Vacuna contra la gripe humana que contiene cuatro péptidos de influenza.
Una vacuna contra la gripe basada en péptidos sintética humana que comprende cuatro epítopos de virus degripe:
(i) un epítopo de hemaglutinina de células B que es el epítopo de hemaglutinina H A91-108 de la secuencia:Ser-Lys-Ala-Phe-Ser-Asn-Cys-Tyr-Pro-Tyr-Asp-Val-Pro-Asp-Tyr-Ala-Ser-Leu;
(ii) un epítopo de la T colaboradora que es el epítopo de hemaglutinina HA307-319 de la secuencia: Pro-Lys-Tyr-Val-Lys-Gln-Asn-Thr-Leu-Lys-Leu-Ala-Thr;
(iii) un epítopo de linfocitos citotóxicos (CTL) que es el epítopo de nucleoproteína NP335-350 de la secuencia:Ser-Ala-Ala-Phe-Glu-Asp-Leu-Arg-Val-Leu-Ser-Phe-Ile-Arg-Gly-Tyr; y
(iv) un epítopo de los CTL que es el epítopo de nucleoproteína NP380-393 de la secuencia: Glu-Leu-Arg-Ser-Arg-Tyr-Trp-Ala-Ile-Arg-Thr-Arg-Ser-Gly,
los mencionados epítopos del virus de gripe siendo reactivos con células humanas.
Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E10003160.
Solicitante: YEDA RESEARCH AND DEVELOPMENT COMPANY LIMITED.
Nacionalidad solicitante: Israel.
Dirección: THE WEIZMANN INSTITUTE OF SCIENCE P.O. BOX 95 76100 REHOVOT ISRAEL.
Inventor/es: ARNON, RUTH, BEN-YEDIDIA,Tamar, LEVI,RAPHAEL.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- A61K39/145 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE. › A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › A61K 39/00 Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53). › Orthomyxoviridae, p. ej. virus de la influenza.
- C07K14/11 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › Orthomyxoviridae, p. ej. virus de la influenza.
PDF original: ES-2389611_T3.pdf
Fragmento de la descripción:
Vacuna contra la gripe humana que contiene cuatro peptidos de influenza
CAMPO DE LA INVENCION
La presente invención se refiere a vacunas de gripe, y particularmente a vacunas basadas en péptidos que comprenden epítopos conservados de tanto los linfocitos C como los T reconocidos por los HLAs predominantes en humanos.
ABREVIACIONES: Ab: Anticuerpos; CTL: linfocitos T citotóxicos; EID: Dosis infecciosa en huevo; HA: Hemaglutinina; HAU: Unidad de hemaglutinina; i. n.: Intranasal; i. p.: Intraperitoneal; NP: Nucleoproteína; PMBC: Células mononucleares de sangre periférica; TT: Toxoide tetánico.
ANTECEDENTES DE LA INVENCION
La gripe es una preocupación de la salud pública, resulta en carga económica, morbilidad e incluso en mortalidad. La infección de gripe puede resultar en una variedad de estados de enfermedad, variando desde infección sub-clínica a través de una infección respiratoria superior leve y traqueobronquitis a una neumonía viral severa ocasionalmente letal. Las razones de este amplio espectro de severidad se explican por el lugar de la infección y el estado inmune del huésped. La característica más importante de la gripe, desde el punto de vista inmunológico, son los cambios rápidos, impredecibles de las glicoproteínas de superficie, la hemaglutinina y la neuraminidasa, referidos como cambios y derivas antigénicas. Estos cambios llevan eventualmente a la aparición de nuevas cepas de gripe, que permiten al virus escapar del sistema inmune y son la causa de casi todas las epidemias anuales (Laver y otros, 1980 y 1980a; Webster, 1982) .
La inmunización al virus de la gripe está limitada por esta variación antigénica marcada del virus y por la restricción de la infección a las membranas mucosas respiratorias. Las vacunas de la gripe actualmente disponibles y autorizadas están basadas o en virus inactivo completo, o en glicoproteínas de superficie virales. Estas vacunas de la gripe fallan al inducir una inmunidad completa, a largo plazo y de cepas cruzadas.
