Verde de indocianina para la utilización en un método de diagnóstico de la artritis,

comprendiendo el método las etapas siguientes, en las que:

(a) debe administrarse un verde de indocianina (ICG) preferentemente mediante inyección de bolo,

(b) una región del cuerpo debe exponerse a luz de una longitud de onda que puede excitar el verde de indocianina,

(c) la fluorescencia en la región del cuerpo debe medirse en múltiples instantes temporales, en el que un incremento de la fluorescencia en las articulaciones es indicativo de artritis y en el que dicho incremento se detecta en menos de 300 s después de la administración del verde de indocianina, y en el que el máximo de fluorescencia en las articulaciones artríticas se alcanza dentro de un tiempo de 180 s, y en el que la fluorescencia máxima en las articulaciones enfermas es superior a la fluorescencia máxima en las articulaciones no afectadas y/o en el que el máximo de fluorescencia en las articulaciones artríticas es más prematuro que en articulaciones sanas.

Formación de imágenes ópticas de la artritis reumatoide.

Introducción La presente invención se refiere a verde de indocianina para la utilización en el diagnóstico de la artritis, en particular de la artritis reumatoide.

Antecedentes de la técnica El pigmento indotricarbocianina verde de indocianina (ICG) fue sintetizado por primera vez en los años cincuenta (Heseltine D.W., patente US nº 2.895.955, 1959) y autorizado clínicamente como fármaco diagnóstico para la evaluación de la función hepática y el gasto cardiaco, para las que el ICG muestra propiedades farmacocinéticas favorables (Caesar J. et al., Clin. Sci. 21:43, 1961; Dorshow R.B. et al., J. Biomed. Optics 3:340, 1998) . En los años noventa se descubrió que era un agente de formación de imágenes diagnósticas y frecuentemente se aplica en la actualidad para la angiografía por fluorescencia para visualizar trastornos vasculares oftalmológicos (Brancato R. et al., Semin. Ophthalmol. 13:189, 1998; Richard G., Soubrane G., Yanuzzi L., editores, Fluorescein and ICG angiography, Thieme, Alemania, 1998) . El ICG ha sido estudiado como potencial agente de contraste de NIR para la detección de tumores tanto en animales (Reynolds J.S. et al., Photochem. Photobiol. 70:87, 1999; Licha K. et al., Photochem. Photobiol. 72:392, 2000) como en pacientes (Ntziachritos V. et al., Proc. Nat. Acad. Sci. USA 97:2767, 2000) . La rápida eliminación de la sangre del ICG proporciona no sólo una estrecha ventana temporal para las investigaciones con contraste mejorado sino una eficiencia cuántica de fluorescencia relativamente baja en ambientes fisiológicos, lo que ha motivado algunos intentos para diseñar agentes estructuralmente relacionados con mejores propiedades (Landsman M.L.J. et al., J. Appl. Physiol. 40:575, 1976; Licha K. et al., Photochem. Photobiol. 72:392, 2000) .

La utilización de pigmentos fluorescentes para la formación diagnóstica de imágenes ha sido publicada en numerosas solicitudes de patente y artículos científicos. Estas publicaciones tienen en común que pretenden proporcionar agentes diagnósticos mejorados y/o agentes que utilizan estructuras tales como ICG como parte de nuevas entidades químicas poliméricas, en particular entidades diana y/o activables (documentos nº WO2005/019247, nº WO2004/028449, nº US2004/156785, nº WO2002/087498, nº WO2002/000265, nº US2002103517, nº WO98/48846) . El ICG también ha sido descrito como un pigmento para el tratamiento de enfermedades utilizando irradiación lumínica (patente US nº 6.443.976, Tuchin V.V. et al., Lasers Surg. Med. 33:296, 2003; Greenwell T.J. et al., Eur. J. Surg. Oncol. 27:368, 2001) .

El documento US2004156785 describe agentes de contraste bioactivables (MRI y ópticos) que comprenden ICG y su utilización en la formación de imágenes.

La formación diagnóstica de imágenes de la artritis reumatoide utilizando luz es un enfoque experimental conocido (Scheel A.K. et al., Arthrit. Rheum. 46:1177, 2002) . La aplicación de pigmentos fluorescentes como sondas de formación de imágenes se ha descrito en la literatura utilizando diferentes tipos de agentes (Chen W.T. et al., Arthritis Res. Ther. 7:R310; Hansch A. et al., Invest. Radiol. 39:626, 2004; Wunder A. et al., Arthritis Rheum. 50:2459, 2004) . En particular, Hansch A. et al., Invest. Radiol. 39:626, 2004, demostraron que la fluorescencia de rango infrarrojo próximo (NIRF) en combinación con fluorocromo Cy5.5 puede identificar la artritis y es una herramienta potencial para la detección precoz de las articulaciones artríticas en un modelo murino in vivo. Los autores han sugerido además que en el futuro próximo resultará posible formar imágenes completas de las articulaciones menores de la mano en unos cuantos segundos. Sin embargo, ninguna de dichas publicaciones ha descrito la idoneidad particular de los pigmentos indocarbocianina, en particular de ICG como agente de formación obtención diagnóstica de imágenes para la formación de imágenes de enfermedades inflamatorias, en particular de la artritis reumatoide.

