Utilización de inhibidores peptídicos permeables celulares de la vía de transducción de señales JNK para el tratamiento de enfermedades cardiovasculares.

Péptido inhibidor de JNK consistente en una secuencia de aminoácidos de acuerdo con la SEC ID NO:

2 o de un péptido quimérico consistente en un primer dominio y un segundo dominio unidos mediante un enlace covalente, comprendiendo el primer dominio una secuencia de tráfico y consistiendo el segundo dominio en una secuencia inhibidora de JNK de acuerdo con la SEC ID NO: 2, estando el primer dominio unido al extremo C-terminal del segundo dominio, para su uso en un método de tratamiento de enfermedades cardiovasculares seleccionadas de entre infarto de miocardio, dilatación de la aorta abdominal, hipertensión por aneurisma infrarenal y apoplejía.

Utilización de inhibidores peptídicos permeables celulares de la vía de transducción de señales JNK para el tratamiento de enfermedades cardiovasculares La presente invención se refiere a la utilización de inhibidores de proteína quinasa y más específicamente al uso de inhibidores de la proteína quinasa amino terminal c-Jun, de secuencias inhibidoras de JNK, de péptidos quiméricos o composiciones farmacéuticas que los contienen, para el tratamiento de diverass enfermedades o trastornos relacionados con la señalización de JNK, seleccionándose dichas enfermedades o transtornos de entre enfermedades cardiovasculares.

La quinasa amino terminal c-Jun (JNK) es un miembro del grupo activado por estrés de las proteína quinasas activadas por mitógeno (MAP) . Estas quinasas están implicadas en el control del crecimiento y la diferenciación celular y, en general, en la respuesta celular a estímulos ambientales. La vía de transducción de las señales JNK es activada en respuesta al estrés ambiental y por la unión de varias clases de receptores de la superficie celular. Estos receptores pueden incluir receptores citocina, receptores serpentina y tirosinquinasas receptoras. En las células de mamífero, la JNK está implicada en procesos biológicos como la transformación oncogénica y en respuestas mediadoras de adaptación al estrés ambiental. La JNK también se asocia a la respuesta inmunomoduladora, incluyendo a la maduración y diferenciación de células inmunitarias, además para llevar a cabo la muerte celular programada en aquellas células identificadas para su destrucción por el sistema inmunitario. Esta propiedad excepcional convierte a la señalización JNK en un objetivo prometedor para desarrollar una intervención farmacológica. Entre otros trastornos neurológicos, la señalización de JNK está particularmente implicada en la apoplejía isquémica y en la enfermedad de Parkinson, pero también en otras enfermedades que se mencionarán a continuación. Además, la proteína quinasa activada por mitógeno (MAPK) p38alfa se ha demostrado que regula negativamente la proliferación celular mediante la antagonización de la vía JNK-cJun. Por tanto, la proteína quinasa activada por mitógeno (MAPK) p38alfa parece ser activa en la supresión de la proliferación de células normales y cancerosas y, además se ha demostrado la implicación de JNK en enfermedades cancerosas (ver por ejemplo, Hui y col., Nature Genetics, Vol 39, No. 6, Junio 2007) . También se ha demostrado que la quinasa N-terminal c-Jun (JNK) está involucrada en el dolor neuropático producido por ligación del nervio espinal (SNL) , donde la SNL induce una activación lenta y persistente de JNK, en particular JNK1, mientras que la activación de la proteína quinasa activada por mitógeno p38 se halló en microgliocitos espinales después de la SNL, cayendo a un nivel casi basal a los 21 días (Zhuang y col., The Journal of Neuroscience, 29 de marzo de 2006, 26 (13) : 3551-3560) ) .

Así, la inhibición o interrupción de la vía de señalización JNK, particularmente la provisión de inhibidores de la vía de señalización JNK, parece una potencial vía para combatir trastornos estrechamente relacionados con la señalización de JNK. Sin embargo, actualmente sólo se conocen unos pocos inhibidores de la vía de señalización JNK.

Como es sabido de la técnica anterior, los inhibidores de la vía de señalización JNK incluyen particularmente, por ejemplo, inhibidores quinasa aguas arriba (por ejemplo, CEP-1347) , inhibidores químicos pequeños de JNK (SP600125 y AS601245) , que afectan directamente a la actividad quinasa, por ejemplo compitiendo con el sitio de adhesión ATP de la proteína quinasa, e inhibidores de péptidos de la interacción entre JNK y sus sustratos (D-JNKI e I-JIP) (ver por ejemplo Kuan y col., Current Drug Targets – CNS & Neurological Disorders, febrero 2005, vol. 4, no. 1, pp. 63-67 (5) ) .

