Un péptido que comprende una secuencia de aminoácidos que es:

a) parte de la secuencia de aminoácidos de la proteína CDK4;

o

b) homóloga parte de la secuencia de aminoácidos de la proteína CDK4;~

siendo dicho péptido citotóxico para, y/o inhibidor del crecimiento de una célula cancerosa y/o estimulante delcrecimiento de una célula no cancerosa; y

en el que el péptido, es lineal o cíclico y consta de:

- n secuencias de aminoácidos que tienen la fórmula general [(YRGXRY) V], donde R es arginina, G esglicina, Y puede estar presente o ausente y al menos una Y está presente, X e Y son independientementeprolina o treonina y al menos uno de X y/o Y es prolina, V es valina y puede estar presente o ausente y n esun número entero de 1-10;

- y m secuencias de aminoácidos adicionales, teniendo cada secuencia adicional independientemente zaminoácidos, donde m es 0,1 ó 2 y z es un número entero de 1-20

y

siendo dicho péptido para su uso en el tratamiento del cáncer, y en el que dicho péptido es más citotóxico para, omás inhibidor del crecimiento de una célula cancerosa que para una célula no cancerosa.

Tratamiento del cáncer

5 Campo de la invención

La presente invención se refiere a péptidos que son citotóxico para, y/o que inhiben el crecimiento de, una célula cancerosa y/o que estimulan el crecimiento de una célula no cancerosa. La presente invención también se refiere a usos médicos de dichos péptidos.

Antecedentes de la invención

Aunque la quimioterapia ha sido responsable de curar a mucha gente con cáncer, sigue habiendo una gran cantidad de pacientes cuyos tumores muestran poca respuesta al tratamiento, o solamente responden inicialmente para

reaparecer posteriormente. Para estos pacientes, los tratamientos actuales son claramente inadecuados.

Se cree que ciertos tumores son insensibles a quimioterapia convencional porque las células de estos tumores tienen un patrón de expresión génica que los vuelve insensibles a agentes quimioterapéuticos. Asimismo, se cree que esos tumores a menudo responden inicialmente a la quimioterapia, pero que posteriormente llegan a ser resistentes porque las células del tumor muestran heterogenicidad tumoral e inestabilidad genética. La heterogenicidad tumoral describe la situación en la que diferentes células en el tumor tienen diferentes patrones de expresión génica con algunas células que son resistentes a un agente quimioterapéutico, mientras que otras células son sensibles al agente. El tratamiento de dicho tumor con este agente quimioterapéutico, por lo tanto, elimina las células sensibles, provocando la reducción del tumor, pero no logra eliminar las células resistentes, que continúan

dividiéndose para producir un cáncer que es completamente resistente al fármaco.

Además, la mayoría de los agentes quimioterapéuticos convencionales desarrollados hasta ahora inhiben el crecimiento de células normales importantes, por ejemplo: a) la inhibición quimioterapéutica de las células progenitoras del sistema hematopoyético provocando una caída en los glóbulos rojos, los glóbulos blancos y las plaquetas causando anemia, susceptibilidad a infecciones y hemorragia espontánea, b) la inhibición del remplazo de células normales en el intestino causando diarrea o c) la inhibición del remplazo de células escamosas que revisten la boca, la nariz y la garganta, etc.

La inestabilidad genérica se halla en la mayoría de los cánceres. Provoca que las células tumorales adquieran

nuevas mutaciones. Ciertas de estas mutaciones pueden conferir resistencia a fármacos a las células en que suceden. Estas células resistentes a fármacos sobreviven a la quimioterapia y se dividen para producir un cáncer que es resistente a fármacos.

Por tanto existe la necesidad de agentes anticáncer que sean eficaces contra todas las células cancerosas, que no se vean afectados por la heterogenicidad tumoral y la inestabilidad genética y que no inhiban el crecimiento de células normales (no cancerosas) o que puedan incluso promover el crecimiento de células normales no cancerosas.

