido D- (+) -, L- (-) -o DL-málico, ácido (2R, 3R) - (+) -tartárico, (2S, 3S) - (-) tartárico, ácido meso-tartárico y ácido cítrico o mezclas de los citados ácidos.

12. Procedimiento según la reivindicación 6, caracterizado porque como ácidos dicarboxílicos se emplean ácido maleico y/o ácido fumárico o mezclas de los citados ácidos.

13. Procedimiento según la reivindicación 6, caracterizado porque como ácido tricarboxílico insaturado se emplea ácido aconítico.

14. Procedimiento según la reivindicación 6, caracterizado porque como ácidos cetocarboxílicos alifáticos se emplea ácido mesoxálico o ácido oxálico o mezclas de los citados ácidos.

15. Procedimiento según la reivindicación 6, caracterizada porque como aminoácidos se emplean ácido aminoacético (glicina) , ácido a-aminopropiónico (alanina) , ácido a-amino-iso-valérico (valina) , ácido a-aminoisocaproico (leucina) y ácido a-amino--metilvalérico (isoleucina) o mezclas de los citados ácidos.

16. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 15, caracterizado porque el compuesto catiónico se

presenta en una concentración comprendida en un intervalo de 0, 01% en peso hasta la saturación.

17. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque la mezcla a base de la muestra biológica con contenido en ácidos nucleicos y la composición presenta eventualmente otros coadyuvantes.

18. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque como ácidos nucleicos se estabilizan ácidos ribonucleicos (ARN) y ácidos desoxirribonucleicos (ADN) .

19. Procedimiento según la reivindicación 17, caracterizado porque el valor del pH de la mezcla a base de la muestra biológica y la composición se sitúa en un intervalo de 2 a 12.

20. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque antes de la mezcladura de la muestra biológica con a composición o en la solución de estabilización de la muestra biológica, la muestra biológica se somete a una acción mecánica, física, química o enzimática.

21. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el material de la muestra se almacena en la composición y, a continuación, se somete directamente a una analítica o detección de ácidos nucleicos.

22. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el material de la muestra se almacena en la composición y, a continuación, se purifican los ácidos nucleicos.

23. Procedimiento según la reivindicación 22, caracterizado porque los ácidos nucleicos o las células o partículas con contenido en ácidos nucleicos se separan por filtración o centrifugación de la solución restante, y los ácidos nucleicos o las células o partículas con contenido en ácidos nucleicos separados se someten a otra purificación.

24. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 23, caracterizado porque la muestra biológica en la muestra, que puede contener eventualmente virus o bacterias, es sangre, plasma o suero.

25. Procedimiento según la reivindicación 24, caracterizado porque el valor del pH de la mezcla se sitúa en un intervalo de 2 a 6.

26. Procedimiento según una de las reivindicaciones 24 a 25, caracterizado porque se aíslan los complejos a base de compuesto catiónico y ADN y/o ARN.

27. Procedimiento según la reivindicación 26, caracterizado porque el sedimento a base de ARN o ADN y compuesto catiónico, obtenido en el aislamiento, se recoge en un tampón.

28. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 23, caracterizado porque la muestra biológica que eventualmente puede contener virus o bacterias se materializa por una punción, por células, tejidos o bacterias.

29. Procedimiento según la reivindicación 28, caracterizado porque el valor del pH de la mezcla se sitúa en un intervalo de 3 a 10.