VACUNAS QUIMERICAS DE FLAVIVIRUS.

Composición de vacuna que comprende un virus quimérico vivo, infeccioso,

atenuado, que comprende:

un virus de la fiebre amarilla en el que la secuencia nucleótida que codifica una proteína prM-E es suprimida, truncada, o mutada de forma que la proteína prM-E funcional del virus de la fiebre amarilla no se expresa, y es integrada en el genoma de dicho virus de la fiebre amarilla, una secuencia nucleótida que codifica una proteína prM-E de un segundo flavivirus distinto, de forma que dicha proteína prM-E de dicho segundo flavivirus se expresa, en el que la secuencia señal en la unión C/prM de dicho virus de la fiebre amarilla, se conserva

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E05012770.

Solicitante: ACAMBIS INC.
SAINT LOUIS UNIVERSITY
.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 38 SIDNEY STREET,CAMBRIDGE, MA 02139-4169.

Fecha de Publicación: .

Fecha Solicitud PCT: 2 de Marzo de 1998.

Fecha Concesión Europea: 26 de Mayo de 2010.

Clasificación Internacional de Patentes:

  • A61K39/12 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE.A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › A61K 39/00 Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53). › Antígenos virales.
  • C07K14/18F2
  • C12N7/00 QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › Virus, p. ej. bacteriófagos; Composiciones que los contienen; Su preparación o purificación (preparaciones de uso médico que contienen virus A61K 35/76; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos virales, p. ej. vacunas virales, A61K 39/00).
  • C12N7/04A

Clasificación PCT:

  • A61K39/12 A61K 39/00 […] › Antígenos virales.
  • A61K39/193 A61K 39/00 […] › Virus de encefalomielitis equina.
  • C12N7/01 C12N […] › C12N 7/00 Virus, p. ej. bacteriófagos; Composiciones que los contienen; Su preparación o purificación (preparaciones de uso médico que contienen virus A61K 35/76; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos virales, p. ej. vacunas virales, A61K 39/00). › Virus, p. ej. Bacteriófagos, modificados por la introducción de material genético externo (vectores C12N 15/00).

Clasificación antigua:

  • A61K39/12 A61K 39/00 […] › Antígenos virales.
  • A61K39/193 A61K 39/00 […] › Virus de encefalomielitis equina.
  • C12N7/01 C12N 7/00 […] › Virus, p. ej. Bacteriófagos, modificados por la introducción de material genético externo (vectores C12N 15/00).

Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Finlandia.


Fragmento de la descripción:

Vacunas quiméricas de flavivirus.

Antecedentes de la invención

La presente invención se refiere a composiciones de vacuna que comprenden virus infecciosos, atenuados, como son reivindicadas.

Varios miembros de la familia de los flavivirus representan amenazas habituales o potenciales para la salud pública global. Por ejemplo, la Encefalitis japonesa constituye un problema significativo de salud pública que afecta a millones de individuos que corren peligro en el Lejano Oriente. El virus del dengue, con una incidencia anual estimada de 100 millones de casos de fiebre primaria del dengue y más de 450.000 casos de fiebre hemorrágica del dengue en todo el mundo, ha surgido como la enfermedad humana más importante transmitida por artrópodos. Otros flavivirus continúan causando enfermedades endémicas de naturaleza variable y tienen el potencial de manifestarse en áreas nuevas como resultado de cambios en el clima, poblaciones vectoras y alteraciones del entorno provocadas por la actividad humana. Estos flavivirus incluyen, por ejemplo, el virus de la Encefalitis de San Luis, que causa una enfermedad esporádica pero aguda grave en el Medio Oeste, el Sudeste y Oeste de Estados Unidos; el virus del Oeste del Nilo, que causa una enfermedad febril, que se complica ocasionalmente por Encefalitis aguda, y se distribuye ampliamente a través de África, el Oriente Medio, la antigua Unión Soviética, y partes de Europa; el virus de la Encefalitis Murray Valley que causa una enfermedad endémica del sistema nervioso en Australia; y el virus de la Encefalitis transmitida por las garrapatas, que se distribuye a través de la antigua Unión Soviética y del Este de Europa, en la que su vector garrapata es habitual y responsable de una forma grave de Encefalitis en estas regiones.

El virus de la hepatitis C (HCV) es otro miembro de la familia flavivirus, con una organización genómica y estrategia de replicación que son similares, pero no idénticos, a las de los flavivirus mencionados anteriormente. El HCV se transmite principalmente mediante exposición parenteral, y se asocia con la hepatitis crónica que puede progresar a cirrosis y carcinoma hepatocelular, y es una causa principal de enfermedad hepática que requiere trasplante ortotópico en los Estados Unidos.

