Procesos para empaquetar oligonucleótidos en partículas de tipo viral de bacteriófagos de ARN.
Una composición que comprende
(i) una partícula de tipo viral,
en la que dicha partícula de tipo viral es una partícula de tipo viral de un bacteriófago de ARN Qß, y
(ii) un oligonucleótido, en la que dicho oligonucleótido tiene la secuencia de ácidos nucleicos "G10" GGGGGGGGGG GACGATCGTC GGGGGGGGGG (SEC ID NO: 8), y en la que dicho oligonucleótido está empaquetado en dicha partícula de tipo viral;
en la que dicha composición se puede obtener mediante un proceso para producir dicha composición, comprendiendo dicho proceso las etapas de:
(a) proporcionar una proteína de cubierta de dicho bacteriófago de ARN Qß, en el que dicha proteína de cubierta consiste en una secuencia de aminoácidos seleccionada entre el grupo que consiste en: (a) SEC ID NO: 10; y (b) una mezcla de SEC ID NO: 10 y SEC ID NO: 11;
(b) proporcionar un oligonucleótido,
(i) en el que dicho oligonucleótido comprende al menos un tramo de poli G; y
(ii) en el que dicho oligonucleótido comprende un tiempo de inicio de pico relativo de un 50 a un 110 %, en la que dicho tiempo de inicio de pico relativo se determina mediante HPLC de exclusión por tamaño con la cápside de dicho bacteriófago de ARN Qß como patrón;
(c) generar una mezcla, en el que dicha mezcla comprende
(i) dicha proteína de cubierta, en la que preferentemente la concentración de dicha proteína de cubierta en dicha mezcla es de 1 a 4 mg/ml, más preferentemente 2,5 mg/ml, y/o en la que más preferentemente la concentración de dicho oligonucleótido en dicha mezcla es de 25 a 100 μM, más preferentemente 62,5 μM;
(ii) un agente capaz de prevenir el autoensamblaje de dicha proteína de cubierta, en la que preferentemente dicho agente comprende un compuesto de desnaturalización seleccionado entre urea y clorhidrato de guanidinio, en la que más preferentemente dicho compuesto de desnaturalización es urea, y en la que aún más preferentemente la concentración de dicha urea en dicha mezcla es de 0,25 a 7,2 M, preferentemente 1 M;
(iii) dicho oligonucleótido;
(d) retirar dicho agente de dicha mezcla, en el que preferentemente dicha retirada de dicho agente de dicha mezcla se lleva a cabo mediante un primer intercambio de tampón con un primer tampón, en el que dicho primer tampón comprende cloruro sódico, en el que preferentemente la concentración de dicho cloruro sódico en dicho primer tampón es de 0 a 1 M, preferentemente de 0 a 550 mM, más preferentemente de 0 a 350 mM, aún más preferentemente de 50 a 350 mM, y lo más preferentemente 250 mM; y
(e) permitir que dicha proteína de cubierta se autoensamble en una partícula de tipo viral.
Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E12167784.
Solicitante: Kuros Biosciences AG.
Nacionalidad solicitante: Suiza.
Dirección: Wagistrasse 25 8952 Schlieren SUIZA.
Inventor/es: KINZLER,MATTHIAS, PROBA,KARL.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C07H21/00 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07H AZUCARES; SUS DERIVADOS; NUCLEOSIDOS; NUCLEOTIDOS; ACIDOS NUCLEICOS (derivados de ácidos aldónicos o sacáricos C07C, C07D; ácidos aldónicos, ácidos sacáricos C07C 59/105, C07C 59/285; cianohidrinas C07C 255/16; glicales C07D; compuestos de constitución indeterminada C07G; polisacáridos, sus derivados C08B; ADN o ARN concerniente a la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos o su aislamiento, preparación o purificación C12N 15/00; industria del azúcar C13). › Compuestos que contienen al menos dos unidades mononucleótido que tienen cada una grupos fosfato o polifosfato distintos unidos a los radicales sacárido de los grupos nucleósido, p. ej. ácidos nucleicos.
- C12N15/11 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Fragmentos de ADN o de ARN; sus formas modificadas (ADN o ARN no empleado en tecnología de recombinación C07H 21/00).
- C12N15/117 C12N 15/00 […] › Acidos nucleicos que tienen propiedades inmunomoduladoras, p.ej. que contienen motivos CpG.
- C12N7/04 C12N […] › C12N 7/00 Virus, p. ej. bacteriófagos; Composiciones que los contienen; Su preparación o purificación (preparaciones de uso médico que contienen virus A61K 35/76; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos virales, p. ej. vacunas virales, A61K 39/00). › Inactivación o atenuación; Producción de partes elementales de virus.
PDF original: ES-2738986_T3.pdf
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