Descripción detallada de la invención A menos que indique lo contrario, todos los términos técnicos y científicos utilizados en la presente memoria presentan los mismos significados que los apreciados habitualmente por el experto ordinario en la materia.

Preferentemente, los términos utilizados en la presente memoria se describen en "A multilingual glossar y of biotechnological terms: (IUPAC Recommendations) ", Leuenberger H.G.W., Nagel B. y Klbl H., editores, Helvetic Chimica Acta, CH-4010, Basel, Suiza, 1995) .

A lo largo de la presente memoria y en las reivindicaciones, posteriormente, a menos que el contexto indique lo contrario, el término "comprende" y variaciones tales como "comprenden" y "que comprende", se entenderá que implican la inclusión de un número entero o etapa o grupo de números enteros o etapas indicados, pero no la exclusión de cualquier otro número etapa o etapa o grupo de números enteros o etapas.

Inesperadamente, se ha descubierto un nuevo enfoque que permite detectar y cuantificar áreas de artritis, en particular artritis reumatoide, por ejemplo en articulaciones, que se basa en la distribución diferencial y/o tiempo de residencia del pigmento indocarbocianina ICG en áreas sanas e inflamadas. Se ha desarrollado un equipo con compuertas temporales para la formación continua de imágenes (hasta un fotograma por segundo) de, por ejemplo, manos o pies inflamados. Los pigmentos indocarbocianina de infrarrojo cercano (NIR) con propiedades farmacocinéticas similares al ICG son perfectamente adecuados para identificar áreas inflamatorias, en particular de artritis reumatoide en las articulaciones. Se ha desarrollado un algoritmo para la investigación de regiones de interés en los fotogramas y para la investigación de intensidades de fluorescencia en dependencia del tiempo tras la aplicación i.v. de, por ejemplo, el pigmento indotricarbocianina ICG.

Un primer aspecto de la presente invención se refiere a la utilización de verde de indocianina para la preparación de un medicamento destinado al diagnóstico de la artritis.

Se ha observado que las indocarbocianinas muestran una localización preferida y/o una distribución alternativa en las regiones inflamatorias, en comparación con el tejido sano. Esta preferencia aparentemente no depende de la unión de un grupo de localización, que puede presentar una afinidad incrementar para un sitio inflamatorio. De esta manera, no se une ningún grupo de localización al ICG utilizable según la presente invención.

Un pigmento indocarbocianina presenta la fórmula general (I) : 20

en la que C representa un radical (II) o (III) :

en el que la posición que se ha marcado con el asterisco es el punto de unión al radical A y en el que A representa un grupo seleccionado de entre los grupos (IV) , (V) , (VI) , (VII) o (VIII) :

en los que:

R1 y R2, independientemente, representan una cadena sulfoalquilo C1-C4, por ejemplo sulfometilo, sulfoetilo, n-sulfopropilo, isosulfopropilo, sulfobutilo, iso-sulfobutilo, sec-sulfobutilo, terc-isobutilo, o 5 una cadena alquilo C1-C50 saturada o insaturada de cadena ramificada o lineal, por ejemplo CH3, C2H5, C3H7, C4H9, C5H11, C6H13, C7H15, C8H17, C9H19, C10H21, C11H23, C12H23, C13H27, C14H19, C15H31, C16H33, C17H35, C18H37, C19H39, C20H41, C21H43, C22H45, C23H47, C24H49, C25H51, C26H53, C27H55, C28H57, C29H59, C30H61, C31H63, que opcionalmente se sustituyen con 0 a 15, por ejemplo 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ó 15 átomos de oxígeno y/o con 0 a 3 grupos carbonilo, por ejemplo 1, 2 ó 3 y/o con 0 a 5, por ejemplo 1, 2, 3, 4 ó 5 grupos hidroxilo u opcionalmente se interrumpe con 0 a 15, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ó 15 átomos de oxígeno y/o con 0 a 3, por ejemplo 1, 2 ó 3 grupos carbonilo y/o pueden sustituirse con 0 a 5, por ejemplo 1, 2, 3, 4 ó 5 grupos hidroxilo;

R3

representa una cadena carbohidrato de cadena lineal con como máximo 20 residuos hidrocarburo, en particular metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, terc-butilo, pentilo, hexilo, pentilo, octilo, nonilo, decilo, undecilo, dodecilo, tridecilo, tetradecilo, pentadecilo, hexadecilo, heptadecilo, octadecilo, nonadecilo, eicosilo, que se sustituye con uno o más grupos -OH, -COOH, -SO3 y/o se interrumpe opcionalmente una o más veces (preferentemente 2, 3, 4, 5 ó 6 veces) con un grupo

