Un péptido aislado de menos de 15 aminoácidos que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 8

Campo técnico

La presente invención se refiere al campo de las ciencias biológicas, más específicamente al campo de terapia contra el cáncer. En particular, se desvelan nuevos péptidos que son extremadamente eficaces como vacunas contra el cáncer, y fármacos para tratar y prevenir tumores que contienen estos péptidos.

Técnica anterior

El cáncer de pulmón es uno de los tumores humanos más comunes y fatales. Se han referido muchas alteraciones genéticas asociadas con el desarrollo y progresión del cáncer de pulmón. Los cambios genéticos pueden ayudar en los esfuerzos de pronóstico y las predicciones de riesgo de metástasis o respuesta a ciertos tratamientos. (Mitsudomi T y col., (2000) Clin Cancer Res 6: 4055-63; Niklinski y col., (2001) Lung Cancer. 34 Suppl 2: S53-8; Watine J. (2000) Bmj 320: 379-80). El cáncer de pulmón de células no pequeñas (CPCNP) es con diferencia la forma más común de cáncer de pulmón, que supone casi el 80% de los tumores de pulmón (Society, A.C. Cancer Facts and Figures 2001, 2001). La tasa global de supervivencia a 10 años sigue siendo de solo el 10%, a pesar de los recientes avances en terapias de múltiples modalidades, porque la mayoría de los CPCNP no se diagnostican hasta fases avanzadas (Fry, W.A. y col., (1999) Cancer. 86: 1867-76). Aunque los regímenes de quimioterapia basados en platino se consideran estándares de referencia para el tratamiento de CPCNP, estos fármacos son capaces de prolongar la supervivencia de pacientes con CPCNP avanzado solo seis semanas aproximadamente (Non-small Cell Lung Cancer Collaborative Group, (1995) BMJ. 311: 899-909). Se están investigando numerosas terapias diana para esta enfermedad, entre ellas inhibidores de la tirosina-cinasa; sin embargo, hasta la fecha se han obtenido resultados prometedores solo en un número limitado de pacientes y algunos receptores sufren reacciones adversas graves (Kris MG y col., (2002) Proc Am Soc Clin Oncol. 21: 292a(A1166)).

Se ha demostrado que los linfocitos T citotóxicos (LTC) CD8+ reconocen péptidos de epítopos derivados de antígenos asociados a tumores (AAT) presentes en moléculas MHC de clase I, y lisan las células tumorales. Desde el descubrimiento de la familia MAGE como primer ejemplo de AAT, se han descubierto otros muchos AAT usando enfoques inmunológicos (Boon T. (1993) Int J Cancer 54: 177-80; Boon T. y col., (1996) J Exp Med 183: 725-9; van der Bruggen P y col., (1991) Science 254: 1643-47; Brichard V y col., (1993) J Exp Med 178: 489-95; Kawakami Y y col., (1994) J Exp Med 180: 347-52). Algunos de ellos se encuentran ahora en desarrollo clínico como dianas de inmunoterapia. Entre los AAT descubiertos hasta ahora se incluyen MAGE (van der Bruggen P y col., (1991) Science

254: 1643-7), gp100 (Kawakami Y y col., (1994) J Exp Med 180: 347-52), SART (Shichijo S y col., (1998) J Exp Med 187:277-88), y NY-ESO-1 (Chen YT y col., (1997) Proc. Natl. Acd. Sci. USA, 94: 1914-8). Por otra parte, algunos productos génicos mostraron estar sobreexpresados en cierta medida en las células tumorales que han demostrado ser reconocidas como dianas que inducen respuestas inmunitarias celulares. Entre estos productos génicos se incluyen p53 (Umano Y y col., (2001) Br J Cancer, 84:1052-7), HER2/neu (Tanaka H y col., (2001) Br Cancer, 84: 94-9), CEA (Nukaya I y col., (1999) Int. J. Cancer 80, 92-7) y similares.

