USO DE MEDIO DE MONTAJE MEJORADO PARA PORTAOBJETOS PARA MICROSCOPIO.
Uso de un medio comprendiendo una solución de resina de metacrilato de isobutilo,
en al menos un solvente orgánico seleccionado del grupo que consiste en hidrocarburos saturados, opcionalmente mezclados con uno o más alcoholes, como un medio de montaje para preparar portaobjetos de microscopía
Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E00203405.
Solicitante: MALLINCKRODT BAKER B.V.
Nacionalidad solicitante: Países Bajos.
Dirección: P.O. BOX 1,7400 AA.
Inventor/es: KIEFTENBELD,WILHELMUS,HERMANUS,HENDRIKUS,MARIA.
Fecha de Publicación: .
Fecha Solicitud PCT: 2 de Octubre de 2000.
Fecha Concesión Europea: 17 de Febrero de 2010.
Clasificación Internacional de Patentes:
- C08J3/09B1
- G01N1/30 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 1/00 Muestreo; Preparación de muestras para la investigación (manipulación de materiales para un análisis automático G01N 35/00). › Tintura; Impregnación.
- G02B21/34 G […] › G02 OPTICA. › G02B ELEMENTOS, SISTEMAS O APARATOS OPTICOS (G02F tiene prioridad; elementos ópticos especialmente adaptados para ser utilizados en los dispositivos o sistemas de iluminación F21V 1/00 - F21V 13/00; instrumentos de medida, ver la subclase correspondiente de G01, p. ej. telémetros ópticos G01C; ensayos de los elementos, sistemas o aparatos ópticos G01M 11/00; gafas G02C; aparatos o disposiciones para tomar fotografías, para proyectarlas o para verlas G03B; lentes acústicas G10K 11/30; "óptica" electrónica e iónica H01J; "óptica" de rayos X H01J, H05G 1/00; elementos ópticos combinados estructuralmente con tubos de descarga eléctrica H01J 5/16, H01J 29/89, H01J 37/22; "óptica" de microondas H01Q; combinación de elementos ópticos con receptores de televisión H04N 5/72; sistemas o disposiciones ópticas en los sistemas de televisión en colores H04N 9/00; disposiciones para la calefacción especialmente adaptadas a superficies transparentes o reflectoras H05B 3/84). › G02B 21/00 Microscopios (oculares G02B 25/00; sistemas polarizantes G02B 27/28; microscopios de medida G01B 9/04; micrótomos G01N 1/06; técnicas o aparatos de sonda de barrido G01Q). › Platinas de microscopios, p. ej. montaje de muestras sobre las platinas de microscopio (preparación de muestras para el análisis G01N 1/28; medios de soporte de los objetos o materiales sometido al análisis en los microscopios electrónicos H01J 37/20).
Clasificación PCT:
- C08J7/04 QUIMICA; METALURGIA. › C08 COMPUESTOS MACROMOLECULARES ORGANICOS; SU PREPARACION O PRODUCCION QUIMICA; COMPOSICIONES BASADAS EN COMPUESTOS MACROMOLECULARES. › C08J PRODUCCION; PROCESOS GENERALES PARA FORMAR MEZCLAS; TRATAMIENTO POSTERIOR NO CUBIERTO POR LAS SUBCLASES C08B, C08C, C08F, C08G o C08H (trabajo, p. ej. conformado, de plásticos B29). › C08J 7/00 Tratamiento químico o revestimiento de materiales modelados hechos de sustancias macromoleculares (revestimiento con materiales metálicos C23C; deposición electrolítica de metales C25). › Recubrimiento.
- G01N1/30 G01N 1/00 […] › Tintura; Impregnación.
- G02B21/34 G02B 21/00 […] › Platinas de microscopios, p. ej. montaje de muestras sobre las platinas de microscopio (preparación de muestras para el análisis G01N 1/28; medios de soporte de los objetos o materiales sometido al análisis en los microscopios electrónicos H01J 37/20).
Clasificación antigua:
- C08J7/04 C08J 7/00 […] › Recubrimiento.
- G01N1/30 G01N 1/00 […] › Tintura; Impregnación.
- G02B21/34 G02B 21/00 […] › Platinas de microscopios, p. ej. montaje de muestras sobre las platinas de microscopio (preparación de muestras para el análisis G01N 1/28; medios de soporte de los objetos o materiales sometido al análisis en los microscopios electrónicos H01J 37/20).
Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Eslovenia, Finlandia, Rumania, Chipre, Lituania, Letonia, Ex República Yugoslava de Macedonia, Albania.
Fragmento de la descripción:
Uso de medio de montaje mejorado para portaobjetos para microscopio.
