Uso de una pirimetamina o un análogo funcional de la misma para la fabricación de un medicamento para prevenir el desarrollo de síntomas,

o mejorar los síntomas o progresión de esclerosis lateral amiotrófica (ELA) mediada por SOD-1

Tratamiento de esclerosis lateral amiotrófica con pirimetamina y análogos.

Antecedentes de la invención

La esclerosis lateral amiotrófica (ELA) es la enfermedad progresiva de las neuronas motoras más habitualmente diagnosticada. La enfermedad se caracteriza por degeneración de neuronas motoras en la corteza, tronco encefálico y médula espinal (Principles of Internal Medicine, 1991 McGraw-Hill, Inc., New York; Tandan et al. (1985) Ann. Neurol, 18:271-280, 419-431). La causa de la enfermedad es desconocida, y la ELA sólo se puede diagnosticar cuando el paciente comienza a experimentar debilidad asimétrica de las extremidades y fatiga, fasciculación localizada en las extremidades superiores, y/o espasticidad en las piernas, que tipifica el comienzo. Hay un componente genético para al menos algunas incidencias de ELA.

En casi todos los casos, la ELA esporádica y la ELA familiar (ELAF) dominante autosómica son clínicamente similares (Mulder et al. (1986) Neurology, 36:511-517). Se ha demostrado que en algunos árboles genealógicos de ELAF, pero no en todos, la enfermedad está ligada a un defecto genético en el cromosoma 21q (Siddique et al., (1991) New Engl. J. Med., 324:1381-1384).

En particular, parece que las mutaciones en el gen de SOD-1 que está localizado en el cromosoma 21q están asociadas con la forma familiar de ELA. Los efectos perjudiciales de diversas mutaciones en SOD-1 están mediados muy probablemente a través de una ganancia de función tóxica, en lugar de una pérdida de actividad de SOD-1 (Al-Chalabi Y Leigh, (2000) Curr. Opin. Neurol., 13, 397-405; Alisky et al. (2000) Hum. Gene Ther., 11, 2315-2329). Aunque la toxicidad no está clara, existen pruebas que sugieren que la eliminación de la propia proteína mejorará la toxicidad.

Existe la necesidad de desarrollar terapias que puedan alterar el curso de enfermedades neurodegenerativas o prolongar el tiempo de supervivencia de pacientes con tales enfermedades. En particular, existe la necesidad de reducir la proteína SOD-1 producida en el cerebro y en la médula espinal de los pacientes con ELA. La prevención de la formación de la proteína SOD-1 de tipo salvaje o mutante puede detener la progresión de la enfermedad, y puede permitir la mejora de los síntomas de ELA.

El documento EP 1.473.289 describe análogos de pirimetamina para tratar la enfermedad de Alzheimer.

Sumario de la invención

Se describen usos para interferir con la síntesis proteica en el cerebro, médula espinal, meninges y células musculares, administrando una pirimetamina o un análogo funcional de la misma. En particular, se describe una pirimetamina o un análogo funcional de la misma para uso en la disminución de la expresión del gen de SOD-1.

El uso de la invención se puede usar para reducir o inhibir la expresión de una proteína asociada con esclerosis lateral amiotrófica mediada por SOD-1, que es SOD-1. El uso de pirimetamina o un análogo funcional de la misma inhibe la transcripción de ARNm de SOD-1 o la estabilidad del transcrito. Las disminuciones en ARNm de SOD-1 pueden conducir entonces a niveles reducidos de proteína SOD-1, que reduce su acumulación en la célula y mejora la enfermedad. La expresión y acumulación de SOD-1 mutante es un mecanismo patofisiológico ampliamente aceptado que subyace a ELA familiar, y también puede desempeñar un papel en la forma esporádica de la enfermedad.

En consecuencia, la invención se refiere al uso de una pirimetamina o análogo funcional de la misma para la fabricación de un medicamento para prevenir el desarrollo de síntomas, o mejorar los síntomas o progresión de esclerosis lateral amiotrófica (ELA) mediada por SOD-1. La célula que es la diana de dicho uso puede ser una célula neuronal, o cualquier célula en la médula espinal, el tejido meníngeo, o una célula muscular, por ejemplo en un sujeto con ELA (por ejemplo, ELA familiar). Los ejemplos de células incluyen, pero no se limitan a, neuronas, interneuronas, gliocitos, microgliocitos, células musculares, células implicadas en la respuesta inmunitaria.

La invención se refiere además a una pirimetamina o un análogo funcional de la misma para uso en un método para prevenir el desarrollo de síntomas, o mejorar los síntomas o progresión de esclerosis lateral amiotrófica (ELA) mediada por SOD-1.

En una realización, se usa pirimetamina o análogos funcionales de la misma. En otra realización, se usa pirimetamina con al menos una modificación en el anillo bencénico. Todavía en otra realización, se usa pirimetamina con al menos una modificación en el anillo de pirimidina.