20 O-, -S-, -CO-, -CS-, -CONH, -NHCO-, NHCSNH-, -SO2-, -PO4--, arilo y/o -NH-.

1. Verde de indocianina para la utilización en un método de diagnóstico de la artritis, comprendiendo el método las etapas siguientes, en las que: 5

(a) debe administrarse un verde de indocianina (ICG) preferentemente mediante inyección de bolo,

(b) una región del cuerpo debe exponerse a luz de una longitud de onda que puede excitar el verde de indocianina,

(c) la fluorescencia en la región del cuerpo debe medirse en múltiples instantes temporales, en el que un incremento de la fluorescencia en las articulaciones es indicativo de artritis y en el que dicho incremento se detecta en menos de 300 s después de la administración del verde de indocianina, y en el que el máximo de fluorescencia en las articulaciones artríticas se alcanza dentro de un tiempo de 180 s, y en el que la fluorescencia máxima en las articulaciones enfermas es superior a la fluorescencia máxima en las articulaciones no afectadas y/o en el que el máximo de fluorescencia en las articulaciones artríticas es más prematuro que en articulaciones sanas.

2. Verde de indocianina para la utilización en un método según la reivindicación 1, en el que la artritis se selecciona de entre el grupo constituido por artritis reumatoide, osteoartritis, artritis soriásica, artritis traumática, artritis bacteriana, artritis posinfecciosa, enfermedad de Lyme (borreliosis) , espondilitis anquilosante y artritis por rubéola.

3. Verde de indocianina para la utilización en un método de diagnóstico de la artritis reumatoide según la reivindicación 1 ó 2, en el que la fluorescencia es detectable en primer lugar en las articulaciones de los dedos en un paciente con artritis reumatoide y en el que la fluorescencia es detectable en primer lugar en las puntas de los dedos en una persona sana.

4. Verde de indocianina para la utilización en un método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el diagnóstico se administra en una cantidad de 10 mg/kg de peso corporal o menos, preferentemente de 1 mg/kg de peso corporal o menos, más preferentemente en una cantidad de 0, 1 mg/kg de peso corporal.

5. Verde de indocianina para la utilización en un método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el diagnóstico se inyecta en la región del cuerpo que debe diagnosticarse o en un vaso sanguíneo o en el sistema linfático, que proporciona sangre o linfa a la región del cuerpo que debe diagnosticarse.

6. Verde de indocianina para la utilización en un método según la reivindicación 5, en el que el diagnóstico se 35 inyecta en la vena del brazo.

7. Verde de indocianina para la utilización en un método según las reivindicaciones 1 a 6, en el que la luz en la etapa (b) se aplica en continuo modulada en amplitud o pulsada.

8. Verde de indocianina para la utilización en un método según las reivindicaciones 1 a 7, en el que la luz presenta una longitud de onda de entre 600 nm y 2, 2 μm.

9. Verde de indocianina para la utilización en un método según las reivindicaciones 1 a 8, en el que la fluorescencia se mide en múltiples instantes temporales por lo menos durante 20 s, preferentemente durante por lo menos 30 s, 45 40 s, 50 s, 60 s ó 120 s después de la administración del verde de indocianina.

10. Verde de indocianina para la utilización en un método según las reivindicaciones 1 a 9, en el que la fluorescencia en la región del cuerpo se detecta en cada instante temporal como una imagen y/o mediante barrido de la región del cuerpo.

11. Verde de indocianina para la utilización en un método según las reivindicaciones 1 a 10, en el que la fluorescencia se detecta a intervalos de 5 s o menos.

12. Verde de indocianina para la utilización en un método según las reivindicaciones 1 a 11, en el que está previsto

55 un estándar fluorescente en las proximidades a la región corporal de la que se forma una imagen, con el fin de normalizar la fluorescencia medida.

13. Verde de indocianina para la utilización en un método según las reivindicaciones 1 a 12, en el que se utiliza un programa informático para determinar un patrón con resolución temporal de la circulación, preferentemente un 60 patrón de la circulación sanguínea dentro de una región del cuerpo.

14. Verde de indocianina para la utilización en un método según la reivindicación 13, en el que el patrón de circulación sanguínea en un paciente que se sospecha que presenta artritis se compara con el patrón de circulación sanguínea en un paciente sano y en el que las alteraciones del patrón de circulación sanguínea son indicativas de 65 artritis.

15. Verde de indocianina para la utilización en un método según las reivindicaciones 1 a 14, en el que la región del cuerpo se selecciona de entre mano, pie, rodilla, codo y hombro.