Método y combinación on de reactivos para determinar secuencias de nucleótidos.

Un método para determinar la secuencia de un polímero de ácido nucleico diana que comprende:

(a) combinar una muestra que contiene el polímero de ácido nucleico diana con una mezcla de nucleósido-trifosfatos , una polimerasa de ácido nucleico, y primero y segundo cebadores de multiplicación, comprendiendo cada cebador de multiplicación un oligonucleótido que tiene una región que es complementaria para y se hibrida con una cadena diferente del polímero de ácido nucleico diana y que es eficaz como cebador para polimerización de ácido nucleico por la polimerasa de ácido nucleico con objeto de formar una mezcla de multiplicación, en el cual dicho primer cebador de multiplicación comprende adicionalmente un primer resto de unión fijado al oligonucleótido;
(b) ciclar repetidamente la mezcla de multiplicación entre una primera condición en la cual se produce polimerización de ADN y una segunda condición en la cual se produce desnaturalización de ADN bicatenario para dar ADN monocateneario durante un número de ciclos suficiente para producir copias
del polímero de ácido nucleico diana en una cantidad adecuada para uso en un procedimiento de secuenciación de ADN con objeto de formar una muestra multiplicada que comprende copias de la secuencia de ácido nucleico diana fijadas al resto de unión;
(c) añadir a la muestra multiplicada una pluralidad de primeros soportes, cada uno de los cuales comprende una matriz sólida y un primer sitio de unión que es capaz de inmovilizar una cadena del polímero de ácido nucleico diana a través del primer resto de unión;
(d) dejar que los primeros sitios de unión interacciones con los primeros restos de unión de tal manera que las copias del ácido nucleico diana en la muestra multiplicada se inmovilicen sobre los primeros soportes;
(e) separar los ácidos nucleicos inmovilizados a partir de la mezcla de multiplicación;
(f) desnaturalizar la muestra de ácido nucleico multiplicado para formar ácidos nucleicos monocatenarios; y
(g) determinar la secuencia de los ácidos nucleicos monocatenarios inmovilizados.

Tipo: Resumen de patente/invención.

Solicitante: SANGTEC MEDICAL AB.

Nacionalidad solicitante: Suecia.

Dirección: BALLSTAVAGEN 30-32, 161 02 BROMMA.

Inventor/es: SYVANEN, ANN-CHRISTINE ELIZABETH, SODERLAND, HANS ERIK.

Fecha de Publicación: .

Fecha Concesión Europea: 21 de Febrero de 1996.

Clasificación Internacional de Patentes:

  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS... > Procesos de medida, investigación o análisis en... > C12Q1/68 (en los que intervienen ácidos nucleicos)
  • SECCION G — FISICA > METROLOGIA; ENSAYOS > INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION... > Investigación o análisis de materiales por métodos... > G01N33/53 (Ensayos inmunológicos; Ensayos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas; Materiales a este efecto)
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