La inhibición de la transcripción del gen comprende monitorizar midiendo los niveles de expresión de la proteína SOD-1. Como alternativa, la inhibición de la transcripción del gen comprende monitorizar los niveles de una molécula de ácido nucleico que codifica la proteína SOD-1, por ejemplo monitorizando los niveles de ácido ribonucleico o de ácido desoxirribonucleico.

La mejora de los síntomas se puede monitorizar midiendo la prolongación de la supervivencia del individuo, por ejemplo monitorizando una puntuación neurológica del individuo. Como alternativa, la mejora se puede determinar monitorizando los niveles de expresión de la proteína SOD-1 o los niveles de una molécula de ácido nucleico que codifica la proteína SOD-1.

Breve descripción de los dibujos

La Fig. 1 es una gráfica que muestra la reducción de la expresión de la proteína SOD-1 por pirimetamina.

La Fig. 2 es una gráfica de barras que muestra la expresión reducida de ARNm de SOD-1 con pirimetamina y noretindrona.

La Fig. 3 es un esquema que muestra análogos funcionales de pirimetamina representativos de la invención.

La Fig. 4 es una gráfica de barras que muestra la expresión reducida de ARNm para alfa-sinucleína en células HeLa tras el tratamiento con pirimetamina y noretindrona.

La Fig. 5 es una gráfica de barras que muestra la reducción de la expresión de la proteína SOD-1 en ratones SOD-93A machos y hembras con tratamiento crónico con pirimetamina (TX).

La Fig. 6 es una gráfica de barras que muestra la disminución en la expresión de alfa-sinucleína en linfocitos de ratón con tratamiento crónico con pirimetamina.

La Fig. 7 es una gráfica de barras que muestra la expresión disminuida de SOD-1 espinal en ratones SOD-93A tras la administración oral de pirimetamina.

La Fig. 8 es una gráfica de barras que muestra una disminución en los niveles de SOD-1 de linfocitos en un paciente con ELA familiar después de 30 días de administración oral de pirimetamina.

Descripción detallada

La práctica de la presente invención emplea, excepto que se indique de otro modo, métodos convencionales de microbiología, biología molecular y técnicas de ADN recombinante dentro de la pericia de la técnica. Tales técnicas se explican de forma más completa en la bibliografía. (Véanse, por ejemplo, Sambrook, et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Edición Actual); DNA Cloning: A Practical Approach, Vol. I & II (D. Glover, ed.); Oligonucleotide Synthesis (N. Gait, ed., Edición Actual); Nucleic Acid Hybridization (B. Names & S. Higgins, eds., Edición Actual); Transcription and Translation (B. Names & S. Higgins, eds., Edición Actual); CRC Handbook of Parvoviruses, vol. I & II (P. Tijessen, ed.); Fundamental Virology, 2ª Edición, Vol. I & II (B. N. Fields y D. M Knipe, eds.)).

De forma que la invención se entienda más claramente, se definen los siguientes términos:

La expresión "trastorno neurodegenerativo" o "enfermedad neurodegenerativa" se usa de forma intercambiable aquí, y se refiere a una alteración o ausencia de una función neurológica normal, o a la presencia de una función neurológica anormal en un individuo, o grupo de individuos. Por ejemplo, los trastornos neurológicos pueden ser el resultado de enfermedad, lesión, y/o envejecimiento. Como se usa aquí, trastorno neurodegenerativo también incluye una degeneración que provoca anormalidad morfológica y/o funcional de una célula neuronal o una población de células neuronales. Los ejemplos no limitantes de anormalidades morfológicas y funcionales incluyen deterioro físico y/o muerte de células neuronales, patrones anormales de crecimiento de células neuronales, anormalidades en la conexión física entre células neuronales, sub- o sobreproducción de una sustancia o sustancias,...

1. Uso de una pirimetamina o un análogo funcional de la misma para la fabricación de un medicamento para prevenir el desarrollo de síntomas, o mejorar los síntomas o progresión de esclerosis lateral amiotrófica (ELA) mediada por SOD-1.

2. El uso de la reivindicación 1, en el que el análogo funcional es pirimetamina con al menos una modificación en el anillo bencénico.

3. El uso de la reivindicación 1, en el que el análogo funcional es pirimetamina con al menos una modificación en el anillo de pirimidina.

4. Una pirimetamina o un análogo funcional de la misma para uso en un método para prevenir el desarrollo de síntomas, o mejorar los síntomas o progresión de esclerosis lateral amiotrófica (ELA) mediada por SOD-1.

5. Una pirimetamina o un análogo funcional de la misma para uso según la reivindicación 4, en la que el análogo funcional es pirimetamina con al menos una modificación en el anillo bencénico.

6. Una pirimetamina o un análogo funcional de la misma para uso según la reivindicación 1, en la que el análogo funcional es pirimetamina con al menos una modificación en el anillo de pirimidina.