Una vacuna que comprende los epítopos peptídicos del virus de la gripe:

M1 2-12 (SEC ID Nº: 25 o 26); HA 91-108 (SEC ID Nº: 48); HA 307-319 (SEC ID Nº: 57); NP 335-350 (SEC ID Nº: 67); NP 380-393 (SEC ID Nº: 68); y HA354-372 (SEC ID Nº: 80).

Vacuna mejorada contra la gripe

Campo de la invención

La presente invención se refiere en líneas generales a vacunas contra la gripe para el uso humano y veterinario. En particular, la presente invención proporciona una vacuna que puede suscitar protección intercepas y a largo plazo que comprende una pluralidad de proteínas quiméricas que comprenden los siguientes epítopos peptídicos del virus de la gripe: un epítopo de linfocitos B y CTL (M1 2-12; SEC ID Nº: 25 o 26) ; un epítopo de linfocitos B (HA 91-108; SEC ID Nº: 48) ; y un epítopo de auxiliar T (HA 307-319; SEC ID Nº:57) ; dos epítopos de CTL (NP 335-350; SEC ID Nº: 67, y NP 380-393; SEC ID Nº: 68) ; y un epítopo de linfocitos B adicional (HA 354-372; SEC ID Nº: 80) .

Antecedentes de la invención

La gripe [0002] La gripe es una enfermedad ocasionada por virus de tres subtipos principales, la gripe A, B y C, que se clasifica de acuerdo con sus determinantes antigénicos. El virión de la gripe consiste en un genoma de ARN monocatenario estrechamente asociado con una nucleoproteína (NP) y envuelto por una envuelta de lipoproteína revestida por proteína de la matriz (M1) y lleva dos antígenos principales de glicoproteína de la superficie, la hemaglutinina (HA) y la neuraminidasa (NA) . Las glicoproteínas HA y NA son sumamente susceptibles a cambios; por ejemplo, hay 16 clases inmunitarias de HA y 9 clases de NA diferentes que proporcionan la base para los diferentes subtipos del virus de la gripe como H1N1 o H3N2. El virus de la gripe A tiene una glicoproteína transmembrana adicional, M2, que está muy conservada entre los diferentes subtipos de HN. El gen M2 codifica una proteína que tiene 96 -97 aminoácidos que se expresa como un tetrámero sobre la superficie celular del virión. Se compone aproximadamente de 24 aminoácidos extracelulares, aproximadamente 19 aminoácidos transmembrana y aproximadamente 54 restos citoplásmicos (Lamb et al, 1985) .

Los virus de la gripe A y B son las causas más comunes de gripe en humanos. La gripe tiene un impacto enorme sobre la salud pública con graves implicaciones económicas además de los problemas de salud devastadores, que incluyen morbosidad e incluso mortalidad. La infección puede ser leve, moderada o grave, variando desde asintomática hasta infección leve de las vías respiratorias superiores y traqueobronquitis a una neumonía viral, grave, ocasionalmente letal.

Los virus de la gripe tienen dos características inmunológicas importantes que presentan una exposición a preparaciones de vacuna. La primera concierne a cambios genéticos que se producen en las glicoproteínas de la superficie cada pocos años, que se denomina “deriva antigénica”. Este cambio antigénico produce virus que eluden la resistencia suscitada por las vacunas existentes. La segunda característica de gran preocupación para la salud pública es que los virus de la gripe, en particular el virus de la gripe A, pueden intercambiar y combinar material genético. Este proceso, conocido como “cambio antigénico”, da como resultado nuevas cepas diferentes de los dos virus parentales, que pueden ser cepas pandémicas letales. La gripe aviar es un virus de la gripe A que ha cruzado la barrera de las especies desde aves a mamíferos, incluyendo seres humanos.

Gripe aviar [0005] Las mayoría de las cepas de la gripe aviar (AI, siglas en inglés) se clasifican como gripe aviar poco patógena (LPAI, siglas en inglés) y ocasionan escasos síntomas clínicos en aves infectadas. En cambio, las cepas de la gripe aviar altamente patógena (HPAI, siglas en inglés) ocasionan una enfermedad grave y extremadamente contagiosa y la muerte entre las aves infectadas.

Los seres humanos normalmente no están afectados por la gripe aviar, sin embargo, las epidemias de la gripe aviar altamente patógena (HPAI) recientemente observada en aves de corral en Asia aumenta las oportunidades de exposición e infección para el ser humano. Se han descrito casos graves en el pasado y durante las epidemias actuales en Asia. Recientemente brotes altamente patógenos han sido ocasionados por virus de la gripe A de los subtipos H5 y H7. De los 15 subtipos del virus de gripe aviar, el H5N1 es de particular preocupación dado que muta rápidamente y tiene una propensión documentada para adquirir genes de virus que infectan a otras especies de animales. Su capacidad para ocasionar enfermedades en seres humanos está actualmente bien documentada. Las aves que sobreviven a la infección excretan el virus durante al menos 10 años, por vía oral y en las heces, por lo tanto facilitando mayor propagación en los mercados de aves de corral vivas y por aves migratorias.