El inhibidor de quinasa aguas arriba CEP-1347 (KT7515) es un inhibidor semi-sintético de la familia quinasa de linaje mixto. CEP-1347 (KT7515) promueve la supervivencia neuronal en dosis que inhiben la activación de las quinasas amino-terminales c-Jun (JNKs) en cultivos embriónicos primarios y células PC12 diferenciadas después de retirada trófica y en ratones tratados con 1-metil-4-feniltetrahidropiridina. Además, CEP-1347 (KT7515) puede promover la supervivencia a largo plazo de neuronas motoras y ciliares del ganglio simpático de la espina dorsal embriónica del pollo (ver, por ejemplo, Borasioy col., Neuroreport, 9 (7) : 1435-1439, 11 de Mayo de 1998) .

El inhibidor químico pequeño JNK SP600125 demostró reducir los niveles de fosforilación de c-Jun para proteger las neuronas dopaminérgicas contra la apoptosis y para restaurar parcialmente el nivel de dopamina en PD inducido por MPTP en ratones C57BL/6N (Wang y col., Neurosci Res. 2004 Feb; 48 (2) ; 195-202) . Estos resultados indican además que la vía JNK es el mediador principal de los efectos neurotóxicos de MPTP in vivo y que la inhibición de la actividad de JNK puede representar una estrategia nueva y eficaz para tratar el parkinson.

Otro ejemplo de inhibidores químicos pequeños es el inhibidor JNK AS601245 arriba mencionado. El AS601245 inhibe la vía de señalización JNK y promueve la supervivencia celular después de isquemia cerebral. In vivo, AS601245 proporcionó protección significativa contra la pérdida tardía de neuronas CA1 del hipocampo en un modelo de jerbo con isquemia global transitoria. Este efecto es mediado por la inhibición de JNK y, por tanto, por la expresión y fosforilación de c-Jun (ver por ejemplo Carboni y col., J Pharmacol Exp Ther. 2004 Jul; 310 (1) :25-32. Epub 26 de febrero de 2004) .

Una tercera clase de inhibidores de la vía de señalización JNK es la representada por los inhibidores peptídicos de la interacción entre JNK y sus sustratos, tal como se ha mencionado anteriormente. Como punto de partida para la construcción de dichos péptidos inhibidores JNK, puede emplearse una alineación de secuencias de la proteína JNK natural. Típicamente estas proteínas comprenden dominios de JNK (JBDs) y ocurren en varias proteínas de adhesión a insulina (IB) tales como IB1 o IB2. El resultado de dicha alineación de secuencia iliustrativa es, por ejemplo, una alineación de secuencia entre los dominios de adhesión JNQ de IB1 [SEC ID NO: 13], IB2 [SEC ID NO: 14], c-Jun [SEC ID NO: 15] y ATF2 [SECID NO: 16] (ver las FIG. 1A-1C) . Dicha alineación revela una secuencia de ocho aminoácidos parcialmente conservada (ver por ejemplo FIG. 1A) . Una comparación de los JBDs de IB1 e IB2 revela además dos bloques de siete y tres aminoácidos altamente conservados entre las dos secuencias.

Secuencias construidas en base a dicha alineación se han descrito por ejemplo en WO 01/27268 o WO 2007/031280. WO 2007/031280 y WO 01/27268 describen péptidos de fusión permeables de células pequeñas, que comprenden la secuencia de permeabilidad celular denominada TAT, derivada de la secuencia básica de tráfico de la proteína HIV-TAT, y una secuencia inhibidora mínima de 20 aminoácidos de IB1. Ambos componentes están unidos covalentemente uno al otro. Ejemplos (actualmente el único) de inhibidores de la vía de señalización MAPK–JNK descritos tanto en la WO 2007/031280 como en la WO 01/27268 son L-JNKI1 (péptido inhibidor de JNK compuesto por aminoácidos-L) o los péptidos D-JNKI1 resistentes a proteasa (péptido inhibidor de JNK compuesto por aminoácidos-D no naturales) . Estos péptidos inhibidores de JNK (JNKI) son específicos para JNK (JNK1, JNK2 y JNK3) . En contraste con aquellos inhibidores de compuestos de células pequeñas que se discutieron anteriormente, las secuencias inhibidoras de WO 2007/031280 o WO 01/27268, por ejemplo JNKI1, inhiben más bien la interacción entre JNK y su sustrato. Mediante esta secuencia de tráfico derivada de TAT, el péptido de fusión es transportado eficientemente a las células. Debido a las nuevas propiedades obtenidas por el componente de tráfico, los péptidos de fusión son transportados activamente a las células, donde mantienen sus efectos hasta la degradación proteolítica.

Sin embargo, los péptidos según WO 2007/031280 o WO 01/27268 demuestran ser activos sólo para un número de enfermedades particularmente limitado, en particular enfermedades proliferativas de células no malignas o proliferativas de células inmunológicamente relacionadas.