La presente invención se refiere al uso de un medio en la preparación de portaobjetos para la investigación por técnicas de microscopía.
El medio se usa en particular en histoquímica, inmunoquímica y/o citoquímica, es decir, para proporcionar portaobjetos de muestras de sangre, tejido de células u otros fluidos biológicos o materiales, incluyendo pero no limitándose a muestras/materiales que han sido teñidas para facilitar el examen microscópico, p. ej. con objetivos científicos y/o diagnósticos.
Otros aspectos de la invención se pondrán de manifiesto en la descripción dada a continuación.
Generalmente, en microscopía, un portaobjeto de un material o de una muestra a investigar se prepara poniendo dicha muestra o dicho material sobre un portaobjeto (inferior) y después cubriendo dicha muestra con una cubierta (superior). Generalmente, para la microscopía óptica o técnicas similares, se usan portaobjetos y cubiertas de vidrio u otros materiales transparentes adecuados.
También, en la preparación de tales portaobjetos, el cubreobjeto normalmente está adherido/fijado al portaobjeto inferior. Este "montaje" asegura que la muestra y el cubreobjeto permanecen en su sitio sobre el portaobjeto inferior, lo que facilita la manipulación, el almacenamiento y/o el transporte de los portaobjetos. También, tal montaje asegura que los portaobjetos se conservan durante períodos prolongados de tiempo, es decir, hasta cinco años o más, sin deterioro sustancial de la muestra o del material.
Generalmente, en histoquímica, citoquímica, inmunoquímica o técnicas de microscopía médicas o biológicas similares, el montaje de los portaobjetos es la última fase antes del examen del espécimen por microscopio. Así, para proporcionar una mejor comprensión de la presente invención, las técnicas convencionales para la preparación de tales portaobjetos ahora serán discutidas en más detalle.
Primero, una o más muestras del material a investigar, que pueden por ejemplo ser muestras de sangre, células, tejido, u otros fluidos biológicos o materiales de interés, se ponen sobre el portaobjeto inferior. La(s) muestra(s) es/son entonces teñida(s), es decir para hacer (más) visible uno o más de los componentes de la muestra o del material, tal como núcleos de célula, citoplasma de célula, tejido y estructuras celulares. Tales técnicas de tinción y composiciones/agentes para el uso allí dentro resultarán claros para el experto en la materia, y pueden por ejemplo incluir:
Después de eso, se lava el exceso de colorante, p. ej. usando una o más fases de lavado con agua del grifo y/o agua destilada/desionizada, alcohol (etanol, alcohol de isopropilo, alcohol bencílico, etc ...) u otro medio adecuado. Después de eso, los portaobjetos generalmente se lavan con un solvente orgánico o una mezcla de solvente, antes de que el cubreobjeto se fije sobre el portaobjeto inferior usando el medio de montaje. Estas últimas fases de lavado también están previstas para eliminar/reemplazar cualquier agua y/o alcohol (etanol, alcohol de isopropilo, alcohol bencílico, etc ...) restante de las primeras fases de lavado con el medio orgánico, es decir, para preparar la muestra para la aplicación del medio de montaje. Al hacerlo, el solvente orgánico actúa como un "intermediario" entre el agua/alcohol y el medio de montaje orgánico apolar.
Por ejemplo, el régimen para preparar/montar un portaobjeto puede ser esencialmente como se describe en la tabla 1
De forma convencional, como se indica en la tabla 1, se han usado solventes xilenos o solventes orgánicos aromáticos para las últimas fases de lavado. No obstante, puesto que el uso de tales solventes ya no es deseado, p. ej. por cuestiones de salud y seguridad, hoy en día se usan frecuentemente (mezclas de) hidrocarburos saturados, un ejemplo comercialmente disponible del cual es UltraClear® vendido por Mallinckrodt Baker B.V., Deventer, Países Bajos, que es una mezcla de nonanos, decanos, undecanos y dodecanos.
Después de lavar con la (mezcla) del solvente orgánico, unas gotas de medio de montaje se aplican a la muestra o al material, como se muestra en la Figura 1 (tres gotas en la figura 1). Después, se aplica el cubreobjeto, que está fijado/adherido (sobre el) al portaobjeto inferior por el medio de montaje. El montaje de un cubreobjetos es aplicado bien manualmente o por una máquina de cubreobjetos.
