Variantes de hemaglutinina y neuraminidasa de influenza.

Un virus influenza reagrupado, donde dicho virus comprende 6 segmentos genómicos internos de uno o más virus donantes diferentes de A/Ann Arbor/6/60 y un segmento genómico que codifica un polipéptido HA de la cepa viral A/VN/1203/04,

donde el polipéptido HA comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID No: 11.

Variantes de hemaglutinina y neuraminidasa de influenza

Antecedentes de la invención

Las vacunas contra cepas diversas y evoluciones de influenza son importantes desde un punto de vista de la salud de la comunidad, así como comercialmente, ya que cada año numerosos individuos se ven infectados con diferentes cepas y tipo del virus influenza. Los bebés, los ancianos, aquellos sin un cuidado sanitario adecuado y personas inmunocomprometidas están en riesgo especial de muerte por dichas infecciones. Lo que compone el problema de las infecciones por influenza es que se generan nuevas cepas de influenza fácilmente y pueden propagarse entre diversas especies, necesitando de este modo la producción continua de nuevas vacunas.

Se han producido numerosas vacunas capaces de producir una respuesta inmune protectora específica para dichos virus/cepas virales diferentes y de influenza durante más de 50 años e incluyen vacunas de virus completo, vacunas de virus dividido, vacunas de antígeno de superficie y vacunas de virus vivo atenuado. Sin embargo, aunque las formulaciones apropiadas de cualquiera de estos tipos de vacuna son capaces de producir una respuesta inmune sistémica, las vacunas de virus vivo atenuado tienen la ventaja de ser capaces también de estimular la actividad de la mucosa local en el tracto respiratorio. Se ha hecho un considerable trabajo en la producción de virus de influenza, y fragmentos de los mismos, para la producción de vacunas por los presentes inventores y colaboradores; véase, por ejemplo, el documento US 2004 029 251 y el documento US 2005 042 229.

A causa del surgimiento continuo (o resurgimiento) de cepas diferentes de influenza, continuamente se desean nuevas vacunas contra influenza. Dichas vacunas típicamente se crean usando restos antigénicos de las cepas virales recién surgidas, por tanto, son altamente deseables polipéptidos y polinucleótidos de nuevas cepas virales recién surgidas, o recién resurgidas (especialmente secuencias de genes antigénicos) .

Webby et al. 2004 describe la producción de un virus de referencia contra los virus 2004 H5N1 que circulan en Asia. El virus de referencia descrito en Webby et al. 2004 se basa en una estructura A/Puerto Rico/8/34 que comprende una secuencia HA derivada de A/Hong Kong/213/03 en la que los aminoácidos polibásicos que están asociados con alta virulencia se han eliminado.

Subbarao et al. 2003 describe un virus influenza reagrupado H5N1 basado en una estructura A/Puerto Rico/8/34 y una secuencia HA y NA de A/HK/491/97, donde el sitio de escisión multibásico en la secuencia HA se mutagenizó.

Hien et al. 2004 describe las características clínicas y hallazgos epidemiológicos preliminares en pacientes con casos confirmados de influenza aviar A/H5N1) en Vietnam en diciembre de 2003 y enero de 2004.

El registro epidemiológico semanal publicado por la Organización Mundial de la Salud en 2004 describe cinco casos humanos confirmados por laboratorio de influenza aviar A H5N1 todos de Hanói y obtenidas en el primer mes del año.

Wareing et al. 2001 compararon la inmunogenicidad de las cepas donantes adaptadas al frío ruso A/Leningrad/134/17/57 y A/Leningrad/134/47/57 y la cepa de Estados Unidos A/Ann Arbor/6/60-ca en ratones con sus respectivos virus parentales de tipo silvestre.

La presente descripción proporciona variantes de hemaglutinina y neuraminidasa de influenza nuevas y/o recién aisladas que son capaces de usarse en la producción de numerosos tipos de vacunas así como en investigación, diagnóstico, etc. Llegarán a ser evidentes otros numerosos beneficios tras la revisión de lo siguiente.

