Vacunas de péptidos para cánceres que expresan los polipéptidos MPHOSPH1 ó DEPDC1.

Péptido seleccionado de entre (a) o (b) a continuación

: (a) péptido que presenta inducibilidad de células T citotóxicas,

en el que dicho péptido se deriva de la secuencia de aminoácidos SEC ID nº 2, en la que dicho péptido presenta menos de aproximadamente 15 aminoácidos y se selecciona de entre el grupo que consiste de péptidos que comprenden la secuencia de aminoácidos SEC ID nº 7 ó 8, o

(b) el péptido de (a) en el que se han sustituido, delecionado o añadido 1 ó 2 aminoácidos de la secuencia SEC ID nº 7 ó 8.

Vacunas de péptidos para cánceres que expresan los polipéptidos MPHOSPH1 ó DEPDC1.

Campo técnico

La presente exposición se refiere al campo de las ciencias biológicas, más concretamente al campo de la terapia del cáncer. En particular, la presente exposición se refiere a nuevos péptidos que sirven como vacunas para el cáncer extremadamente efectivas, y a fármacos para tratar y prevenir tumores que contienen dichos péptidos.

Antecedentes de la técnica Se ha demostrado que los linfocitos T citotóxicos (LTC) CD8+ reconocen los péptidos derivados de antígenos asociados a tumor (AAT) presentados sobre las moléculas del CMH de clase I y lisan las células tumorales. Desde el descubrimiento de la familia MAGE como primer ejemplo de AAT, se han descubierto muchos otros AAT mediante enfoques inmunológicos (Boon T., Int. J. Cancer 54: 177-80, 1993; Boon T. et al., J. Exp. Med. 183: 725-9, 1996; van der Bruggen P. et al., Science 254: 1643-7, 1991; Brichard V. et al., J. Exp. Med. 178: 489-95, 1993; Kawakami Y. et al., J. Exp. Med. 180: 347-52, 1994) . Algunos de ellos ahora se encuentran en desarrollo clínico como dianas inmunoterapéuticas. Entre los AAT descubiertos hasta el momento se incluyen MAGE (van der Bruggen P. et al., Science 254:1643-7, 1991) , gp100 (Kawakami Y. et al., J. Exp. Med. 180: 347-52, 1994) , SART (Shichijo S. et al., J. Exp. Med. 187:277-88, 1998) y NY-ESO-1 (Chen Y.T. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:1914-8, 1997) . Por otra parte, determinados productos génicos que se ha demostrado que se sobreexpresan bastante específicamente en las células tumorales se ha probado que resultan reconocidos como dianas para la inducción de respuestas inmunológicas celulares. Entre dichos productos génicos se incluyen p53 (Umano Y. et al., Br. J. Cancer 84:1052-7, 2001) , HER2/neu (Tanaka H. et al., Br. J. Cancer 84:94-9, 2001) , CEA (Nukaya I. et al., Int. J. Cancer 80:92-7, 1999) y similares.

A pesar de los significativos avances en la investigación básica y clínica relativa a los AAT (Rosenberg S.A. et al., Nature Med. 4: 321-7, 1998; Mukherji B. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92: 8078-82, 1995; Hu X. et al., Cancer Res. 56: 2479-83, 1996) , actualmente sólo se dispone de un número muy limitado de AAT candidatos para el tratamiento del cáncer. Los AAT que se expresan abundantemente en las células de cáncer y cuya expresión se restringe a las células de cáncer serían candidatos prometedores a dianas inmunoterapéuticas.

