USO DE AIMP2DX2 PARA EL DIAGNÓSTICO Y TRATAMIENTO DEL CÁNCER.

Uso de AIMP2DX2 para el diagnóstico y tratamiento del cáncer Campo de la invención La presente invención se refiere a una variante de AIMP2 que carece de exón 2, denominada como AIMP2DX2, que se expresa específicamente en las células cancerosas y su uso para el diagnóstico y tratamiento del cáncer. Descripción de la técnica relacionada La tasa de mortalidad debida al cáncer continúa creciendo en el mundo. A pesar de los estudios colectivos acerca del cáncer es una de las principales causas de mortalidad en todo el mundo. Se necesita un procedimiento capaz de diagnosticar cáncer en forma simple y rápida para aumentar los efectos de los procedimientos de tratamiento tales como cirugía, radioterapia, quimioterapia o terapia convencional. Se requiere el desarrollo de marcadores específicos para determinados cánceres a fin de diagnosticar cáncer así como también aplicar una terapia efectiva para el cáncer específico. La terapia citotóxica se ha usado ampliamente para tratar los cánceres durante los últimos 50 años tras haber sido usada en primer lugar como un agente anticáncer. La terapia tiene efectos secundarios serios, por ejemplo, ya que actúa en forma inespecífica en las células de otro órgano que tiene una velocidad de división celular rápida en comparación con las células cancerosas, lo que produce fuerte toxicidad. Para superar los efectos secundarios y la tolerancia de tales agentes anticáncer conocidos, se han realizado varios estudios para desarrollar medicamentos anticáncer que se activen específicamente en las células tumorales con el marcador específico de cáncer que se forma en la tumorigénesis de la célula normal al cáncer. En muy importante hallar genes específicos para las células cancerosas en la terapia dirigida al cáncer que se representa como un procedimiento para minimizar la toxicidad del agente anticáncer. En tales circunstancias, los presentes inventores han realizado una investigación intensiva para desarrollar una nueva especie molecular específica del cáncer y como resultado, descubrieron que una variante de AIMP2 que carece del exón 2, AIMP2DX2 se expresa específicamente en las células cancerosas y se puede usar como un marcador para diagnosticar cáncer que proporciona resultados más confiables. Además, los presentes inventores han descubierto que el anticuerpo específico para la proteína de AIMP2DX2, o ARNsi y oligonucleótido antisentido específico para el ARNm de AIMP2DX2 se puede aplicar para un procedimiento de tratamiento específico para las células cancerosas. Descripción de la invención En un primer aspecto, la presente invención proporciona una proteína de AIMP2DX2 que comprende (a) una secuencia de aminoácidos de AIMP2 en la que está suprimida la región del exón 2 de la secuencia de aminoácidos de AIMP2, en la que AIMP2 tiene la secuencia: o (b) la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:2. En un segundo aspecto, la presente invención proporciona una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica la proteína de AIMP2DX2 del primer aspecto. La molécula de ácido nucleico puede comprender la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO:1. En un tercer aspecto, la presente invención proporciona un vector recombinante, que comprende una molécula de ácido nucleico del segundo aspecto. En un cuarto aspecto, la presente invención proporciona una célula huésped que se transforma con el vector recombinante del tercer aspecto, en el que la célula es una célula no humana o es una célula humana aislada que no es una célula madre embrionaria humana. En un quinto aspecto, la presente invención proporciona un procedimiento para producir la proteína de AIMP2DX2 2   del primer aspecto, que comprende cultivar la célula del cuarto aspecto. En un sexto aspecto, la presente invención proporciona un anticuerpo específico para la proteína de AIMP2DX2 del primer aspecto. En un séptimo aspecto, la presente invención proporciona un kit diagnóstico para cáncer, que comprende un anticuerpo del sexto aspecto. En un octavo aspecto, la presente invención proporciona un procedimiento para seleccionar la proteína de AIMP2DX2 como un marcador de cáncer, que comprende las etapas de: (a) proporcionar una muestra para analizar; y (b) detectar en dicha expresión de la muestra de una molécula de ácido nucleico del segundo aspecto, en la que la detección de la expresión de la molécula de ácido nucleico es indicativa de cáncer. La detección en la etapa (b) se puede llevar a cabo por el contacto de dicha muestra con un anticuerpo del sexto aspecto. En forma alternativa, la detección en la etapa (b) se puede llevar a cabo por una reacción de amplificación o una reacción de hibridación. La reacción de amplificación se puede llevar a cabo por RT-PCR (reacción en cadena de polimerasa transcripción inversa) mediante un cebador capaz de diferenciar un ARNm de AIMP2DX2 del primer aspecto de un ARNm de AIMP2. La reacción de hibridación se puede llevar a cabo por medio de una sonda capaz de diferenciar un ARNm del AIMP2DX2 del primer aspecto a partir de un ARNm de AIMP2, en el que AIMP2 tiene la secuencia: La secuencia del cebador puede comprender las SEQ ID Nos.5 y 6, 7 y 8 o 16 y 6. La secuencia de la sonda puede comprender las SEQ ID No. 8 o 16. En un noveno aspecto, la presente invención proporciona una molécula de ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID No.3. 