A pesar del importante avance en la investigación básica y clínica relativa a los AAT (Rosenberg SA y col., (1998) Nature Med, 4: 321-7; Mukherji B. y col., (1995) Proc Natl Acad Sci USA, 92: 8078-82: Hu X y col., (1996) Cancer Res, 56: 2479-83), se dispone solo de un número muy limitado de ATT candidatos adecuados para el tratamiento de adenocarcinomas, como cáncer de pulmón. Los AAT que se expresan abundantemente en células cancerosas, y cuya expresión está limitada a células cancerosas, serían candidatos prometedores como dianas inmunoterapéuticas.

Se ha mostrado repetidamente en ensayos con liberación de 51Cr que las células mononucleares de sangre periférica (CMSP) estimuladas por péptidos de ciertos donantes sanos producen niveles importantes de IFN- en respuesta al péptido, pero raramente ejercen citotoxicidad frente a células tumorales de una manera restringida por HLA-A24 o A0201 (Kawano K y col., (2000) Cancer Res 60: 3550-8; Nishizaka y col., (2000) Cancer Res 60: 4830-7; Tamura y col., (2001) Jpn J Cancer Res 92: 762-7). Sin embargo, HLA-A24 y HLA-A0201 son alelos HLA comunes en las poblaciones japonesa y caucásica (Date Y y col., (1996) Tissue Antigens 47: 93-101; Kondo A y col., (1995) J Immunol 155: 4307-12; Kubo RT y col., (1994) J Immunol 152: 3913-24; Imanishi y col., Proceeding of the eleventh International Histocompatibility Workshop and Conference Oxford University Press, Oxford, 1065 (1992); Williams F y col., (1997) Tissue Antigen 49: 129). Así, los péptidos antigénicos de cánceres presentados por estos alelos HLA pueden ser especialmente útiles para el tratamiento de cánceres entre pacientes japoneses y caucásicos. Además, se sabe que la inducción de LTC de baja afinidad in vitro procede habitualmente del uso de péptido a una concentración elevada, lo que genera un alto nivel de complejos péptido/MHC específicos de células presentadoras de antígeno (CPA), que activarán eficazmente estos LTC (Alexander-Miller y col., (1996) Proc Natl Acad Sci USA 93: 4102-7).

Desarrollos recientes en tecnologías de micromatriz de ADNc han permitido las construcciones de perfiles extensos de expresión génica de células malignas en comparación con células normales (Okabe, H. y col., (2001) Cancer Res., 61, 2129-37; Lin YM y col., (2002) Oncogene, 21; 4120-8; Hasegawa S. y col., (2002) Cancer Res 62:7012-7). Este enfoque permite una comprensión de la naturaleza compleja de las células cancerosas y de los mecanismos de la carcinogenia y facilita la identificación de genes cuya expresión está desregulada en tumores (Bienz M. y col., (2000) Cell 103, 311-320). Entre los transcritos identificados como regulados por incremento comúnmente en cánceres de pulmón, TTK (proteincinasa TTK; Acceso GenBank nº NM_003318; SEQ ID NO: 1, 2) es de especial interés, al estar regulado por incremento específicamente en células tumorales de los tejidos de cáncer de pulmón en más del 80% de los casos analizados. En cambio, el análisis de transferencia Northern mostró que estos productos génicos no se encuentran en órganos vitales normales (véase el documento WO-2004/031.413, cuyo contenido completo se incorpora como referencia en la presente memoria descriptiva). Así, los péptidos inmunógenos obtenidos de TTK pueden encontrar utilidad en células tumorales citolíticas que expresan estos antígenos. La presente descripción aborda estas y otras necesidades.

Resumen de la invención

Un gen, TTK (proteincinasa TTK) se ha identificado como regulado por incremento en cáncer de pulmón. Los genes se identificaron usando perfiles de expresión génica con una micromatriz de ADNc del genoma completo que contenía 23.040 genes. Según se expone anteriormente, la expresión de TTK está regulada específicamente por incremento en células tumorales en más del 80% de los pacientes con cáncer de pulmón todavía ausente en otros órganos vitales normales.