El virus de la gripe comprende dos antígenos de superficie: la neuraminidasa (NA) y la hemaglutinina (HA) , que experimentan cambios graduales (cambios y derivas) , llevando a las altas variaciones antigénicas en la gripe. La HA es un inmunógeno fuerte y es el antígeno más significativo al definir la especificidad serológica de las diferentes cepas de virus. La molécula de HA (75-80 kD) comprende una pluralidad de determinantes antigénicos, varios de los cuales están en regiones que experimentan cambios de secuencia en diferentes cepas (determinantes específicos de la cepa) y otros en regiones que son comunes a muchas moléculas de HA (determinantes comunes) .
La US 4.474.757 describe una vacuna sintética contra una pluralidad de virus de gripe diferentes que comprende un portador macromolecular adecuado que tiene unido al mismo un péptido que es un fragmento antigénico de HA que es común a una pluralidad de diferentes cepas del virus de la gripe. Uno de los determinantes comunes descritos es el epítopo de HA 91-108 que está conservado en todas las cepas del subtipo de gripe H3.
La nucleoproteína (NP) está localizada en el núcleo viral y es una del grupo de antígenos específicos que distingue entre los virus de la gripe A, B y C. Al contrario que la HA, la NP es una de las proteínas virales más conservadas, estando conservada en un 94% en todos los virus de la gripe A. El anticuerpo especifico de la NP del virus de la gripe Ano tiene actividad neutralizadora de virus, pero la NP es un objetivo importante para los linfocitos T citotóxicos (CTL) que son de reacción cruzada con todos los virus del tipo A (Townsend y Skehel, 1984) . Los CTL reconocen péptidos sintéticos cortos que corresponden con regiones lineares de la molécula de la NP de la gripe (Townsend y otros, 1985 y 1986) .
La publicación Internacional de PCT WO 93/20846 describe una vacuna recombinante sintética contra una pluralidad de cepas de virus de gripe diferentes que comprende al menos una proteína quimérica que comprende la secuencia de aminoácido de la flagelina y al menos una secuencia de aminoácido de un epítopo de la HA o la NP del virus de gripe, o un agregado de la mencionada proteína quimérica. Siguiendo este enfoque, se descubrió que una vacuna anti-gripe recombinante sintética basada en tres epítopos es altamente eficiente en ratones. Esta vacuna incluía la HA 91-108, un epítopo de célula B de la HA que se conserva en todas las cepas H3 y produce anticuerpos neutralizantes anti-gripe, junto con una T colaboradora y epítopos CTL de la NP (NP 55-69 y NP 147-158, respectivamente) , que inducen las respuestas inmunes MHC-restringidas. Cada uno de estos epítopos se expresó en la flagelina de la cepa de la vacuna de la Salmonella. Los flagelos aislados fueron administrados por vía intranasal a ratones, resultando en protección contra la infección viral (Levi y Arnon, 1996) .
Ben-Yedidia y otros (Mechanism in Ageing and Development 104 (1998) , pp. 11-23) investigan a eficiencia de la vacuna de la gripe de tres epítopos en diferentes grupos de edades de ratones.
RESUMEN DE LA INVENCION
De acuerdo con la presente invención, los epítopos de péptido de la gripe reactivos con células humanas fueron expresados en flagelina de Salmonella y probados para la eficacia en una quimera por radiación
humana/ratón en los que las PBMC humanas fueron injertadas funcionalmente. La depuración del virus después de la exposición y la resistencia a la infección letal se encontró sólo en los ratones vacunados y la producción de anticuerpos humanos específicos del virus fue también más alta en este grupo. El análisis FACS mostró que la mayoría de las células humanas en los ratones trasplantados fueron CD8+ y CD4+, indicando que la protección fue mediada principalmente por la respuesta inmune celular.