Tanto HLA-A24 como HLA-A0201 son alelos HLA comunes en las poblaciones japonesa y caucásica (Date Y. et al., Tissue Antigens 47:93-101, 1996; Kondo A. et al., J. Immunol. 155:4307-12, 1995; Kubo R.T. et al., J. Immunol. 152:3913-24, 1994; Imanishi et al., Proceeding of the eleventh International Histocompatibility Workshop and Conference, Oxford University Press, Oxford, 1065, 1992; Williams F. et al., Tissue Antigen 49:129-33, 1997) . De esta manera, los péptidos antigénicos de los cánceres presentados por dichos alelos HLA podrían resultar particularmente útiles en el tratamiento del cáncer en pacientes japoneses y caucásicos. Además, es conocido que la inducción de LTC de baja afinidad in vitro habitualmente resulta de la exposición a concentraciones elevadas de péptido, generando un nivel elevado de complejos específicos de péptido/CMH sobre células presentadoras de antígeno (CPA) , las cuales pueden activar eficazmente estos LCT (Alexander-Miller et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA

93: 4102-7, 1996) .

Los recientes avances en las tecnologías de micromatrices de ADNc han permitido construir perfiles completos de expresión génica de células malignas en comparación con las células normales (Okabe H. et al., Cancer Res. 61:2129-37, 2001; Lin Y.M. et al., Oncogene 21:4120-8, 2002; Hasegawa S. et al., Cancer Res. 62:7012-7, 2002) . Este enfoque ha permitido comprender la compleja naturaleza de las células de cáncer y los mecanismos de carcinogénesis y ha facilitado la identificación de genes cuya expresión se encuentra desregulada en los tumores (Bienz M. et al., Cell 103:311-20, 2000) . Entre los transcritos identificados como regulados positivamente en el cáncer, recientemente se han descubierto MPHOSPH1 (fosfoproteína 1 de etapa M, nº de acceso de GenBank NM_016195, SEC ID nº 1 y nº 2) y DEPDC1 (dominio DEP que contiene 1; nº de acceso de GenBank BM683578) . Ver los documentos WO nº 2004/031413, nº 2006/085684 y nº 2007/013.665, el contenido completo de los cuales se incorpora como referencia en la presente memoria. DEPDC1 ha sido descrito en el contexto de dos variantes transcripcionales diferentes: DEPDC1 V1 (SEC ID nº 3, nº 4) y DEPDC1 V2 (SEC ID nº 5, nº 6) . Se ha demostrado que estos genes se encuentran específicamente regulados positivamente en las células tumorales de los diversos tejidos de cáncer de los casos analizados (ver posteriormente) ; sin embargo, los análisis de transferencia northern demuestran que estos productos génicos no se encuentran en los órganos vitales normales (ver la solicitud de patente PCT nº JP2006/302684) . En la medida en que los péptidos inmunogénicos derivados de MPHOSPH1 y DEPDC1 puedan encontrar utilidad en la eliminación de células tumorales que expresan dichos antígenos, estos genes resultan de interés particular para los presentes inventores.

Debido a que los fármacos citotóxicos, tales como M-VAC, con frecuencia provocan reacciones adversas severas, resulta evidente que la selección cuidadosa de nuevas moléculas diana basándose en mecanismo de acción bien caracterizados resulta importante en el desarrollo de fármacos anticáncer efectivos con un riesgo minimizado de efectos secundarios negativos. Con este objetivo, los inventores previamente llevaron a cabo un análisis del perfil de expresión de diversos cánceres y tejido humano normal, y descubrieron múltiples genes que se sobreexpresan específicamente en el cáncer (Lin Y.M. et al., Oncogene 21:4120-8, 13 de junio de 2002; Kitahara O. et al., Cancer Res. 61:3544-9, 1 de mayo de 2001; Suzuki C. et al., Cancer Res. 63:7038-41, 1 de nov. de 2003; Ashida S. et al., Cancer Res. 64:5963-72, 1 de sept. de 2004; Ochi K. et al., Int. J. Oncol. 2004 Mar;24 (3) :647-55.; Kaneta Y, et al., Int J Oncol. 23:681-91, sept. de 2003; Obama K., Hepatology 41:1339-48, junio de 2005; Kato T. et al., Cancer Res. 65:5638-46, 1 de julio de 2005; Kitahara O. et al., Neoplasia 4:293-303, jul-ag. de 2002; Saito-Hisaminato A. et al., DNA Res. 9: 35-45, 2002) . De ellos, MPHOSPH1 (nº interno C2093) y DEPDC1 (nº interno B5860N) fueron identificados como genes sobreexpresados en diversos cánceres. En particular, se identificó MPHOSPH1 como sobreexpresado en cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer cervical, carcinoma colangiocelular, CML, cáncer colorrectal, cáncer gástrico, NSCLC, linfoma, osteosarcoma, cáncer de próstata, carcinoma renal y tumor de tejido blando. De manera similar, se identificó DEPDC1 como sobreexpresado en cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer cervical, carcinoma colangiocelular, CML, NSCLC, linfoma, osteosarcoma, cáncer de próstata, SCL y tumor de tejido blando.