La familia Flaviviridae es diferente de los alfavirus (por ejemplo, WEE, VEE, EEE, SFV, etc.) y habitualmente contiene 3 géneros, los flavivirus, los pestivirus y los virus de la hepatitis C. Los viriones maduros completamente procesados de los flavivirus contienen tres proteínas estructurales, cubierta (E), cápside (C) y membrana (M), y siete proteínas no estructurales (NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B y NS5). Los flaviviriones inmaduros que se encuentran en las células infectadas contienen la preproteína de membrana (prM), que es la precursora de la proteína M.

Después de la unión de los virus a los receptores de la célula huésped, la proteína E experimenta un cambio conformacional irreversible tras exponerse al pH ácido de los endosomas, provocando la fusión entre las bicapas de la envuelta de los viriones y las vesículas endocíticas, liberando de este modo el genoma vírico en el citosol del huésped. Los virus de la Encefalitis que se transmite por las garrapatas (TBE) que contienen prM no son competentes para la fusión, indicando que el procesamiento proteolítico de prM es necesario para generar viriones competentes para la fusión y enteramente infecciosos (Guirakhoo et al., J. Gen. Virol. 72 (Pt.2): 333-338, 1991). Utilizando cloruro amónico al final del ciclo de replicación del virus, se produjeron virus de la Encefalitis (MVE) de Murray Valley que contenían prM, mostrándose ser incompetentes para la fusión. Utilizando péptidos secuencia-específicos y anticuerpos monoclonales, se demostró que prM interacciona con los aminoácidos 200-327 de la proteína E. Esta interacción es necesaria para proteger la proteína E de los cambios conformacionales irreversibles causados por la maduración en las vesículas ácidas de la vía exocítica (Guirakhoo et al., Virology 191:921-931, 1992).

La división de prM a la proteína M tiene lugar poco antes de la liberación de los viriones mediante una proteasa celular del tipo furina (Stadler et al., J. Virol. 71:8475-8481, 1997), que es necesaria para activar la actividad hemaglutinante, la fusogénica y la infectividad de los viriones. La proteína M se divide a partir de su proteína precursora (prM) después de la secuencia de consenso R-X-R/K-R (X es variable), y se incorpora en la envuelta lipídica del virus, junto con la proteína E.

Las secuencias de división se han conservado no sólo en los flavivirus, sino también en las proteínas de otros virus no relacionados, tal como PE2 de los coronavirus murinos, PE2 de los alfavirus, HA de los virus de la influenza, y p160 de los retrovirus. La división de la proteína precursora es esencial para la infectividad del virus, pero no para la formación de las partículas. Se mostró que, en el caso de una quimera del dengue 4-TBE, un cambio en el sitio de división de prM dio lugar a una disminución en la neurovirulencia de esta quimera (Pletnev et al., J. Virol. 67:4956-4963, 1993), que está de acuerdo con la observación previa de que el procesamiento eficiente de prM es necesario para la infectividad total (Guirakhoo et al., 1991, supra, 1992, supra; Heinz et al., Virology 198:109-117, 1994). Los anticuerpos para la proteína prM pueden mediar inmunidad protectora, debido aparentemente a la neutralización de viriones liberados que contienen algunas prM no divididas. El sitio de división proteolítica de la PE2 de VEE (4 aminoácidos) se suprimió mediante mutagénesis dirigida del clon infeccioso (Smith et al., ASTMH meeting, 7 al 11 de diciembre, 1997). Los mutantes de deleción replicaron con una gran eficiencia y las proteínas PE2 se incorporaron a las partículas. Este mutante se evaluó en primates no humanos y se mostró que provocó una seroconversión del 100% y que protegió a todos los monos inmunizados de una estimulación letal.

En el documento WO 93/06214 se han descrito los flavivirus de crecimiento restringido y/o quiméricos para su utilización en una preparación de vacuna.

Sumario de la invención

La invención se refiere a composiciones de vacuna que comprenden virus quiméricos, vivos, infecciosos y atenuados, estando compuesto cada uno de ellos por:

(a) un primer virus de la fiebre amarilla (por ejemplo, la cepa 17D), que representa un virus vacunal vivo, atenuado, en el que la secuencia nucleótida para una proteína prM-E es suprimido, truncado o mutado, de forma que la proteína funcional prM-E del primer flavivirus no se expresa, y

(b) una secuencia nucleótida integrada en el genoma del primer flavivirus, que codifica la envoltura vírica (proteínas prM-E) de un segundo y distinto flavivirus, de forma que la proteína prM-E del segundo flavivirus se expresa a partir del genoma alterado del primer flavivirus, en el que la secuencia señal en la unión C/prM del virus de la fiebre amarilla se mantiene.

