Diagnóstico de preeclampsia.

Uso de hemoglobina fetal como marcador para preeclampsia.

Diagnóstico de preeclampsia

Campo de la invención La presente invención se refiere a biomarcadores para preeclampsia. En particular, la invención se refiere a métodos para el diagnóstico o la ayuda en el diagnóstico de preeclampsia de un mamífero hembra embarazado para detectar niveles elevados de sustancias particulares. Esto facilita y hace posible el diagnóstico temprano y la intervención clínica cuando se encuentra un estado preeclámptico.

Antecedentes de la invención La preeclampsia (PE) , hipertensión proteinúrica gestacional, complica el 3-7% de todos los embarazos, y

es un trastorno materno multisistémico. Cada año se notifican 8.500.000 casos en todo el mundo, de los cuales 5.000 son en Suecia. Actualmente es la causa más común de muerte para tanto los niños como las madres durante el embarazo.

La PE se ha denominado la enfermedad de las teorías [Roberts, 2001] y se describió tan pronto como hace 3000 años por los antiguos egipcios [Stevens, 1975]. La PE es todavía una de las complicaciones obstétricas dominantes que pro

vocan morbimortalidad perinatal y materna. Las manifestaciones clínicas, es decir, hipertensión y proteinuria, aparecen desde las 20 semanas de gestación en adelante, pero los mecanismos subyacentes pueden empezar tan pronto como en el momento de la implantación. A medida que la enfermedad progresa, el angiospasmo en el cerebro y el edema cerebral pueden provocar convulsiones epilépticas graves-eclampsia [Lipstein et al., 2003].

La etiología para la PE se desconoce todavía; sin embargo datos recientes sugieren que la enfermedad evoluciona en 20 dos fases:

Fase 1. Durante la placentación, se ha mostrado una invasión defectuosa de las células placentarias, trofoblastos, al interior de las capas musculares de las arterias espirales [Brosens et al., 2002; página, 1939]. Un conjunto creciente de pruebas sugiere que el estrés oxidativo (véase a continuación) agrava adicionalmente la función vascular en la placenta [Roberts, 1999], lo que a su vez [Shennan et al., 2001] da lugar a perfusión sanguínea alterada [Hung et al., 2002]. Si

guen como consecuencia vasoconstricción y resistencia elevada al flujo sanguíneo. Los resultados de la matriz muestran participación de genes tanto en la regulación redox como en la inflamación [Hansson et al., 2005].

Fase 2. La perfusión placentaria disminuida, en combinación con el estrés oxidativo, provoca daño de células endoteliales general dentro de la placenta. En la última parte de la fase 2, la inflamación endotelial también daña el sistema vascular materno, los riñones en particular, lo que es un hallazgo histológico típico en la PE [Roberts et al., 1989; de Groot y

Taylor, 1993; Granger et al., 2001; Strevens et al, 2003]. Hasta la fecha no se conoce el vínculo entre la fase uno y dos.

En general, la preeclampsia se produce en mujeres durante su primer embarazo, y más comúnmente afecta a adolescentes y mujeres de más de 35 años de edad. Mujeres con enfermedades subyacentes que las predisponen a hipertensión también están entre las que corren mayor riesgo para el desarrollo de este estado. La preeclampsia es la causa principal de morbimortabilidad materna. Representa el 12-18% de todas las muertes maternas relacionadas con el em35 barazo (alrededor de 70 muertes maternas al año en los Estados Unidos y una estimación de 50.000 muertes maternas al año en todo el mundo) . También se asocia con una alta morbimortalidad perinatal, debido principalmente a prematuridad iatrogénica. Son comunes manifestaciones neurológicas en la preeclampsia, e incluyen de cefaleas, aberraciones visuales a manifestaciones más graves tales como convulsiones, accidente cerebrovascular y ceguera cortical. El parto del feto y la eliminación de la placenta es el único tratamiento curativo para la preeclampsia, un hecho que ha conducido a la teoría generalmente aceptada de que la patología placentaria es fundamental para el desarrollo de preeclampsia. A pesar de intensos esfuerzos de investigación, la etiología de la preeclampsia sigue siendo en gran parte desconocida.