MPHOSPH1 fue identificado anteriormente como una de las proteínas fosforilada específicamente en la transición G2/M y caracterizado como una proteína relacionada con quinesina dirigida al extremo (+) (Abaza A. et al., J. Biol. Chem. 278: 27844-52, 2003) . Más particularmente, se ha documentado previamente que MPHOSPH1 es un motor molecular dirigido al extremo (+) que desempeña una función crucial en la citoquinesis y se acumula en la zona intermedia del huso entre la anafase y la telofase en las células HeLa (Abaza A. et al., J. Biol. Chem. 278: 27844-52, 2003; Kamimoto T. et al., J. Biol. Chem. 276: 37520-8, 2001) . El ADNc de MPHOSPH1 codifica una proteína de 1.780 aminoácidos que está compuesta de tres dominios: un dominio motor NH2-quinasina, un dominio central de hélice superenrollada-tallo y un dominio de cola C-globular. Conjuntamente, estos datos sugieren que MPHOSPH1 es una proteína relacionada con quinesina de tipo NH2.

Respecto a DEPDC1, sigue sin conocerse exactamente cuál es su función. El dominio DEP contenido en esta proteína también se encuentran en Dishevelled, Egl-10 y Pleckstrin. El dominio DEP en dishevelled de Drosophila desempeña un papel esencial en el rescate de defectos de polaridad plana e induce la señalización de JNK; sin embargo, todavía no se ha aclarado cuál es su función en el ser humano. Sin embargo, tal como se da a conocer en la solicitud de patente PCT nº JP2006/302684, los ARNip de DEPDC1 pueden suprimir el crecimiento de las células de cáncer. Estos resultados demuestran que DEPDC1 desempeña un papel importante en el crecimiento de la mayoría de las células de cáncer.

Descripción... [Seguir leyendo]

1. Péptido seleccionado de entre (a) o (b) a continuación :

(a) péptido que presenta inducibilidad de células T citotóxicas, en el que dicho péptido se deriva de la secuencia de aminoácidos

SEC ID nº 2, en la que dicho péptido presenta menos de aproximadamente 15 aminoácidos y se selecciona de entre el grupo que consiste de péptidos que comprenden la secuencia de aminoácidos SEC ID nº 7 ó 8, o

(b) el péptido de (a) en el que se han sustituido, delecionado o añadido 1 ó 2 aminoácidos de la secuencia SEC ID nº 7 ó 8.

2. Péptido según la reivindicación 1 (b) , en el que el péptido que comprende la secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste de SEC ID nº 7 y 8 presenta por lo menos una sustitución en la secuencia SEC ID nº 7 ó 8 seleccionada de entre el grupo que consiste de:

(a) el segundo aminoácido desde el extremo N-terminal es fenilalanina, tirosina, metionina o triptófano, y

(b) el aminoácido C-terminal es fenilalanina, leucina, isoleucina, triptófano o metionina.

3. Péptido según la reivindicación 1 seleccionado de entre (a) o (b) a continuación:

(a) un péptido que consiste de la secuencia de aminoácidos SEC ID nº 7 ó 8, o

(b) un péptido que consiste de la secuencia de aminoácidos SEC ID nº 7 ó 8 en la que se han sustituido, delecionado o añadido 1 ó 2 aminoácidos.