El documento WO 03/081239 identifica productos génicos, llamados productos génicos normales críticos, que son necesarios para la supervivencia y proliferación de las células cancerosas. Como los productos génicos normales

45 críticos son necesarios para la supervivencia y proliferación de las células cancerosas, deben estar presentes y funcionar en cada célula tumoral y por lo tanto proporcionan una diana constante para fármacos anticáncer que no estén afectados por la heterogenicidad tumoral y la inestabilidad genética. El documento WO 03/081239 muestra que los agentes que alteran los productos génicos normales críticos proporcionan agentes anticáncer eficaces. Aunque se describieron métodos genéricos para alterar los productos génicos normales críticos, el documento WO 03/081239 no describió ningún agente que pudiera tratar el cáncer de forma satisfactoria.

Los productos génicos normales críticos también deberían, por definición, no alterar la función de las células normales. Por tanto, la quimioterapia convencional en los centros de salud es no selectiva y por tanto daña consecuentemente las células normales no cancerosas y es solamente eficaz contra células cancerosas no

55 resistentes.

Un agente anticáncer ideal inhibiría el crecimiento de la mayoría, sino todos, los tipos de crecimiento de células cancerosas pero no tendría efectos sobre, o incluso estimularía, el crecimiento de célula normales no cancerosas.

El documento WO 03/081239 identificó la proteína CDK4 como un producto génico normal crítico que está presente en la mayoría (sino todos) de los cánceres.

Se sabe que la proteína CDK4 regula la entrada en fase S del ciclo celular iniciando los acontecimientos necesarios para que la célula entre en fase S. Más particularmente, CDK4 activada fosforila pRb y las proteínas relacionadas 65 p107 y p130. En su estado hipofosforilado estas proteínas se unen a factores de transcripción E2F. Sin embargo, después de la fosforilación, los factores de transcripción E2F se liberan en forma de heterodímeros con las proteínas

DP-1/DP-2. Los heterodímeros E2F/DP entonces se unen al ADN y activan los factores necesarios para la síntesis del ADN (una actividad que tiene lugar durante la fase S) . Además, la proteína E2F libre regula positivamente los genes que controlan la división celular tales como ciclina E, ciclina A, CDK1 y los E2F, progresando de este modo el ciclo celular.

La proteína CDK4 se activa solamente cuando las condiciones para la entrada en fase S son adecuadas y se ha demostrado que las vías de transducción de señales positivas que dependen de señales provenientes de receptores de superficie celular tales como la vía Ras/Raf/Erk afectan a la activación de CDK4. La proteína CDK4 se activa por fosforilación de la treonina 164 pero se inhibe por la fosforilación de la tirosina 17.

Para posibilitar que realice su tarea, se sabe que la proteína CDK4 tiene muchas funciones incluyendo la unión a ciclina D1, la fosforilación de pRb, la unión a inhibidores de CDK tales como p21, p27, p16, la unión a la quinasa activadora de ciclina y la interacción con las enzimas responsables de la fosforilación y desfosforilación de la tirosina

17.

A causa de su papel en la promoción de la división celular, varios estudios han investigado el papel de la proteína CDK4 en el cáncer.

Ratones knockout que carecen de la proteína CDK4 no desarrollan cáncer después de inducción con un sistema clásico de iniciador (DMBA) seguido de promotor (TBA, es decir, éster de forbol) (Robles et al. (1998) Genes Dev.

12: 2469; Rodriguez-Puebla et al. (2002) Am. J. Path. 161: 405) . Ningún otro knockout (incluyendo un knockout para ciclina D) tiene dicho marcado efecto sobre el desarrollo de cáncer.

Sin embargo, la proteína CDK4 típicamente se sobre-expresa en células cancerosas. Además, ratones transgénicos

que sobre-expresan la proteína CDK4 se inducen más fácilmente a desarrollar cáncer usando el sistema de inducción de carcinogénesis mencionado anteriormente (Robles et al. (1998) Genes Dev. 12: 2469; Rodriguez-Puebla et al. (2002) Am. J. Path. 161: 405) .