La epidemia de la HPAI, ocasionada por el subtipo H5N1, que comenzó a mediados de Diciembre del 2003 en determinados países de Asia se ha propagado y plantea una preocupación para la salud pública. La propagación de la infección en las aves aumenta las oportunidades para la infección directa en seres humanos. Si a lo largo del tiempo más humanos comienzan a infectarse, aumenta también la probabilidad de que los seres humanos, si actualmente están infectados con cepas de gripe humana y aviar, pudieran servir como hospedadores para la emergencia de un nuevo subtipo con suficientes genes de la gripe humana que se transmitan fácilmente de una persona a otra. Tal evento marcaría el inicio de una pandemia gripal.

La propagación de la AI entre aves se produce principalmente por contacto directo entre aves sanas y aves infectadas, y por contacto indirecto con equipo y materiales contaminados. El virus se excreta a través de las heces de las aves infectadas y a través de secreciones desde los orificios nasales, boca y ojos.

El contacto con material fecal infectado es el modo de transmisión más habitual de un ave a otra. Los patos salvajes a menudo introducen virus poco patógenos en bandadas domesticas criadas en libertad o en corrales al aire libre a través de contaminación fecal. Dentro de una instalación de aves de corral, la transferencia de virus HPAI entre aves también puede producirse mediante secreciones transmitidas por el aire. La propagación de la gripe aviar entre dependencias de aves de corral casi siempre sigue el movimiento de personal y de equipo contaminado. La transferencia de huevos es también un posible medio de transmisión de AI.

Antígenos del virus de la gripe y producción de vacunas [0010] La inmunización contra el virus de la gripe está limitada por la variación antigénica del virus y por la restricción de la infección a las membranas mucosas respiratorias. Las vacunas de la gripe actualmente disponibles se basan en virus inactivos completos, o en determinantes antigénicos, de las proteínas de superficie. La HA es un fuerte inmunógeno y es el antígeno más significativo definiendo la especificidad serológica de las diferentes cepas de virus.

La molécula de HA (75-80 kD) comprende una pluralidad de determinantes antigénicos, muchos de los cuales se encuentran en regiones que experimentan cambios de secuencia en diferentes cepas (determinantes específicos de cepas) y otros en regiones que están conservadas en muchas moléculas de HA (determinantes comunes) . Debido a estos cambios, las vacunas gripales necesitan modificarse al menos cada pocos años.

En la técnica se conocen muchos antígenos gripales, y vacunas preparadas a partir de los mismos. La Patente de Estados Unidos 4.474.757 desvela una vacuna contra infecciones del virus de la gripe que consiste en un péptido sintético correspondiente a un fragmento antigénico de HA unido a un transportador macromolecular adecuado, tal como polímeros de aminoácidos o toxoide tetánico.

La publicación internacional PCT WO 93/20846 de algunos de los inventores de la presente invención explica una vacuna recombinante sintética contra una pluralidad de diferentes cepas de virus de la gripe que comprende al menos una proteína recombinante que comprende la secuencia de aminoácidos de la flagelina y al menos una secuencia de aminoácidos de un epítopo de HA o NP del virus de la gripe, o un agregado de dicha proteína quimérica. Siguiendo esta estrategia, se descubrió una vacuna antigripal recombinante sintética basada en tres epítopos que era altamente eficaz en ratones. Las vacunas ilustradas con ejemplos incluyen quimeras de flagelina que comprenden el epítopo de HA 91-108, un epítopo de linfocitos B de la HA que se conserva en todas las cepas H3 y suscita anticuerpos neutralizantes antigripales, junto con uno o dos epítopos NP de auxiliares T o CTL (NP 55 69 y NP 147... [Seguir leyendo]

1. Una vacuna que comprende los epítopos peptídicos del virus de la gripe: M1 2-12 (SEC ID Nº: 25 o 26) ; HA 91

108 (SEC ID Nº: 48) ; H.

30. 319 (SEC ID Nº: 57) ; N.

33. 350 (SEC ID Nº: 67) ; N.

38. 393 (SEC ID Nº: 68) ; y HA .

35. 372 (SEC ID Nº: 80) .

2. La vacuna de acuerdo con la reivindicación 1, que adicionalmente comprende un adyuvante o un excipiente.

3. La vacuna de acuerdo con la reivindicación 1, formulada para la administración por una modalidad selecciona del

grupo que consiste en administración intraperitoneal, subcutánea, intranasal, intramuscular, oral, tópica y transdérmica.

4. Una vacuna de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores para su uso en un método para suscitar una respuesta inmunitaria y conferir protección contra el virus de la gripe en un sujeto. 15

5. La vacuna de acuerdo con la reivindicación 4, en la que la respuesta inmunitaria se suscita contra la gripe aviar, la gripe de tipo A, la gripe de tipo B o una de sus combinaciones.

6. El uso de la vacuna de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-5 para la preparación de un agente 20 farmacéutico para suscitar una respuesta inmunitaria y conferir protección contra el virus de la gripe en un sujeto.