Sumario de la invención

La invención está abarcada por las reivindicaciones independientes. En este documento se describe un polipéptido aislado o recombinante que se selecciona entre: los polipéptidos codificados por una cualquiera de las secuencias de por ejemplo SEQ ID No: 1 o SEQ ID No: 2, uno cualquiera de los polipéptidos codificados por ejemplo SEQ ID No: 1 o SEQ ID No: 2 uno cualquiera de los polipéptidos de SEQ ID No: 11 o SEQ ID No: 12; solamente la fase de lectura abierta de los polipéptidos de SEQ ID No: 11 o SEQ ID No: 12; formas alternativas (por ejemplo, la forma madura sin el péptido señal, o sin las secuencias 5' y 3' fuera de la fase de lectura abierta, o las secuencias expresadas en la superficie de un virus (por ejemplo, influenza) ) del polipéptido de SEQ ID No: 11-12. Los polipéptidos descritos en este documento comprende opcionalmente proteínas de fusión, proteínas con una secuencia líder, un polipéptido precursor, proteínas con una señal de secreción o una señal de localización, o proteínas con una marca epitópica, una marca E, o una marca epitópica His. Las secuencias descritas en este documento también se muestran en el Apéndice 1 y en la lista de secuencias de este documento. Las secuencias de hemaglutinina descritas en este documento comprenden secuencias con sitios de escisión polibásicos modificados (que permiten de este modo el crecimiento de los virus en huevos) . Las secuencias del polipéptido hemaglutinina de SEQ ID No: 11-12 comprende las secuencias del péptido señal amino-terminal endógenas, sin embargo, las secuencias del polipéptido hemaglutinina descritas en este documento también incluyen la forma madura (péptido señal amino-terminal escindido) de los polipéptidos hemaglutinina. Los sitios de escisión de cualquier secuencia del polipéptido hemaglutinina de cualquier cepa de influenza puede medirse o predecirse rutinariamente usando cualquiera de varios métodos en la técnica.

En este documento también se describe una composición con uno o más polipéptidos enumerados anteriormente, o fragmentos de los mismos. Se describen adicionalmente polipéptidos que se unen específicamente por un antisuero policlonal creado contra al menos un antígeno que comprende al menos una secuencia de aminoácido descrita anteriormente, o un fragmento de la misma. Dichos anticuerpos específicos para los polipéptidos descritos anteriormente también se describen en este documento. Los polipéptidos descritos en este documento son opcionalmente inmunogénicos.

Se describen adicionalmente composiciones inmunogénicas que comprenden una cantidad inmunológicamente eficaz de uno o más de cualquiera de los polipéptidos descritos anteriormente así como métodos para estimular el sistema inmune de un individuo para producir una respuesta inmune protectora contra el virus influenza administrando al individuo una cantidad inmunológicamente eficaz de cualquiera de los polipéptidos anteriores en un vehículo fisiológicamente aceptable.

La invención incluye el virus influenza recombinante caracterizado por las reivindicaciones adjuntas que comprende uno o más de los polipéptidos o polinucleótidos anteriores, además de composiciones inmunogénicas que comprenden una cantidad inmunológicamente eficaz de dicho virus influenza recombinante. El virus influenza recombinante de la invención para su uso en métodos para estimular el sistema inmune de un individuo para producir una respuesta inmune protectora contra el virus influenza, a través de la administración de una cantidad inmunológicamente eficaz de dicho virus influenza recombinante en un vehículo fisiológicamente aceptable también son parte de la invención.

En este documento también se describe una composición de materia que tiene dos o más de los ácidos nucleicos descritos anteriormente (por ejemplo, una biblioteca que comprende al menos aproximadamente 2, 5, 10, 50 o más ácidos nucleicos) . Dichas composiciones pueden producirse opcionalmente por escisión de uno o más ácidos nucleicos descritos anteriormente (por ejemplo, mecánicamente, químicamente, enzimáticamente con una endonucleasa de restricción/ARNasa/ADNasa, etc.) . Otras composiciones incluyen, por ejemplo, composiciones producidas por la incubación de uno o más de los ácidos nucleicos descritos anteriormente en presencia de desoxirribonucleótidos trifosfato y una polimerasa termoestable de ácido nucleico.

