Usos de anticuerpos anti-cd40.

Anticuerpo anti-CD40, para su uso en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria o una enfermedad autoinmunitaria asociada con células que expresan CD40 en un paciente humano homocigótico o heterocigótico para Fcγ

RIIIa-158F (genotipo F/F o V/F), en el que dicho anticuerpo está seleccionado del grupo que consiste en :

a) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo capaz de unirse al anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 producido por la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como depósito de patente Nº PTA-5543;

b) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo que comprende los restos 82-87 de la secuencia de CD humano mostrada en la SEC ID Nº:7 o la SEQ ID Nº:9; y

c) un anticuerpo monoclonal que compite con el anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 producido por la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como depósito de patente Nº PTA-5543 en un ensayo de unión competitiva.

Usos de anticuerpos anti-cd40

La presente invención se refiere a nuevos usos de anticuerpos anti-CD40, en concreto en el tratamiento de enfermedades inflamatorias y enfermedades autoinmunitarias asociadas con células que expresan CD40.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Muchos de los miembros de la familia de ligandos del factor de necrosis tumoral (FNT) y sus correspondientes receptores regulan el crecimiento de las células normales induciendo la apoptosis o la potenciación de la supervivencia y la proliferación celular. Es este equilibrio entre las señales de apoptosis y las señales de supervivencia y proliferación el que mantiene la homeostasis celular normal. Hasta la fecha se han identificado al menos 26 receptores de la familia de FNT y 18 ligandos de la familia del FNT. Las formas biológicamente activas de los receptores y los ligandos son trímeros de proteínas autoensambladas. Se han identificado formas transmembrana y solubles de los receptores y de los ligandos. Aunque los dominios intracelulares de los receptores no comparten homología de secuencia, sus dominios extracelulares comprenden repeticiones ricas en cisteína de 40 aminoácidos. Sus colas citoplasmáticas señalizan interactuando con dos grupos principales de proteínas intracelulares: los factores asociados al receptor de FNT (TRAF) y las proteínas que contienen el dominio de muerte (DD) . La interacción entre al menos seis TRAF y sitios de unión a TRAF humanos en la cola citoplasmática de algunos de estos receptores inicia varias vías de señalización, incluidas AKT (la serina/treonina quinasa conocida como proteína quinasa B o PKB) , factor nuclear κB (NF-κB) , y proteínas quinasas activadas por mitógenos (MAPK) . Véase, por ejemplo, la revisión de Younes y Kadin (2003) J. Clin. Oncol. 18:3526-3534.

El miembro CD40 de la familia de receptores de FNT es un antígeno de superficie celular de 50-55 kDa presente en la superficie de los linfocitos B humanos normales y neoplásicos, las células dendríticas, los monocitos, los macrófagos, los linfocitos T CD8+, las células endoteliales y las células monocíticas y epiteliales. El antígeno CD40 también se expresa en los linfocitos T activados, las plaquetas activadas, las células inflamadas del músculo liso vascular, los eosinófilos, las membranas sinoviales en la artritis reumatoide, los fibroblastos dérmicos y otros tipos de células no linfoides. Dependiendo del tipo de célula que expresa CD40, la ligación puede inducir la diferenciación, activación, proliferación y adhesión intercelular. Por ejemplo, la unión de CD40 con su ligando afín, CD40L (también denominado CD154) , estimula la proliferación de linfocitos B y la diferenciación a células plasmáticas, la producción de anticuerpos, el cambio de isotipo y la generación de memoria de linfocitos B. Durante la diferenciación de los linfocitos B, el CD40 se expresa en linfocitos pre-B, pero se pierde tras la diferenciación a células plasmáticas.