4. Péptido según la reivindicación 3 (b) , en el que el péptido que consiste de la secuencia de aminoácidos seleccionada de entre el grupo que consiste de SEC ID nº 7 y 8 presenta por lo menos una sustitución seleccionada de entre el grupo que consiste de:

(a) el segundo aminoácido desde el extremo N-terminal es fenilalanina, tirosina, metionina o triptófano, y

(b) el aminoácido C-terminal es fenilalanina, leucina, isoleucina, triptófano o metionina.

5. Vector que comprende ADN codificante del péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

6. Composición farmacéutica para la utilización en el tratamiento o prevención de una enfermedad asociada a la sobreexpresión de los genes de SEC ID nº 1, comprendiendo dicha composición uno o más péptidos según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

7. Composición farmacéutica según la reivindicación 6, para la utilización en el tratamiento o prevención del cáncer.

8. Vacuna para la utilización en la inhibición de la proliferación de células que expresan genes de SEC ID nº 1, que comprenden un péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 a modo de ingrediente activo.

9. Vacuna según la reivindicación 8, formulada para la administración en un sujeto cuyo antígeno HLA es HLA-A24.

10. Vacuna según la reivindicación 8 ó 9, en la que las células son células de cáncer.

11. Péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para la utilización en el tratamiento o prevención del cáncer en un sujeto.

12. Utilización del péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en la preparación de una vacuna destinada al tratamiento o prevención del cáncer en un sujeto.

13. Composición farmacéutica según la reivindicación 7, vacuna según la reivindicación 10, péptido para la utilización según la reivindicación 11 ó utilización según la reivindicación 12, en la que el cáncer se selecciona de entre el grupo que consiste de cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer cervical, carcinoma colangiocelular, LMC, cáncer colorrectal, cáncer gástrico, CPCNP, linfoma, osteosarcoma, cáncer de próstata, carcinoma renal, CPCP y tumor de tejido blando.

14. Péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para la utilización en la inducción de células

presentadoras de antígenos que presentan una elevada inducibilidad de células T citotóxicas mediante el contacto de una célula presentadora de antígenos con dicho péptido.

15. Péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para la utilización en la inducción de células T citotóxicas mediante la puesta en contacto de una célula T con dicho péptido.

16. Polinucleótido codificante del péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para la utilización en la inducción de células presentadoras de antígenos que presentan una elevada inducibilidad de células T citotóxicas, mediante la transferencia del gen que comprende un polinucleótido codificante de dicho péptido a una célula presentadora de antígenos.

17. Método in vitro de inducción de células presentadoras de antígeno que presentan una elevada inducibilidad de las células T citotóxicas, que comprende la etapa de poner en contacto una célula presentadora de antígenos con el péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

18. Método in vitro de inducción de células presentadoras de antígenos que presentan una elevada inducibilidad de las células T citotóxicas, comprendiendo dicho método la etapa de transferir un polinucleótido codificante del péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 a una célula presentadora de antígenos.

19. Célula T citotóxica inducida mediante la puesta en contacto de una célula T con un péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 ó mediante la transducción con los ácidos nucleicos codificantes de polipéptidos de subunidades de receptores de células T de unión a dicho péptido.

20. Célula presentadora de antígenos, que comprende un complejo de un antígeno HLA y un péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

21. Célula presentadora de antígenos según la reivindicación 20, el péptido producido según la reivindicación 14 ó el polinucleótido según la reivindicación 16.

22. Exosoma que presenta sobre su superficie un complejo que comprende un péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y un antígeno HLA.

23. Exosoma según la reivindicación 22 ó la célula presentadora de antígenos según la reivindicación 20 ó 21, en el que el antígeno HLA es HLA-A24.

24. Exosoma o célula presentadora de antígenos según la reivindicación 23, en el que el antígeno HLA es HLA-A2402.