Tal como se mencionó anteriormente, se cree que una placentación inadecuada, que da como resultado perfusión placentaria reducida, es una etapa temprana en el desarrollo de PE. La perfusión reducida asociada con el aumento de la resistencia vascular puede detectarse con ultrasonido Doppler, y mujeres con pruebas de resistencia aumentada en las 45 arterias uterinas de manera temprana en sus embarazos (“incisura”) corren un riesgo superior de desarrollo de PE que mujeres sin este hallazgo. A medida que la PE progresa, el lecho vascular materno se ve afectado, y se observa una inflamación endotelial general. La mala perfusión placentaria parece para dar como resultado una cascada de cambios patológicos: disminución del suministro de oxígeno, estrés oxidativo, formación de especies reactivas de oxígeno, daño endotelial, aumento de la permeabilidad vascular e inflamación (véase la figura 1) .

Los síntomas de preeclampsia aparecen normalmente en el tercer trimestre de embarazo y habitualmente se detectan mediante monitorización de rutina de la orina y tensión arterial de la mujer. Sin embargo, estos métodos de monitorización son ineficaces para el diagnóstico del síndrome en una fase temprana. El diagnóstico temprano podría reducir el riesgo para el sujeto o feto en desarrollo y podrían monitorizarse más específicamente pacientes de alto riesgo. Además, un tratamiento eficaz, del que actualmente todavía se carece, sería ideal en combinación con una detección 55 temprana.

Se han descrito algunos métodos de diagnóstico en la técnica anterior pero ninguno de ellos se ha usado aún satisfactoriamente en la práctica clínica a gran escala. Por ejemplo pueden mencionarse: los documentos US 5.079.171 y US 5.108.898, que dan a conocer que la preeclampsia, hipertensión inducida por el embarazo, y la eclampsia pueden diagnosticarse identificando la presencia de un marcador de células endoteliales, fibronectina celular, en una muestra de sangre, plasma o suero de una mujer embarazada, por ejemplo, usando un inmunoensayo de competición o de tipo sándwich. La fibronectina celular se deriva de células endoteliales que se rompen o alteran durante el proceso patológico. El documento US 5.238.819 da a conocer el diagnóstico de preeclampsia usando un ensayo para medir un factor mitogénico en la sangre. El factor mitogénico es un compuesto proteínico de aproximadamente 160 kDa y puede estimular la mitosis de fibroblastos. Su presencia se detecta detectando la captación de timidina radiomarcada por células activadas mediante los sueros o el plasma de un sujeto preeclámptico. Este marcador aparece después que ya se haya producido el daño al lecho vascular materno, por tanto de manera tardía en la progresión de la enfermedad.

El documento WO 05/093413 (Yale University and Brigham and Women’s Hospital) da a conocer un método de diagnóstico de preeclampsia grave en una mujer embarazada, que comprende medir el nivel de hemoglobina libre en una muestra de líquido cefalorraquídeo.

Actualmente, no hay curas conocidas para la preeclampsia. La preeclampsia puede variar en gravedad desde leve hasta potencialmente mortal. Una forma leve de preeclampsia puede permanecer leve con reposo en cama y monitorización frecuente. Para casos de moderados a graves, es necesaria hospitalización y se prescriben medicación para la tensión arterial y medicamentos anticonvulsivos para prevenir las convulsiones. Si el estado se vuelve potencialmente mortal de la madre o el bebé, la única cura es terminar el embarazo dando como resultado a menudo un bebé nacido prematuramente.

Claramente, la falta de terapia para la preeclampsia acoplada con la falta secular de capacidad de diagnosticarla hasta que la enfermedad ha progresado a una forma más grave, da lugar a la necesidad de enfoques novedosos para diagnosticar y tratar la preeclampsia, que es un problema de salud pública significativo.

Descripción de la invención Por consiguiente, hay una necesidad de identificar biomarcadores que puedan identificar de manera fiable i) sujetos embarazados que corren el riesgo de desarrollar preeclampsia, ii) sujetos embarazados que padecen preeclampsia en fase temprana, y/o iii) sujetos embarazados que padecen preeclampsia (independientemente de si se ha diagnosticado o no) . Además, hay una necesidad de desarrollar regímenes de tratamiento para mujeres embarazadas en cualquiera de los grupos i) -iii) mencionados anteriormente.

