TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES POR DEPOSICIÓN DE IgA1.

IgA1 proteasa para su utilización en el tratamiento de una enfermedad caracterizada por la deposición de IgA1 en un paciente

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2004/006615.

Solicitante: NEW ENGLAND MEDICAL CENTER HOSPITALS, INC.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 750 WASHINGTON STREET BOSTON, MA 02111 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: PLAUT, ANDREW, G., QIU,Jiazhou.

Fecha de Publicación: .

Fecha Solicitud PCT: 5 de Marzo de 2004.

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12N9/52 QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 9/00 Enzimas, p. ej. ligasas (6.); Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas. › que provienen de bacterias.

Clasificación PCT:

  • C12N9/64 C12N 9/00 […] › que provienen de tejido animal, p. ej. renina.

Clasificación antigua:

  • A61K6/00 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE.A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › Preparaciones para técnica dental.

Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Eslovenia, Finlandia, Rumania, Chipre, Lituania, Letonia, Ex República Yugoslava de Macedonia, Albania.

PDF original: ES-2360291_T3.pdf

 


Fragmento de la descripción:

Apoyo gubernamental

La invención fue financiada, en parte o en su totalidad, mediante una subvención NIH RO1 DE 09677 de NIH, NIDCR. El gobierno estadounidense tiene determinados derechos sobre la invención.

Antecedentes

La deposición de inmunoglobulina A1 (IgA1) en tejidos y órganos humanos es una característica de muchas enfermedades humanas incluyendo la neuropatía por IgA, la dermatitis herpetiforme (DH) y la púrpura de Henoch-Schoenlein (HS). La deposición de IgA1 es responsable de una variedad de manifestaciones clínicas tales como insuficiencia renal, formación de ampollas cutáneas, exantema, artritis, hemorragia gastrointestinal y dolor abdominal.

Existen varias opciones de tratamiento disponibles para pacientes que presentan deposición anómala de IgA1. Éstas incluyen la administración de corticosteroides que presentan propiedades inmunosupresoras y antiinflamatorias, aportes complementarios de aceite de pescado en la dieta que reducen la inflación renal, e inhibidores de la enzima conversora de angiotensina que reducen el riesgo de enfermedad renal progresiva e insuficiencia renal. Dichos tratamientos no actúan directamente sobre los depósitos de IgA1 en tejido u órganos.

Para tratar este problema de la eliminación de depósitos de IgA1, se han sometido a prueba enzimas proteolíticas exógenas en modelos animales de deposición de IgA1 (Gesualdo L. et al, (1990) J. Clin. Invest. 86: 715-722 y Nakazawa M. et al. (1986) J. Exp. Med 164: 1973-1987). Las proteasas, quimopapaína y subtilisina, actúan mediante escisión proteolítica de los depósitos de IgA1 en el riñón, pero no son específicas para las moléculas de IgA1 y digerirán una variedad de otras proteínas.

Así, pese a los avances en el campo, existe una necesidad en la materia de agentes terapéuticos que puedan utilizarse para tratar las enfermedades por deposición de IgA1.

Sumario de la invención

La presente invención proporciona una IgA1 proteasa para su utilización en el tratamiento de una enfermedad caracterizada por la deposición de IgA1 en un paciente. En la presente memoria se da a conocer la utilización de IgA1 proteasa bacteriana para tratar la deposición de IgA1 en tejido y órganos. Las IgA1 proteasas bacterianas escinden específicamente las moléculas de IgA1 y proporcionan así un medio para escindir y eliminar específicamente las deposiciones de IgA1. Por consiguiente, se dan a conocer agentes terapéuticos para el tratamiento de enfermedades caracterizada por la deposición de IgA. En particular, se dan a conocer agentes terapéuticos para tratar la nefropatía por IgA, dermatitis herpetiforme (DH) y púrpura de Henoch-Schoenlein (HS).

En la presente memoria se da a conocer una molécula de ácido nucleico que codifica para una IgA1 proteasa que se fusiona a un marcador de aminoácido ubicado en sentido amino-terminal de un sitio de escisión autocatalítica de la IgA1 proteasa.

