Cultivo de células madre embrionarias de primates.
Un medio de cultivo que comprende albúmina, aminoácidos, vitaminas,
minerales, al menos una transferrina o sustituto de transferrina, al menos una insulina o sustituto de insulina, el medio de cultivo libre de suero animal y conteniendo al menos 100 ng/ml de un factor de crecimiento de fibroblastos seleccionado de entre el grupo que consiste en FGF4, FGF9, FGF17 y FGF18, el medio adecuado para cultivar células madre embrionarias de primates en ausencia de suero y en ausencia de células alimentadoras y también en ausencia de medio expuesto a células alimentadoras, donde al menos el 90 % de las células madre en el medio de cultivo expresan Oct-4, SSEA4 o Tral-60.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2005/034510.
Solicitante: WISCONSIN ALUMNI RESEARCH FOUNDATION.
Inventor/es: THOMSON,James A, LEVENSTEIN,MARK.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12N5/0735 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 5/00 Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00). › Células madre embrionarias; Células germinales embrionarias.
PDF original: ES-2800973_T3.pdf
Reivindicaciones:
1. Un medio de cultivo que comprende albúmina, aminoácidos, vitaminas, minerales, al menos una transferrina o sustituto de transferrina, al menos una insulina o sustituto de insulina, el medio de cultivo libre de suero animal y conteniendo al menos 100 ng/ml de un factor de crecimiento de fibroblastos seleccionado de entre el grupo que consiste en FGF4, FGF9, FGF17 y FGF18, el medio adecuado para cultivar células madre embrionarias de primates en ausencia de suero y en ausencia de células alimentadoras y también en ausencia de medio expuesto a células alimentadoras, donde al menos el 90 % de las células madre en el medio de cultivo expresan Oct-4, SSEA4 o Tral-60.
2. El medio de la reivindicación 1, donde las células madre embrionarias de primates son células madre embrionarias humanas.
3. El medio de la reivindicación 1 o 2, donde el factor de crecimiento de fibroblastos está presente en una concentración de 100 ng/ml.
4. Un procedimiento para cultivar células madre embrionarias de primates, que comprende:
cultivar las células madre en un cultivo libre de suero fetal de mamífero y en un medio de cultivo de células madre que incluye aminoácidos, vitaminas, sales, minerales, transferrina o un sustituto de transferrina, insulina o un sustituto de insulina, albúmina, y una concentración mínima del factor de crecimiento de fibroblastos (FGF) de 100 ng/ml, donde el FGF se selecciona de entre el grupo que consiste en FGF4, FGF9, FGF17 y FGF18, y donde el medio es capaz de soportar el cultivo y la proliferación de células madre pluripotentes euploides proliferativas indiferenciadas humanas, sin células alimentadoras o exposición del medio a células alimentadoras, y donde al menos el 90 % de las células madre en el cultivo expresan Oct-4, SSEA4 o Tral-60.
5. Un procedimiento para cultivar células madre embrionarias de primates en medios definidos sin suero y sin células alimentadoras, comprendiendo el procedimiento:
cultivar las células madre en un medio de cultivo que contiene albúmina, aminoácidos, vitaminas, minerales, al menos una transferrina o sustituto de transferrina, al menos una insulina o un sustituto de insulina, el medio de cultivo libre de suero fetal de mamífero y conteniendo al menos 100 ng/ml de un factor de crecimiento de fibroblastos seleccionado de entre el grupo que consiste en FGF4, FGF9, FGF17 y FGF18, soportando el medio la proliferación de células madre en un estado indiferenciado sin células alimentadoras o medio acondicionado, y donde al menos el 90 % de las células madre en el cultivo expresan Oct-4, SSEA4 o Tral-60.
6. El procedimiento de la reivindicación 5, donde dicha etapa de cultivo incluye las células madre embrionarias que proliferan en cultivo durante más de un mes mientras se mantiene el potencial de las células madre para diferenciarse en derivados de tejidos de endodermo, mesodermo y ectodermo, y mientras se mantiene el cariotipo de las células madre.
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