El ligando de CD40 (CD40L) , también conocido como CD154, es una proteína transmembrana de 32-33 kDa, que también existe en dos formas solubles biológicamente activas más pequeñas, de 18 kDa y 31 kDa, respectivamente (Graf et al. (1995) . Eur. J. Immunol. 25: 1749-1754; Mazzei et al. (1995) J. Biol. Chem. 270:7025-7028; Pietravalle et al. (1996) J. Biol. Chem. 271:5965-5967) . El CD40L se expresa en los linfocitos T auxiliares CD4+ activados, pero no en aquellos en reposo (Lane et al. (1992) Eur. J. Immunol. 22:2573-2578; Spriggs et al. (1992) J. Exp. Med. 176:1543-1550; y Roy et al. (1993) J. Immunol. 151:1-14) . Se han clonado y caracterizado tanto CD40 como CD40L (Stamenkovi et al. (1989) EMBO J. 8:1403-1410; Armitage et al., Nature 357:80-82 (1992) ; Lederman et al. (1992) J. Exp. Med. 175:1091-1101; y Hollenbaugh et al. (1992) EMBO J. 11:4313-4321) . Véase también la patente de EE.UU. Nº 5.945.513, que describe el CD40L humano. Las células transfectadas con el gen de CD40L y que expresan la proteína CD40L en su superficie pueden activar la proliferación de linfocitos B, y junto con otras señales estimuladoras, pueden inducir la producción de anticuerpos (Armitage et al. (1992) supra; y la patente de EE.UU. Nº 5.945.513) . Los pacientes con enfermedad autoinmunitaria tienen niveles séricos elevados de CD40L soluble (sCD40L) que no se observan en sujetos sanos. La sobreexpresión de CD40L origina enfermedades autoinmunitarias similares al lupus eritematoso sistémico en modelos de roedores (Higuchi et al. (2002) J. Immunol. 168:9-12) . Por el contrario, la ausencia de CD40L funcional en los linfocitos T activadas origina el síndrome de hiper-IgM ligado al cromosoma X (Allen et al. (1993) Science 259:990; y Korthauer et al. (1993) Nature 361:539) . Además, el bloqueo de la interacción CD40/CD40L puede prevenir el rechazo de trasplante en modelos de primates no humanos. Véase, por ejemplo, Wee et al. (1992) Transplantation 53:501-7.

La expresión de CD40 en las APC desempeña una función coestimuladora importante en la activación de estas células. Por ejemplo, se ha demostrado que los anticuerpos monoclonales anti-CD40 agonistas (mAbs) imitan los efectos de los linfocitos T auxiliares en la activación de los linfocitos B. Cuando se presentan en células adherentes que expresan FcγRII, estos anticuerpos inducen la proliferación de los linfocitos B (Banchereau et al. (1989) Science 251:70) . Por otra parte, los mAbs anti-CD40 agonistas pueden sustituir la señal de los T auxiliares para la secreción de IgM, IgG e IgE en presencia de IL-4 (Gascan et al. (1991) J. Immunol. 147:8) . Además, los mAbs anti-CD40 agonistas puede evitar la muerte celular programada (apoptosis) de los linfocitos B aislados de los ganglios linfáticos.

Estas y otras observaciones apoyan la teoría actual de que la interacción de CD40 y CD40L desempeña un papel fundamental en la regulación de las respuestas inmunitarias celulares y humorales. Estudios más recientes han revelado un papel mucho más amplio de la interacción CD40/CD40L en diversos procesos fisiológicos y patológicos.

La vía de transducción de señales de CD40 depende de la regulación coordinada de muchos factores intracelulares. Al igual que otros miembros de la familia de receptores de FNT, el CD40 activa los TRAF, incluidos TRAF-2, -3, -5, y -6, que regulan positivamente diversas vías de señalización tras el acoplamiento de CD40 con CD40L (ya sea CD40L unido a membrana o CD40L soluble) , incluidas la quinasa regulada por señales extracelulares (ERK) , la quinasa c-Jun aminoterminal (JNK) , p38 MAPK y NF-κB (véase, por ejemplo, Younes y Carbone (1999) Int. J. Biol. Markers 14:135-143; van Kooten y Banchereau (2000) J. Leukoc. Biol. 67:2-17) .