La presente invención proporciona un biomarcador de ese tipo, concretamente hemoglobina fetal, que se ha mostrado que entra en el sistema circulatorio... [Seguir leyendo]

1. Uso de hemoglobina fetal como marcador para preeclampsia.

2. Uso según la reivindicación 1, en el que la hemoglobina fetal se determina en una muestra biológica no fetal de un mamífero hembra embarazado.

3. Uso según la reivindicación 2, en el que la muestra biológica no fetal es una muestra de sangre, una muestra de plasma, una muestra de orina o una muestra de tejido de la placenta.

4. Uso según la reivindicación 2 ó 3, en el que el mamífero hembra embarazado tiene preeclampsia o corre un riesgo aumentado de desarrollar preeclampsia si la concentración en plasma de hemoglobina fetal está aproximadamente 20 veces o más aumentada en comparación con la concentración normal de hemoglobina fetal en el plasma.

5. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 2-4, en el que el mamífero hembra embarazado tiene preeclampsia o corre un riesgo aumentado de desarrollar preeclampsia si la concentración en plasma de hemoglobina fetal es de aproximadamente 0, 5 !g/ml o más, o si la concentración en orina de hemoglobina fetal es de aproximadamente 0, 06 !g/ml o más.

6. Uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en uno o más de los siguientes métodos: i) para diagnosticar o ayudar en el diagnóstico de preeclampsia, ii) para monitorizar la progresión o la regresión de preeclampsia, iii) para evaluar la eficacia de un tratamiento de preeclampsia.

7. Método para diagnosticar o ayudar en el diagnóstico de preeclampsia que comprende medir el nivel de hemoglobina fetal libre o medir el nivel de hemoglobina fetal libre y el nivel de hemoglobina libre total en una muestra biológica no fetal de un mamífero hembra embarazado, y que comprende además opcionalmente la etapa de

iii) comparar el nivel de hemoglobina fetal libre en la muestra con un valor de referencia o comparar la razón entre el nivel de hemoglobina fetal libre y el nivel de hemoglobina libre total en la muestra con un valor de referencia.

8. Método para monitorizar la progresión o regresión de preeclampsia que comprende las etapas de

i) medir el nivel de hemoglobina fetal libre o medir el nivel de hemoglobina fetal libre y el nivel de hemoglobina libre total, en una primera muestra biológica aislada de un mamífero hembra embarazado,

ii) medir el nivel de hemoglobina fetal libre o medir el nivel de hemoglobina fetal libre y el nivel de hemoglobina libre total, en una segunda muestra biológica aislada de dicho mamífero hembra embarazado en un momento posterior, y que comprende además opcionalmente la etapa de

iii) comparar los valores medidos en la etapa i) y ii) .

9. Método para evaluar la eficacia de un tratamiento de preeclampsia que comprende las etapas de

i) medir el nivel de hemoglobina fetal libre o medir el nivel de hemoglobina fetal libre y el nivel de hemoglobina libre total, en una primera muestra biológica obtenida de un mamífero hembra embarazado antes del tratamiento o en el momento t1,

ii) medir el nivel de hemoglobina fetal libre o medir el nivel de hemoglobina fetal libre y el nivel de hemoglobina libre total, en una segunda muestra biológica obtenida del mismo mamífero hembra embarazado en un momento posterior t2, y que comprende además opcionalmente las etapas de iii) comparar los valores medidos en la etapa i) y ii) .

10. Método según cualquiera de las reivindicaciones 7-9, en el que la muestra biológica es una muestra de sangre, una muestra de plasma, una muestra de orina o una muestra de tejido de la placenta.

11. Método según cualquiera de las reivindicaciones 7-10, en el que el nivel de hemoglobina fetal libre se mide midiendo el nivel de cadena gamma de hemoglobina (Hby) en la muestra.

12. Método según cualquiera de las reivindicaciones 7-11, en el que el mamífero es un ser humano.

13. Método según cualquiera de las reivindicaciones 7-12, que comprende además

i) medir el nivel de antígeno leucocitario humano DPA1 (HLA-DPA1) , en dicha muestra biológica, y que comprende además opcionalmente ii) comparar el nivel de HLA-DPA1 en la muestra con un valor de referencia.