En este documento también se describen células que comprenden al menos uno de los ácidos nucleicos descritos anteriormente, o un fragmento escindido o amplificado o producto de los mismos. Estas pueden expresar opcionalmente un polipéptido codificado por dicho ácido nucleico. Adicionalmente se describen vectores (por ejemplo, plásmidos, cósmidos, fagos, virus, fragmentos virales, etc.) que comprenden cualquiera de los ácidos nucleicos descritos anteriormente. Dichos vectores pueden comprender opcionalmente un vector de expresión. Los vectores de expresión preferidos incluyen, aunque sin limitación, vectores que comprenden el promotor pol I y secuencias de terminación... [Seguir leyendo]

1. Un virus influenza reagrupado, donde dicho virus comprende 6 segmentos genómicos internos de uno o más virus donantes diferentes de A/Ann Arbor/6/60 y un segmento genómico que codifica un polipéptido HA de la cepa viral A/VN/1203/04, donde el polipéptido HA comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID No: 11.

2. El virus influenza reagrupado de la reivindicación 1, que comprende un segmento genómico que codifica un polipéptido NA de la cepa viral A/VN/1203/04, donde el polipéptido NA comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID No: 12.

3. El virus influenza reagrupado de la reivindicación 1 ó 2, donde dicho uno o más virus donantes tienen una o más de las siguientes propiedades: sensibilidad a la temperatura, adaptación al frío, o están atenuados.

4. El virus influenza reagrupado de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde dicho uno o más virus donantes son PR8.

5. El virus influenza reagrupado de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde dicho uno o más virus donantes son A/Leningrad/134/17/57.

6. Una composición inmunogénica que comprende una cantidad inmunológicamente eficaz del virus influenza reagrupado de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.

7. El virus influenza reagrupado de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 para su uso en un método de tratamiento estimulando el sistema inmune de un sujeto para producir una respuesta inmune protectora contra el virus influenza, donde el virus influenza reagrupado tiene que administrarse al sujeto en una cantidad inmunológicamente eficaz y en un vehículo fisiológicamente eficaz.

8. El virus de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 para uso en un método profiláctico de tratamiento de una infección vírica en un sujeto, donde el virus tiene que administrarse al sujeto en una cantidad eficaz para producir una respuesta inmunogénica contra la infección vírica.

9. El virus para uso en un método de acuerdo con la reivindicación 8, donde dicho virus está muerto o inactivado.

10. Una vacuna de influenza atenuado vivo que comprende la composición de la reivindicación 6.

11. Un método para producir virus influenza en cultivos celulares, comprendiendo el método:

i) introducir en una población de células hospedadoras, siendo capaz dicha población de células hospedadoras de soportar la replicación de virus influenza, una pluralidad de vectores que comprenden secuencias de ácido nucleico correspondientes a:

(a) al menos 6 segmentos genómicos internos de una primera cepa de influenza, donde la primera cepa de influenza no es A/Ann Arbor/6/60; y, al menos un segmento genómico que codifica un antígeno de superficie inmunogénico de influenza de A/VN/1203/04, donde dicho antígeno de superficie comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID No: 11; o

(b) al menos 6 segmentos genómicos internos de una primera cepa de influenza, donde la primera cepa de influenza no es A/Ann Arbor/6/60 y donde dicha primera cepa de influenza tiene uno o más atributos fenotípicos seleccionados entre el grupo compuesto por: atenuada, adaptada al frío y sensible a la temperatura; y, al menos un segmento genómico que codifica un antígeno de superficie inmunogénico de influenza de A/VN/1203/04, donde dicho antígeno de superficie comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID No: 11,

ii) cultivar la población de células hospedadoras a una temperatura inferior a o igual a 35ºC en presencia de tripsina; y, iii) recuperar una pluralidad de virus influenza.

12. El método de la reivindicación 11, donde dicho antígeno de superficie comprende adicionalmente la secuencia de aminoácidos de SEQ ID No: 12.

13. Una vacuna de virus dividido o virus inactivado que comprende la composición inmunogénica de la reivindicación

6.

REFERENCIAS CITADAS EN LA DESCRIPCIÓN

La lista de referencias citadas por el solicitante es, únicamente, para conveniencia del lector. No forma parte del documento de patente europea. Si bien se ha tenido gran cuidado al compilar las referencias, no pueden excluirse errores u omisiones y la OEP declina toda responsabilidad a este respecto.

Literatura no patente citada en la descripción