El virus quimérico está pues compuesto por los genes y los productos génicos responsables de la replicación intracelular que pertenecen al primer flavivirus, y los genes y productos génicos de la envuelta del segundo flavivirus. Ya que la envuelta vírica contiene todos los determinantes antigénicos responsables de la inducción de anticuerpos neutralizantes, el resultado de la infección con el virus quimérico es que dichos anticuerpos se generan sólo contra el segundo flavivirus.

El virus para utilizar como primer flavivirus en los virus quiméricos utilizados en la composición de vacuna de la invención, es el virus de la fiebre amarilla. Por lo menos, una vacuna ya ha empleado este virus vivo y atenuado; la vacuna se conoce como YF17D y se ha utilizado para inmunización humana durante 50 años. La vacuna YF17D se describe en varias publicaciones, incluyendo las publicaciones de Smithburn et al., (Yellow Fever Vaccination'', World Health Org., p.238, 1956) y Freestone (en Plotkin et al., (Eds), Vaccines, 2ª edición, W.B. Saunders, Philadelphia, 1995). Además, el virus de la fiebre amarilla se ha estudiado a nivel genético (Rice et al., Science 229:726-733, 1985), y se ha establecido información que correlaciona el genotipo y el fenotipo (Marchevsky et al., Am. J. Trop. Med. Hyg. 52:75-80, 1995).

Los flavivirus preferidos para utilizar como segundo flavivirus en los virus quiméricos utilizados en la composición...

 


Reivindicaciones:

1. Composición de vacuna que comprende un virus quimérico vivo, infeccioso, atenuado, que comprende:

un virus de la fiebre amarilla en el que la secuencia nucleótida que codifica una proteína prM-E es suprimida, truncada, o mutada de forma que la proteína prM-E funcional del virus de la fiebre amarilla no se expresa, y es integrada en el genoma de dicho virus de la fiebre amarilla, una secuencia nucleótida que codifica una proteína prM-E de un segundo flavivirus distinto, de forma que dicha proteína prM-E de dicho segundo flavivirus se expresa, en el que la secuencia señal en la unión C/prM de dicho virus de la fiebre amarilla, se conserva.

2. Composición de vacuna según la reivindicación 1, en la que la secuencia nucleótida que codifica la proteína prM-E de dicho segundo y distinto flavivirus sustituye la secuencia nucleótida que codifica la proteína prM-E de dicho virus de la fiebre amarilla.

3. Composición de vacuna según la reivindicación 1 ó 2, en la que dicho virus de fiebre amarilla es la cepa YF 17D.

4. Composición de vacuna según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que dicho segundo flavivirus es un virus de la Encefalitis japonesa (JE).

5. Composición de vacuna según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que dicho segundo flavivirus es un virus Dengue.

6. Composición de vacuna según la reivindicación 5, en la que el virus Dengue se selecciona de entre el grupo constituido por los tipos de Dengue 1 a 4.

7. Composición de vacuna según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que dicho segundo flavivirus es seleccionado de entre el grupo formado por un virus de la Encefalitis Murray Valley, un virus de la Encefalitis de San Luis, un virus del Oeste del Nilo, un virus de la Encefalitis transmitida por garrapatas, un virus de la hepatitis C, un virus de Kunjin, un virus de la Encefalitis europea central, un virus de la Encefalitis rusa de primavera-verano, un virus de Powassan, un virus de la Enfermedad de Kyasanur Forest, y un virus de la Fiebre hemorrágica de Omsk.

8. Composición de vacuna según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la que dicha secuencia nucleótida que codifica dicha proteína prM-E de dicho segundo y distinto flavivirus, comprende una mutación que evita la división de prM para producir la proteína M.

9. Composición de vacuna según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en la que las secuencias señal en las uniones C/prM y E/NS 1 de dicho virus de la fiebre amarilla se conservan en la construcción de dicho flavivirus quimérico.

10. Composición de vacuna según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, que está formulada como una solución acuosa estéril que contiene entre 100 y 1.000.000 unidades infecciosas del virus quimérico en un volumen de dosis de 0,1 a 1,0 ml.

11. Composición de vacuna según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 que está formulada para la administración por la ruta mucosal, intradérmica, subcutánea o intramuscular.

12. Composición de vacuna según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 que está formulada para la administración oral.

13. Composición de vacuna según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 que comprende además un adyuvante.


 

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