En un aspecto, el marcador, que se fusiona a las IgA1 proteasas, es un marcador que se une específicamente a un ligando de proteína, tal como un anticuerpo o péptido. El marcador puede ser c-Myc, HA, VSV-G, HSV, FLAG, V5, o HIS.

En un aspecto, se da a conocer una composición farmacéutica para el tratamiento de la deposición de IgA1 que comprende una IgA1 proteasa complejada con un anticuerpo, tal como un anticuerpo anti-IgA1 proteasa.

En otro aspecto, se da a conocer una composición farmacéutica para el tratamiento de la deposición de IgA1 que comprende una IgA1 proteasa marcada que está complejada con un ligando del marcador. El marcador fusionado a la IgA1 proteasa puede ser c-Myc, HA, VSV-G, HSV, FLAG, V5 o HIS. Por consiguiente, el ligando puede ser un anticuerpo antimarcador, tal como anti-FLAG, antimYC, anti-VSV, anti-HA o anti-V5. Alternativamente, el ligando puede ser un péptido o un ligando no peptídico, tal como una molécula quelante.

En otro aspecto, se da a conocer un procedimiento para el tratamiento de una enfermedad caracterizada por la deposición de IgA1. El procedimiento implica administrar a un paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de una IgA1 proteasa.

En un aspecto, el procedimiento para el tratamiento utiliza una IgA1 proteasa fusionada a un marcador complejada con un ligando del marcador, tal como un anticuerpo antimarcador. El marcador fusionado a la IgA1 proteasa puede ser c-Myc, Flag, HA, VSV-G, HSV, FLAG, V5 o HIS. Por lo tanto, el anticuerpo antimarcador puede ser anti-FLAG, antimYC, anti-VSV, anti-HA o anti-V5.

En otro aspecto, la enfermedad caracterizada por la deposición de IgA1 es nefropatía por IgA, dermatitis herpetiforme o púrpura de Henoch-Schoenlein.

Breve descripción de los dibujos

La figura 1 representa la región bisagra de IgA1 y los sitios de escisión para varias IgA1 proteasas dentro de la región bisagra (SEC ID nº: 1).

La figura 2a ilustra el precursor de IgA1 proteasa que se somete a escisión autocatalítica y libera una IgA1 proteasa madura soluble mediante la escisión autocatalítica.

La figura 2b representa una IgA1 proteasa en la que se ha fusionado una cola de His a la IgA1 proteasa de manera que la cola de His está dispuesta próxima al extremo carboxilo terminal de la IgA1 proteasa madura. La IgA1 proteasa soluble puede complejarse entonces con un anticuerpo anti-His para fines terapéuticos.

La figura 3 representa una representación esquemática de la proteína precursora de IgA1 proteasa de Haemophilus influenzae Rd y representa una secuencia de aminoácidos que está en sentido amino-terminal del sitio de escisión autocatalítica (sitio a), secuencia original (SEC ID nº: 2). La secuencia mutada (SEC ID nº: 3) representa dónde se ha fusionado una cola de His en marco a una IgA1 proteasa, 2 aminoácidos en sentido amino-terminal del sitio de escisión proteolítica. También se representan las secuencias de ácido nucleico correspondientes de la secuencia original (SEC ID nº: 25) y la secuencia mutada (SEC ID nº: 26).

La figura 4 representa los fragmentos de mutagénesis dirigida al sitio por PCR que se generaron para la inserción de una cola de HIS en la IgA1 proteasa de H. influenzae Rd mediante técnicas de ligamiento convencionales.

La figura 5 representa la secuencia de proteína de Haemophilus influenzae Rd (SEC ID nº: 4).

La figura 6 representa la secuencia de nucleótido de Haemophilus influenzae Rd (SEC ID nº: 5).

Descripción detallada

La presente invención se refiere a la utilización de inmunoglobulina A1 proteasas (IgA1 proteasas) bacterianas para tratar enfermedades que están caracterizadas por la deposición de IgA1.

Definiciones

Tal como se utiliza en la presente memoria, la expresión “IgA1 proteasa” se refiere a una enzima bacteriana que escinde específicamente moléculas de IgA1 humana. Mediante “escinde específicamente” se hace referencia a que la proteasa escinde en la región bisagra de moléculas de IgA1 humana y no escinde moléculas de IgA2 humana. Las IgA1 proteasas se expresan en bacterias Gram negativas y Gram positivas como un precursor monocatenario que atraviesa la membrana bacteriana. Las IgA1 proteasas de las bacterias Gram negativas se someten a escisión autocatalítica liberando una IgA1 proteasa madura soluble del extremo N-terminal.