La presente invención en consecuencia se refiere a una vacuna contra la gripe basada en péptidos sintética humana para la administración intranasal que comprende una mezcla de flagelos que contienen al menos cuatro epítopos del virus de la gripe cada uno expresado individualmente en flagelina de Salmonella, los mencionados epítopos del virus siendo reactivos con las células humanas y siendo seleccionados del grupo consistente de: (i) un
epítopo de hemaglutinina (HA) de células B; (ii) un epítopo de hemaglutinina (HA) o nucleoproteína (NP) de T colaboradora que puede enlazar con muchas moléculas HLA; y (iii) al menos dos epítopos de proteína de matriz (M)
o nucleoproteína (NP) de linfocito citotóxico (CTL) que están restringidos a las moléculas HLA más predominantes en diferentes poblaciones humanas.
[0012] El epítopo HA de células B es el epítopo 91-108 de hemaglutinina del virus de la gripe [HA 91-108] de la secuencia:
Los epítopos de T colaboradoras son el epítopo 307-319 de la hemaglutinina del virus de la gripe [HA 307319] de la secuencia: Pro-Lys-Tyr-Val-Lys-Gln-Asn-Thr-Leu-Lys-Leu-Ala-Thr y el epítopo 306-324 de la HA [HA 306-324] de la secuencia:
Los epítopos de los linfocitos T citotóxicos (CTL) usados en la vacuna de la invención cambiarán de acuerdo al tipo de población, concretamente Caucásico o no Caucásico (de origen Asiático o Africano) . Para las 30 poblaciones Caucásicas, los epítopos de los CTL son el epítopo 335-350 de la nucleoproteína (NP) del virus de la gripe [NP 335-350] de la secuencia:
y el epítopo 380-393 de la NP [NP 380-393] de la secuencia:
[0015] En una realización preferida de la invención, la vacuna contra la gripe intranasal consiste de una mezcla de los cuatro epítopos del virus de la gripe: epítopos de hemaglutinina HA91-108 y HA307-319, y los epítopos de la nucleoproteína NP335-350 y NP390-393, expresados individualmente en flagelina de Salmonella. Para las poblaciones no Caucásicas, se pueden usar otros epítopos de CTL.
La presente invención también se refiere al uso de una mezcla de flagelos que contienen al menos cuatro epítopos de virus de gripe cada uno expresado individualmente en flagelina de Salmonella, como se ha descrito anteriormente, para la preparación de una vacuna contra la gripe sintética humana para la administración intranasal.
La presente invención además se refiere a un método para inducir una respuesta inmune humana y conferir protección contra el virus de la gripe en humanos, que compren... [Seguir leyendo]
Reivindicaciones:
1. Una vacuna contra la gripe basada en péptidos sintética humana que comprende cuatro epítopos de virus de gripe:
(i) un epítopo de hemaglutinina de células B que es el epítopo de hemaglutinina HA91-108 de la secuencia: Ser-Lys-Ala-Phe-Ser-Asn-Cys-Tyr-Pro-Tyr-Asp-Val-Pro-Asp-Tyr-Ala-Ser-Leu;
(ii) un epítopo de la T colaboradora que es el epítopo de hemaglutinina HA307-319 de la secuencia: Pro-Lys-Tyr-Val-Lys-Gln-Asn-Thr-Leu-Lys-Leu-Ala-Thr;
(iii) un epítopo de linfocitos citotóxicos (CTL) que es el epítopo de nucleoproteína NP335-350 de la secuencia: 10 Ser-Ala-Ala-Phe-Glu-Asp-Leu-Arg-Val-Leu-Ser-Phe-Ile-Arg-Gly-Tyr; y
(iv) un epítopo de los CTL que es el epítopo de nucleoproteína NP380-393 de la secuencia: Glu-Leu-Arg-Ser-Arg-Tyr-Trp-Ala-Ile-Arg-Thr-Arg-Ser-Gly,
los mencionados epítopos del virus de gripe siendo reactivos con células humanas. 15
2. La vacuna contra la gripe basada en péptidos sintética humana de acuerdo a la reivindicación 1 para inducir una respuesta inmune humana y conferir protección contra el virus de la gripe.
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