4, 5, 6, 7, 8 o 16. En un décimo aspecto, la presente invención proporciona una molécula de ácido nucleico de ARNsi específica para el ARNm de la proteína de AIMP2DX2 del primer aspecto, en el que dicha molécula de ácido nucleico de los ARNsi comprende ARN sentido y antisentido que codifica la secuencia de nucleótidos de las SEQ ID Nos. 9 y 10, SEQ ID Nos. 11 y 12 o SEQ ID Nos. 13 y 14. En un undécimo aspecto, la presente invención proporciona un oligonucleótido antisentido que es complementario con una región de unión entre los exones 1 y 3 de un ARNm de la proteína de AIMP2DX2 del primer aspecto. En un duodécimo aspecto, la presente invención proporciona una composición farmacéutica para tratar cáncer que comprende la molécula de ácido nucleico de ARNsi del décimo aspecto, o el oligonucleótido antisentido del undécimo aspecto. En un decimotercero aspecto, la presente invención proporciona la molécula de ácido nucleico de los ARNsi del décimo aspecto, o el oligonucleótido antisentido del undécimo aspecto para su uso en el tratamiento del cáncer. En un decimocuarto aspecto, la presente invención proporciona el uso de la molécula de ácido nucleico de ARNsi del décimo aspecto, o el oligonucleótido antisentido del undécimo aspecto en la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer. En un decimoquinto aspecto la presente invención proporciona un procedimiento para seleccionar un agente anticáncer que inhibe la formación de un heterodímero entre la proteína de AIMP2DX2 del primer aspecto y la proteína de AIMP2, que comprende las etapas de: (a) poner en contacto una sustancia de ensayo con una composición que comprende la proteína de AIMP2DX2 del primer aspecto y la proteína de AIMP2; y 3   (b) determinar si la sustancia de ensayo inhibe la formación de heterodímero entre la proteína de AIMP2DX2 del primer aspecto y la proteína de AIMP2, en el que la sustancia de ensayo para inhibir la formación de heterodímero entre la proteína de AIMP2DX2 del primer aspecto y la proteína de AIMP2 se evalúa como un agente anticáncer, y en el que AIMP2 tiene la secuencia: El procedimiento se puede realizar por un ensayo doble híbrido en levadura o ensayo de interacción in vitro. En un decimosexto aspecto, la presente invención proporciona un procedimiento de seleccionar un agente anticáncer que inhibe la expresión del gen que codifica la proteína de AIMP2DX2 del primer aspecto, o promueve la alteración de la proteína de AIMP2DX2 del primer aspecto, que comprende las etapas de: (a) poner en contacto una sustancia de ensayo con las células que expresan el gen de AIMP2DX2; y (b) determinar si la sustancia de ensayo inhibe la expresión del gen AIMP2DX2 o promueve la alteración de la proteína de AIMP2DX2, en el que la sustancia de ensayo para inhibir la expresión del gen de AIMP2DX2 se evalúa como un agente anticáncer. El procedimiento se puede realizar por RT-PCR o transferencia Western. Breve descripción de los dibujos Las Figs. 1a-1e representan la importancia funcional del AIM2 en la señalización del TGF-ß y su interacción con Smad2/3. AIMP2 +/+ y AIMP2/-MEF se compararon en el efecto de TGF-ß sobre la proliferación celular (Fig. 1a), formación de colonia (Fig. 1b), progresión del ciclo celular (Fig. 1c), y translocación nuclear de Smad2 y Smad3 (Fig. 1d). En la Fig. 1a, las células se incubaron con las concentraciones... [Seguir leyendo]

(a) una secuencia de aminoácidos de AIMP2 en que se suprime la región del exón 2 de la secuencia de aminoácidos de AIMP2, en la que AIMP2 tiene la secuencia: o   (b) la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NOs: 2. 2. Una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica la proteína de AIMP2DX2 según la reivindicación 1. 3. La molécula de ácido nucleico según la reivindicación 2, en la que dicha molécula de ácido nucleico comprende la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO:1. 4. Un vector recombinante, que comprende una molécula de ácido nucleico según la reivindicación 2 o reivindicación 3. 