Así, un objeto de la presente invención consiste en identificar otras enfermedades que pueden combatirse con los péptidos inhibidores de JNK. Otro objeto de la presente invención es proporcionar (el uso de) péptidos inhibidores de JNK y derivados de los mismos para el tratamiento de dichas enfermedades,... [Seguir leyendo]

1. Péptido inhibidor de JNK consistente en una secuencia de aminoácidos de acuerdo con la SEC ID NO: 2 o de un péptido quimérico consistente en un primer dominio y un segundo dominio unidos mediante un enlace covalente, comprendiendo el primer dominio una secuencia de tráfico y consistiendo el segundo dominio en una secuencia inhibidora de JNK de acuerdo con la SEC ID NO: 2, estando el primer dominio unido al extremo C-terminal del segundo dominio, para su uso en un método de tratamiento de enfermedades cardiovasculares seleccionadas de entre infarto de miocardio, dilatación de la aorta abdominal, hipertensión por aneurisma infrarenal y apoplejía.

2. Péptido quimérico para su uso según la reivindicación 1, caracterizado porque la secuencia de tráfico comprende la secuencia de aminoácidos de un polipéptido TAT del virus de la inmunodeficiencia humana.

3. Péptido quimérico para su uso según las reivindicaciones 1 a 2, caracterizado porque la secuencia de tráfico consiste o comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 5, 6, 7, 8, 21 o 22.

4. Péptido quimérico para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque la secuencia de tráfico aumenta la absorción celular del péptido y/o dirige la localización nuclear del péptido.

5. Péptido quimérico para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque el péptido quimérico consiste en la secuencia de aminoácidos de SEC ID NO: 11.

6. Péptido inhibidor de JNK para su uso según la reivindicación 1 o péptido quimérico para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque el péptido inhibidor de JNK o el péptido quimérico se administra mediante una vía de administración seleccionada de entre el grupo consistente en vías parenterales, incluyendo intravenosa, intramuscular, subcutánea, intradérmica, transdérmica, vías enterales, incluyendo oral, rectal, vías tópicas, incluyendo nasal, intranasal, y otras vías, incluyendo epidérmica y liberación desde parches.

7. Péptido inhibidor de JNK para su uso según la reivindicación 1 o 6, o péptido quimérico para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque una dosis (por kg de peso corporal) del péptido inhibidor de JNK o del péptido quimérico oscila en el intervalo de hasta 10 mmol/kg, preferentemente de hasta 1 mmol/kg, de forma especialmente preferente de hasta 100 µmol/kg, de forma todavía más preferente de hasta 10 µmol/kg, de forma todavía más preferente de hasta 1 µmol/kg, de forma todavía más preferente de hasta 100 nmol/kg, y de forma totalmente preferente de hasta 50 nmol/kg.

8. Péptido inhibidor de JNK para su uso según la reivindicación 1, 6 o 7, o péptido quimérico para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque una dosis del péptido inhibidor de JNK o del péptido quimérico está en el intervalo de aproximadamente 1 pmol/kg a aproximadamente 1 mmol/kg, entre aproximadamente 10 pmol/kg a aproximadamente 0, 1 mmol/kg, entre aproximadamente 10 pmol/kg a aproximadamente 0, 01 mmol/kg, entre aproximadamente 50 pmol/kg a aproximadamente 1 µmol/kg, entre aproximadamente 100 pmol/kg a aproximadamente 500 nmol/kg, entre aproximadamente 200 pmol/kg a aproximadamente 300 nmol/kg, entre aproximadamente 300 pmol/kg a aproximadamente 100 nmol/kg, entre aproximadamente 500 pmol/kg a aproximadamente 50 nmol/kg, entre aproximadamente 750 pmol/kg a aproximadamente 30 nmol/kg, entre aproximadamente 250 pmol/kg a aproximadamente 5 nmol/kg, entre aproximadamente 1 nmol/kg a aproximadamente 10 nmol/kg, o una combinación de dos cualesquiera de estos valores.

Secuencias de péptidos, humano, ratón y rata Señal AlphaScreen (cps)

Señal AlphaScreen (cps)

número de pocillos Citoquinas (ng/ml)

Señal AlphaScreen (cps)

Estaurosporina

Señal AlphaScreen (cps)

-Log inhibidores (M) -Log inhibidores (M)

Ensayo de Reducción de Placa VZV

TNF en BALF por grupos después de BLM en D1

vehículo vehículovehículo vehículo

Cambio de

Peso Ingestión de comidaIngestión de agua24 h (g)

Producción de heces 24 h (g)

Ingestión de comida 24 h (g/g)

Producción de heces 24 h (g/g)

Gramos

Macrófago

rata

Liberación de TNF en células THP1 Liberación de IL-6 en células THP1 Liberación de MCP-1 en células THP1

Liberación de IL-2 en células Jurkat

Liberación de IFN en células Jurkat Liberación de IL-6 en células Jurkat

Soporte Soporte Soporte Producción de TNF enProducción de IL-6 enProducción de RANTES en