Tal como se utiliza en la presente memoria, la expresión “ubicado en sentido amino-terminal” se refiere al parámetro espacial de un marcador en el que la secuencia de aminoácidos del marcador está ubicada por lo menos 2 aminoácidos, o 1, o ninguno, en sentido amino-terminal con respecto a, y hasta 50 aminoácidos en sentido aminoterminal con respecto a, el sitio de escisión autocatalítica de la IgA1 proteasa de manera que el marcador está ubicado de 2 ó 1, o ninguno, a 50 aminoácidos en sentido amino-terminal del extremo carboxilo-terminal de la IgA1 proteasa secretada, soluble.

Tal como se utiliza en la presente memoria, un “marcador” se refiere a una secuencia de polipéptido de 3 a 40 aminoácidos de longitud. Un marcador puede poseer una afinidad de unión específica por un péptido, ligando de proteína, o un ligando no peptídico. La afinidad de unión específica permite que la IgA1 proteasa a la que se fusiona se compleje con un ligando con el fin de que la IgA1 proteasa pueda detectarse, aislarse, aumentarse en una forma compleja, o utilizarse para fines terapéuticos. En la presente... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. IgA1 proteasa para su utilización en el tratamiento de una enfermedad caracterizada por la deposición de IgA1 en un paciente.

2. IgA1 proteasa según la reivindicación 1, en la que dicha enfermedad es la nefropatía por IgA.

3. IgA1 proteasa según la reivindicación 1, en la que dicha enfermedad es la dermatitis herpetiforme.

4. IgA1 proteasa según la reivindicación 1, en la que dicha enfermedad es la púrpura de Henoch-Schoenlein.

5. IgA1 proteasa según la reivindicación 1, en la que la IgA1 proteasa se fusiona a un marcador.

6. IgA1 proteasa según la reivindicación 5, en la que el marcador se selecciona de entre el grupo constituido por c-Myc, HA, VSV-G, HSV, FLAG, V5 y HIS.

7. IgA1 proteasa según la reivindicación 1, en la que la IgA1 proteasa se selecciona de entre el grupo constituido por IgA1 proteasa de Streptococcus pneumoniae, IgA1 proteasa de Streptococcus sanguis, IgA1 proteasa de Clostridium ramosum, IgA1 proteasa de Haemophilus influenzae, IgA1 proteasa de Neisseria meningitidis e IgA1 proteasa de Neisseria gonorrhoeae.

8. IgA1 proteasa según la reivindicación 7, en la que la IgA1 proteasa se selecciona de entre el grupo constituido por IgA1 proteasa de Streptococcus sanguis, IgA1 proteasa de Clostridium ramosum, IgA1 proteasa de Haemophilus influenzae e IgA1 proteasa de Neisseria gonorrhoeae.

9. IgA1 proteasa según la reivindicación 8, en la que la IgA1 proteasa es la IgA1 proteasa de Haemophilus influenzae.

10. IgA1 proteasa según la reivindicación 9, en la que la IgA1 proteasa de Haemophilus influenzae se selecciona de entre el grupo constituido por IgA1 proteasa de Haemophilus influenzae de tipo 1 e IgA1 proteasa de Haemophilus influenzae de tipo 2.

11. IgA1 proteasa según la reivindicación 8, en la que la IgA proteasa es la IgA1 proteasa de Neisseria meningitidis.

12. IgA1 proteasa según la reivindicación 11, en la que la IgA1 proteasa de Neisseria meningitidis se selecciona de entre el grupo constituido por IgA1 proteasa de Neisseria meningitidis de tipo 1 e IgA1 proteasa de Neisseria meningitidis de tipo 2.

13. IgA1 proteasa según la reivindicación 1, en la que la IgA1 proteasa escinde en la región bisagra de IgA1.

14. Utilización de una IgA1 proteasa para la preparación de un medicamento para su utilización en el tratamiento de nefropatía por IgA, dermatitis herpetiforme o púrpura de Henoch-Schoenlein.

 

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