La presente invención se basa, al menos en parte, en la identificación de péptidos de epítopos de los productos génicos del gen (TTK) que provocan linfocitos T citotóxicos (LTC) específicos de las moléculas correspondientes. Según se expone en detalle más adelante, se estimularon Células Mononucleares de Sangre Periférica (CMSP) de donante sano usando péptidos candidatos de unión a HLA-A*2402 obtenidos de TTK. A continuación se establecieron clones LTC con citotoxicidad específica frente a las células diana positivas de HLA-A24 pulsadas con cada uno de los péptidos candidatos. El análisis ulterior de los clones LTC mostró la potente actividad citotóxica no solo frente a las células diana pulsadas con péptidos, sino también a células tumorales que expresan endógenamente TTK. Además, un ensayo de inhibición de diana fría y un ensayo de bloqueo de anticuerpos revelaron que los clones de células LTC reconocieron específicamente el complejo peptídico MHC de clase I. Estos resultados demuestran que estos péptidos son péptidos de epítopos con restricción de HLA-A24 que pueden inducir respuestas inmunitarias potentes y específicas frente a células de cáncer de pulmón que expresan TTK.

En consecuencia, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un polipéptido TTK para... [Seguir leyendo]

1. Un péptido aislado de menos de 15 aminoácidos que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 8.

2. Un péptido de menos de 15 aminoácidos que tiene inducibilidad de linfocitos T citotóxicos que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 8, en la que 1 o 2 aminoácidos están sustituidos, borrados

o añadidos, mientras se mantiene la inducibilidad de linfocitos T citotóxicos.

3. El péptido según la reivindicación 2, en el que el segundo aminoácido del extremo N es fenilalanina, tirosina, metionina o triptófano.

4. El péptido según la reivindicación 2, en el que el aminoácido del extremo C es fenilalanina, leucina, isoleucina, triptófano o metionina.

5. Una composición farmacéutica que comprende uno o más péptidos de la reivindicación 1 o 2.

6. Un exosoma que presenta en su superficie un complejo que comprende un péptido según la reivindicación 1 o 2 y un antígeno HLA.

7. El exosoma según la reivindicación 6, en el que el antígeno HLA es HLA-A24.

8. El exosoma según la reivindicación 7, en el que el antígeno HLA es HLA-A2402.

9. Un método in vitro para inducir células presentadoras de antígeno que tienen una alta inducibilidad de linfocitos T citotóxicos que comprende la etapa de puesta en contacto de una célula presentadora de antígeno con un péptido según la reivindicación 1 o 2.

10. Un método in vitro para inducir linfocitos T citotóxicos mediante la puesta en contacto de un linfocito T con un péptido según la reivindicación 1 o 2.

11. El método de inducción de células presentadoras de antígeno que tienen una alta inducibilidad de linfocitos T citotóxicos según la reivindicación 9, en el que dicho método comprende la etapa de transferencia de un gen que comprende un polinucleótido que codifica un péptido consistente en el péptido según la reivindicación 1 o 2 a una célula presentadora de antígeno.

12. Una célula presentadora de antígeno, que comprende un complejo formado entre un antígeno HLA y un péptido según la reivindicación 1 o 2.

13. Una vacuna para inhibir la proliferación de células de cáncer de pulmón, en el que la vacuna comprende un péptido según la reivindicación 1 o 2 como ingrediente activo.

14. La vacuna según la reivindicación 13 para la administración a un sujeto cuyo antígeno HLA es HLAA24.

15. Uso del péptido según la reivindicación 1 o 2, o de un polinucleótido que codifica dicho péptido para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento o prevención de cáncer de pulmón.

16. Una composición farmacéutica que comprende un péptido según la reivindicación 1 o 2, o un polinucleótido que codifica dicho péptido para su uso en el tratamiento o prevención de cáncer de pulmón.

17. El uso según la reivindicación 15 o la composición farmacéutica según la reivindicación 16, en el que la composición farmacéutica es una vacuna.