Se ha demostrado que la señalización a través de CD40 evita la muerte celular por apoptosis (Makus et al. (2002) J. Immunol. 14:973-982) . Las señales apoptóticas son necesarios para inducir la muerte celular programada de manera coordinada. Las señales de muerte celular pueden incluir estímulos intrínsecos desde dentro de la célula, tales como el estrés del retículo endoplasmático o estímulos extrínsecos tales como la unión al receptor de FasL o FNTα. La vía de señalización es compleja, e implica la activación de caspasas tales como la caspasa-3 y la caspasa-9, y de la poli (ADP ribosa) polimerasa (PARP) . Durante la cascada, las proteínas de señalización antiapoptóticas, tales como mcl-1 y bcl-x, y miembros de la familia de proteínas IAP, tales como el inhibidor de la apoptosis ligado a X (XIAP) , están reguladas negativamente (Budihardjo et al. (1999) Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 15:269-290) . Por ejemplo, en las células dendríticas, la señalización celular de CD40 puede bloquear las señales de apoptosis transducidas por FasL (Bjorck et al. (1997) Intl. Immunol. 9:365-372) .

Por lo tanto, el acoplamiento de CD40 por CD40L y la posterior activación de la señalización de CD40 son etapas necesarias para la respuesta inmunitaria normal; sin embargo, la desregulación de la señalización de CD40 puede conducir a la enfermedad. Se ha demostrado que la vía de señalización de CD40 está implicada en la enfermedad autoinmunitaria (Ichikawa et al. (2002) J. Immunol. 169:2781-2787 y Moore et al. (2002) J. Autoimmun. 19:139-145) . Además, la interacción CD40/CD40L juega un papel importante en los procesos inflamatorios. Por ejemplo, tanto CD40 como CD40L están sobreexpresados en las lesiones ateroscleróticas humana y experimental. La estimulación de CD40 induce la expresión de enzimas que degradan la matriz y la expresión del factor tisular en tipos de células asociadas a ateroma, tales como células endoteliales, células del músculo liso y macrófagos. Además, la estimulación de CD40 induce la producción... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo anti-CD40, para su uso en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria o una enfermedad autoinmunitaria asociada con células que expresan CD40 en un paciente humano homocigótico o heterocigótico para FcγRIIIa-158F (genotipo F/F o V/F) , en el que dicho anticuerpo está seleccionado del grupo que consiste en :

a) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo capaz de unirse al anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 producido por la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como depósito de patente Nº PTA-5543; b) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo que comprende los resto.

8. 87 de la secuencia de CD40 humano mostrada en la SEC ID Nº:7 o la SEQ ID Nº:9; y c) un anticuerpo monoclonal que compite con el anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 producido por la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como depósito de patente Nº PTA-5543 en un ensayo de unión competitiva.

2. Uso de una cantidad terapéuticamente o profilácticamente eficaz de un anticuerpo anti-CD40 en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria o una enfermedad autoinmunitaria asociada con células que expresan CD40 en un paciente humano homocigótico o heterocigótico para FcγRIIIa-158F (genotipo F/F o V/F) , en el que dicho anticuerpo está seleccionado del grupo que consiste en:

a) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo capaz de unirse al anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 producido por la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como depósito de patente Nº PTA-5543; b) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo que comprende los resto.

8. 87 de la secuencia de CD40 humano mostrada en la SEC ID Nº:7 o la SEQ ID Nº:9; y c) un anticuerpo monoclonal que compite con el anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 producido por la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como depósito de patente Nº PTA-5543 en un ensayo de unión competitiva.