Además, se ha demostrado que la transfección de CDK4 normal causa una prolongación de la vida útil proliferativa en fibroblastos humanos normales (Morris et al. (2002) Oncogene 21, 4277) . En vista de la importancia aparente de la proteína CDK4 en el cáncer, se ha propuesto que sea una diana anticáncer. Sin embargo, los fármacos que inhiben la actividad quinasa de CDK4 (tal como flavopiridol) tienen muy poco efecto clínico en estudios en fase II.

El documento WO00/26228 describe la proteína BBC3 que comprende el motivo PRGPRP. La proteína es capaz de 35 modular la apoptosis en células.

Sumario de la invención

La presente invención proporciona un péptido que comprende una secuencia de aminoácidos que es:

a) parte de la secuencia de aminoácidos de la proteína CDK4; o b) homóloga a parte de la secuencia de aminoácidos de la proteína CDK4;

siendo dicho péptido citotóxico para, y/o inhibidor del crecimiento de una célula cancerosa y/o estimulador del 45 crecimiento de una célula no cancerosa; y donde el péptido es lineal o cíclico y consta de:... [Seguir leyendo]

1. Un péptido que comprende una secuencia de aminoácidos que es:

a) parte de la secuencia de aminoácidos de la proteína CDK4; o b) homóloga parte de la secuencia de aminoácidos de la proteína CDK4;

siendo dicho péptido citotóxico para, y/o inhibidor del crecimiento de una célula cancerosa y/o estimulante del crecimiento de una célula no cancerosa; y en el que el péptido, es lineal o cíclico y consta de:

- n secuencias de aminoácidos que tienen la fórmula general [ (YRGXRY) V], donde R es arginina, G es glicina, Y puede estar presente o ausente y al menos una Y está presente, X e Y son independientemente prolina o treonina y al menos uno de X y/o Y es prolina, V es valina y puede estar presente o ausente y n es

un número entero de 1-10; -y m secuencias de aminoácidos adicionales, teniendo cada secuencia adicional independientemente z aminoácidos, donde m es 0, 1 ó 2 y z es un número entero de 1-20

y siendo dicho péptido para su uso en el tratamiento del cáncer, y en el que dicho péptido es más citotóxico para, o más inhibidor del crecimiento de una célula cancerosa que para una célula no cancerosa.

2. Un péptido de acuerdo con la reivindicación 1 para su uso use de acuerdo con la reivindicación 7, en el que n es

un número entero seleccionado entre 2, 3, 4 ó 5. 25

3. Un péptido de acuerdo con la reivindicación 2 para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que n es 3.

4. Un péptido de acuerdo con la reivindicación 3 para su uso de acuerdo con que comprende la secuencia de aminoácidos PRGPRPVPRGPRPVPRGPRPV.

5. Un péptido de acuerdo con cualquier reivindicación precedente para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho péptido es cíclico.

6. Un péptido de acuerdo con cualquier reivindicación precedente para su uso de acuerdo con la reivindicación 1,

que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEC ID Nº 1, o la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEC ID Nº 2.

7. Un péptido de acuerdo con cualquier reivindicación precedente para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, que consta de la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEC ID Nº 1 o la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEC ID Nº 2.

8. Un péptido que es lineal y consta de:

- n secuencias de aminoácidos que tienen la fórmula general [ (YRGXRY) V], donde R es arginina, G es

45 glicina, Y puede estar presente o ausente y al menos una Y está presente, X e Y son independientemente prolina o treonina y al menos uno de X y/o Y es prolina, V es valina y puede estar presente o ausente y n es un número entero seleccionado entre 2, 3, 4 ó 5; -y m secuencias de aminoácidos adicionales, teniendo cada secuencia adicional independientemente z aminoácidos, donde m es un número entero de 0-10 y z es un número entero de 1-20.

9. Un péptido que es cíclico y consta de:

- n secuencias de aminoácidos que tienen la fórmula general