Medios de montaje convencionales normalmente comprenden una resina, tal como una resina acrilada en un hidrocarburo aromático tal como xileno o tolueno como solvente orgánico (véase GB 2155943). No obstante, en la práctica, sucede frecuentemente que los medios de montaje convencionales, y en particular la(s) resina(s) acrilada(s) presente(s) en ellos, interfieren y/o reaccionan con la mezcla del solvente orgánico usada para lavar el portaobjeto, resultando en la formación de una capa turbia en el portaobjeto y/o llevando a otros efectos indeseados que pueden disminuir la calidad del portaobjeto obtenido y/o del examen microscópico de éste. Se ha descubierto que estos problemas en particular pueden ocurrir cuando la(s) última(s) fase(s) de lavado ha(n) sido realizada(s) con (una mezcla de) hidrocarburos saturados, tal como UltraClear.
Por consiguiente, es un objetivo de la invención proporcionar el uso de un medio que pueda estar en conjunción con solventes orgánicos, tales como hidrocarburos aromáticos y alcoholes, es decir como los usados en la preparación de los portaobjetos, y en particular con hidrocarburos saturados, sin ninguno de los problemas indicados arriba.
Ahora se ha descubierto que tal medio de montaje puede ser proporcionado por el uso de una resina acrilada o resina de metacrilato como se describe abajo.
Así, en un primer aspecto, la invención se refiere al uso de un medio para la preparación de portaobjetos, dicho medio de montaje comprendiendo una solución, en al menos un solvente orgánico seleccionado del grupo que consiste en hidrocarburos saturados opcionalmente mezclados con uno o más alcoholes, de al menos una resina de (met)acrilato basada en uno o más monómeros teniendo la fórmula I:
Fórmula I:
donde R es hidrógeno o un grupo metilo y n tiene un valor de 0-19.
En particular, el grupo -(CH2)n-CH3 puede comprender una "columna vertebral" lineal de entre 1 y 10 átomos de carbono, que pueden ser sustituida en cualquier posición(es) por uno o más sustituyentes de hidrocarburos saturados tales como metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, 1-butilo, 2-butilo, i-butilo, etc.; de tal manera que la cantidad total de átomos de carbono en el grupo -(CH2)n-CH3 es de entre 1 y 20.
También, y/o alternativamente, el grupo -(CH2)n-CH3 puede comprender/contener un anillo de hidrocarburo saturado y/o un anillo de hidrocarburo aromático, que puede por ejemplo ser conectado al grupo de (met)acrilato mediante uno (otro) residuo de hidrocarburo saturado, y/o que de nuevo puede ser sustituido en cualquier posición(es) por uno o más sustituyentes de hidrocarburos saturados tales como metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, 1-butilo, 2-butilo, i-butilo, etc.; de nuevo tan largos como la cantidad total de átomos de carbono en el grupo -(CH2)n-CH3 es de entre 1 y 20.
Algunos ejemplos particularmente preferidos del grupo -(CH2)n-CH3 incluyen, pero no se limitan a:
Reivindicaciones:
1. Uso de un medio comprendiendo una solución de resina de metacrilato de isobutilo, en al menos un solvente orgánico seleccionado del grupo que consiste en hidrocarburos saturados, opcionalmente mezclados con uno o más alcoholes, como un medio de montaje para preparar portaobjetos de microscopía.
2. Uso según la reivindicación 1, en el que al menos un solvente orgánico es una (iso)parafina saturada lineal o ramificada C5-C20.
3. Uso según las reivindicaciones 1 ó 2, en el que al menos un solvente orgánico es una (iso)parafina saturada lineal o ramificada C8-C12.
4. Uso según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el solvente orgánico es un solvente aprótico, o una mezcla de solventes apróticos.
5. Uso según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el solvente orgánico es un solvente aprótico no polar o una mezcla de solventes apróticos no polares.
6. Uso según la reivindicación 2 ó 3, en el que el solvente orgánico se mezcla con - uno o más alcoholes C1-C6.
7. Uso según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el solvente orgánico es una mezcla de nonanos, decanos, undecanos, y dodecanos.
8. Uso según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el medio esencialmente tiene la composición:
hasta un total del 100% en peso de la composición total.
9. Uso según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el medio tiene una viscosidad de entre 2 y 6 Stokes, p. ej. de aproximadamente 4 Stokes, a 25ºC, según se ha medido en un viscosímetro Gardner Bubble.
10. Uso según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, incluyendo al menos las fases de:
11. Uso según la reivindicación 10, en el que dicho medio de montaje contiene, como el o los solvente(s) orgáni- co(s), el mismo solvente orgánico aprótico o la misma mezcla de solventes orgánicos apróticos como se usa en la fase d).
12. Uso según la reivindicación 10 ó 11, en el que la muestra es una muestra biológica, tal como una muestra de sangre, tejido, células u otra muestra biológica o material.
13. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 10-12, en el que la muestra ha sido teñida.
14. Portaobjeto de microscopía de una muestra a investigar, obtenible por el uso de cualquiera de las reivindicaciones 10-13.
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