3. Método para seleccionar un tratamiento con anticuerpos para tratar a un paciente humano con una enfermedad inflamatoria o una enfermedad autoinmunitaria que es resistente al tratamiento con rituximab (Rituxan®) , que comprende determinar el genotipo (V/V, V/F o F/F) de FcγRIIIa-158 de un paciente humano con una enfermedad inflamatoria o una enfermedad autoinmunitaria asociada con células que expresan CD40 y que es resistente al tratamiento con rituximab (Rituxan®) utilizando una muestra biológica obtenida del paciente humano; en el que, si dicho paciente humano es homocigótico o heterocigótico para FcγRIIIa-158F (genotipo F/F o V/F) , se selecciona un anticuerpo anti-CD40 para tratar dicha enfermedad inflamatoria o enfermedad autoinmunitaria, en el que dicho anticuerpo está seleccionado del grupo que consiste en :

a) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo capaz de unirse al anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 producido por la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como depósito de patente Nº PTA-5543; b) un anticuerpo monoclonal que se une a un epítopo que comprende los resto.

8. 87 de la secuencia de CD40 humano mostrada en la SEC ID Nº:7 o la SEQ ID Nº:9; y c) un anticuerpo monoclonal que compite con el anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 producido por la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como depósito de patente Nº PTA-5543 en un ensayo de unión competitiva.

4. Anticuerpo según la reivindicación 1, uso según la reivindicación 2 o método según la reivindicación 3, en el que dicha enfermedad inflamatoria o enfermedad autoinmunitaria está seleccionada del grupo que consiste en el lupus eritematoso sistémico (LES) , el lupus discoide, la nefritis lúpica, la sarcoidosis, la artritis inflamatoria, incluidas la artritis juvenil, la artritis reumatoide, la artritis psoriásica, el síndrome de Reiter, la espondilitis anquilosante y la artritis gotosa, el rechazo de trasplante de órgano o tejido, el rechazo hiperagudo, agudo o crónico y/o la enfermedad de injerto contra hospedador, la esclerosis múltiple, el síndrome de hiper IgE, la poliarteritis nodosa, la cirrosis biliar primaria, la enfermedad inflamatoria intestinal, la enfermedad de Crohn, la enfermedad celíaca (enteropatía sensible al gluten) , la hepatitis autoinmunitaria, la anemia perniciosa, la anemia hemolítica autoinmunitaria, la psoriasis, la esclerodermia, la miastenia grave, la púrpura trombocitopénica autoinmunitaria, la tiroiditis autoinmunitaria, la enfermedad de Grave, la tiroiditis de Hasimoto, la enfermedad por inmunocomplejos, el síndrome de fatiga crónica y disfunción inmunitaria (CFIDS) , la polimiositis y la dermatomiositis, la crioglobulinemia, la trombolisis, la cardiomiopatía, el pénfigo vulgar, la fibrosis pulmonar intersticial, la diabetes mellitus tipo I y tipo II, la hipersensibilidad retardada de tipo 1, 2, 3 y 4, la alergia o los trastornos alérgicos, las respuestas inmunitarias no deseadas/inesperadas a proteínas terapéuticas, el asma, el síndrome de Churg-Strauss (granulomatosis alérgica) , la dermatitis atópica, la dermatitis por contacto alérgica e irritante, la urticaria, la alergia dependiente de IgE, la aterosclerosis, la vasculitis, las miopatías inflamatorias idiopáticas, la enfermedad hemolítica, la enfermedad de Alzheimer, y la polineuropatía desmielinizante inflamatoria crónica, la inflamación pulmonar incluida pero no limitada al rechazo de injerto pulmonar, el asma, la sarcoidosis, el enfisema, la fibrosis quística, la fibrosis pulmonar idiopática, la bronquitis crónica, la rinitis alérgica y las enfermedades alérgicas pulmonares tales como la neumonitis por hipersensibilidad, la neumonía eosinofílica, la bronquiolitis obliterante debida al trasplante de médula ósea y/o pulmón o a otras causas, la aterosclerosis del injerto/flebosclerosis del injerto, así como la fibrosis pulmonar por enfermedades autoinmunitarias, del colágeno y vasculares tales como la artritis reumatoide y el lupus eritematoso.

5. Anticuerpo según la reivindicación 1, uso según la reivindicación 2 o método según la reivindicación 3, en el que dicha enfermedad inflamatoria o enfermedad autoinmunitaria es una enfermedad inflamatoria o una enfermedad autoinmunitaria asociada con células que expresan tanto CD40 como CD20.