5. Una célula huésped que está transformada con el vector recombinante según la reivindicación 4, en la que la célula es una célula no humana o es una célula humana aislada que no es una célula madre embrionaria humana. 6. Un procedimiento para producir la proteína de AIMP2DX2 según la reivindicación 1, que comprende cultivar la célula según la reivindicación 5. 7. Un anticuerpo específico para la proteína de ATMP2DX2 según la reivindicación 1. 8. Un kit diagnóstico para cáncer, que comprende un anticuerpo según la reivindicación 7. 9. Un procedimiento para seleccionar la proteína de AIMP2DX2 como un marcador de cáncer, que comprende las etapas de: (a) proporcionar una muestra por ensayar; y (b) detectar en dicha muestra la expresión de una molécula de ácido nucleico según la reivindicación 2 o reivindicación 3, en el que la detección de la expresión de la molécula de ácido nucleico es indicativa de cáncer. 10. El procedimiento según la reivindicación 9, en el que dicha detección en la etapa (b) se lleva a cabo poniendo en contacto dicha muestra con un anticuerpo según la reivindicación 7. 11. El procedimiento según la reivindicación 9, en el que dicha detección en la etapa (b) se lleva a cabo por una reacción de amplificación o una reacción de hibridación. 12. El procedimiento según la reivindicación 11, en el que dicha reacción de amplificación se lleva a cabo por RT- PCR (reacción en cadena de polimerasa-transcripción inversa) usando un cebador capaz de diferenciar un ARNm de AIMP2DX2 según la reivindicación 1 de un ARNm de AIMP2 o dicha reacción de hibridación se lleva a cabo por uso de una sonda capaz de diferenciar un ARNm de AIMP2DX2 según la reivindicación 1 de un ARNm de AIMP2, en el que AIMP2 tiene la secuencia: 29   13. El procedimiento según la reivindicación 12, en el que la secuencia de dicho cebador comprende las SEQ ID Nos.5 y 6, 7 y 8 o 16 y 6; o la secuencia de dicha sonda comprende las SEQ ID No. 8 o 16. 14. Una molécula de ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID No.3, 4, 5, 6, 7, 8 o 16. 15. Una molécula de ácido nucleico de ARNsi específica para el ARNm de la proteína de AIMP2DX2 según la reivindicación 1, en la que dicha molécula de ácido nucleico de ARNsi comprende ARN sentido y antisentido que codifica la secuencia de nucleótidos de las SEQ ID Nos. 9 y 10, SEQ ID Nos. 11 y 12 o SEQ ID Nos. 13 y 14. 16. Un oligonucleótido antisentido que es complementario con una región de unión entre los exones 1 y 3 de un ARNm de la proteína de AIMP2DX2 según la reivindicación 1. 17. Una composición farmacéutica para tratar cáncer que comprende la molécula de ácido nucleico de los ARNsi según la reivindicación 15, o el oligonucleótido antisentido según la reivindicación 16. 18. La molécula de ácido nucleico de los ARNsi según la reivindicación 15, o el oligonucleótido antisentido según la reivindicación 16 para su uso en el tratamiento del cáncer. 19. El uso de la molécula de ácido nucleico de ARNsi según la reivindicación 15, o el oligonucleótido antisentido según la reivindicación 16 en la fabricación de un medicamento para tratar cáncer. 20. Un procedimiento de selección para un agente anticáncer que inhibe la formación de un heterodímero entre la proteína de AIMP2DX2 según la reivindicación 1 y la proteína de AIMP2, que comprende las etapas de: (a) poner en contacto una sustancia de ensayo con una composición que comprende la proteína de AIMP2DX2 según la reivindicación 1 y la proteína de AIMP2; y (b) determinar si la sustancia de ensayo inhibe la formación del heterodímero entre la proteína de AIMP2DX2 según la reivindicación 1 y la proteína de AIMP2, en el que la sustancia de ensayo para inhibir la formación del heterodímero entre la proteína de AIMP2DX2 según la reivindicación 1 y la proteína de AIMP2 se evalúa como un agente anticáncer, y en el que AIMP2 tiene la secuencia: 21. El procedimiento según la reivindicación 20, en el que el procedimiento se realiza por un ensayo de doble híbrido en levadura o ensayo de interacción in vitro. 22. Un procedimiento de selección para un agente anticáncer que inhibe la expresión del gen que codifica la proteína de AIMP2DX2 según la reivindicación 1, o promueve la alteración de la proteína de AIMP2DX2 según la   reivindicación 1, que comprende las etapas de: (a) poner en contacto una sustancia de ensayo con las células que expresan el gen AIMP2DX2; y (b) determinar si la sustancia de ensayo inhibe la expresión del gen AIMP2DX2 o promueve la alteración de la proteína de AIMP2DX2, en el que la sustancia de ensayo para inhibir la expresión del gen de AIMP2DX2 se evalúa como un agente anticáncer. 23. El procedimiento según la reivindicación 22, en el que el procedimiento se realiza por RT-PCR o transferencia Western. 31   32   33   34     36   37   38   39     41   42   43   44     46   47   48   49     51   52   53   54     56   57   58