6. Anticuerpo, uso o método según la reivindicación 5, en el que dicha enfermedad inflamatoria o enfermedad autoinmunitaria es la artritis reumatoide, la psoriasis, el lupus eritematoso sistémico, la enfermedad de Crohn, la miastenia grave, la púrpura trombocitopénica idiopática o el síndrome de Sjogren.

7. Anticuerpo, uso o método según la reivindicación 5, en el que dicha enfermedad inflamatoria o enfermedad autoinmunitaria es la esclerosis múltiple, el rechazo de injerto, la enfermedad de injerto contra hospedador, la enfermedad de Alzheimer o la diabetes.

8. Anticuerpo según la reivindicación 1, uso según la reivindicación 2 o método según la reivindicación 3, en el que dicho anticuerpo es el anticuerpo monoclonal CHIR-12.12 producido por la línea celular de hibridoma depositada en la ATCC como depósito de patente Nº PTA-5543.

9. Anticuerpo, uso o método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicho anticuerpo anti-CD40 es un anticuerpo monoclonal humano.

10. Anticuerpo, uso o método según la reivindicación 9, en el que dicho anticuerpo monoclonal anti-CD40 humano comprende una región constante de la cadena pesada de la IgG1 humana.

11. Anticuerpo, uso o método según la reivindicación 10, en el que dicho anticuerpo monoclonal comprende la secuencia de aminoácidos relatada en la SEC ID NO:4 o en la SEQ ID Nº:5.

12. Anticuerpo, uso o método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicho anticuerpo anti-CD40 se une al CD40 humano con una afinidad (KD) de al menos aproximadamente 10-6 M, o al menos 10-8 M.

13. Anticuerpo, uso o método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicho anticuerpo anti-CD40 se une al FcγRIIIa-158V humano con una afinidad (KD) de al menos aproximadamente 0, 5 µM y/o se une al FcγRIIIa-158F humano con una afinidad (KD) de al menos aproximadamente 12 µM.

14. Anticuerpo, uso o procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicho anticuerpo monoclonal es un fragmento de unión a antígeno de un anticuerpo monoclonal, en el que dicho fragmento conserva la capacidad de unirse específicamente a dicho antígeno CD40 humano.

15. Fragmento de unión a antígeno según la reivindicación 14, en el que dicho fragmento está seleccionado del grupo que consiste en un fragmento Fab, un fragmento F (ab’) 2, un fragmento Fv y un fragmento Fv monocatenario.

16. Anticuerpo o uso según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que dicho uso da como resultado la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) de las células que expresan CD40 por los linfocitos citolíticos naturales (NK) que expresan FcγRIIIa de un paciente humano.

17. Anticuerpo, uso o método según cualquiera de las reivindicaciones 1-15, en el que dicho anticuerpo anti-CD40 es más potente que el rituximab (Rituxan®) en un ensayo de citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) , en el que el ensayo comprende incubar células que expresan CD40 y células que expresan CD20 con linfocitos citolíticos naturales (NK) humanos aislados, en presencia del anticuerpo pertinente.

18. Anticuerpo, uso o método según cualquiera de las reivindicaciones 1-16, en el que dicho anticuerpo anti-CD40 es más potente que el rituximab (Rituxan®) en un modelo de lupus eritematoso sistémico (LES) , esclerosis múltiple, inflamación y aterosclerosis, trasplante o enfermedad de Alzheimer.

19. Anticuerpo, uso o método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicho paciente humano es resistente a un tratamiento para una enfermedad inflamatoria o autoinmunitaria.

20. Anticuerpo, uso o método según la reivindicación 19, en el que dicho paciente humano es resistente al tratamiento con un anticuerpo monoclonal anti-CD20.

21. Anticuerpo, uso o método según la reivindicación 20, en el que dicho anticuerpo monoclonal anti-CD20 es rituximab (Rituxan®) .