TRANCRIPCION REVERSA A TEMPERATURA ELEVADA UTILIZANDO POLIMERASAS DE DNA MUTANTES.

Un método para la transcripción reversa y la amplifi- cación de un RNA en una reacción acoplada de transcripción reversa y amplificación en un único tubo,

con una sola en- zima, que comprende: (a) proporcionar una mezcla de reacción de transcrip- ción reversa que comprende dicho RNA, un cebador, Mg2+ y una polimerasa de DNA termoactiva mutante, en la que dicha po- limerasa de DNA mutante se caracteriza porque i) en su forma nativa, dicha polimerasa de DNA en su dominio polimerasa de DNA comprende una secuencia de aminoácidos que es la del ID de SEC Nº:1; ii) el aminoácido en la posición 2 de dicha se- cuencia de aminoácidos es S o A y el aminoácido en la posición 5 de dicha secuencia de aminoácidos es L o I; y iii) el aminoácido en la posición 4 de dicha se- cuencia de aminoácidos está mutado en relación con di- cha secuencia nativa a un aminoácido diferente de E, A, G o P; y (b) tratar dicha mezcla de reacción a una temperatura suficiente para que dicha polimerasa de DNA mutante inicie la síntesis de un producto de extensión de dicho cebador para proporcionar una molécula de cDNA complementario a di- cho RNA, con un par de cebadores que comprende un primer cebador que es lo suficientemente complementario con el RNA para hibridar con éste e iniciar la síntesis de una molécu- la de cDNA complementario con el RNA, y un segundo cebador que es lo suficientemente homólogo con dicho RNA para hibridar con el cDNA e iniciar la síntesis de un producto de extensión, y (c) amplificar dicho cDNA.

Tipo: Resumen de patente/invención.

Solicitante: F. HOFFMANN-LA ROCHE AG.

Nacionalidad solicitante: Suiza.

Dirección: GRENZACHERSTRASSE 124,4070 BASEL.

Inventor/es: SMITH, EDWARD SOH, ELFSTROM, CARITA MARIA, GELFAND, DAVID HARROW, HIGUCHI, RUSSELL GENE, MYERS, THOMAS WILLIAM, SCHOENBRUNNER, NANCY JENEANE, WANG, ALICE MING.

Fecha de Publicación: 16 de Abril de 2007.

Fecha Concesión Europea: 13 de Septiembre de 2006.

Clasificación Internacional de Patentes:

C12Q1/68 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

Clasificación PCT:

C12N15/10 C12 […] › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34).
C12N9/12 C12N […] › C12N 9/00 Enzimas, p. ej. ligasas (6.); Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas. › transfieren grupos que contienen fósforo, p. ej. Quinasas (2.7).
C12Q1/68 C12Q 1/00 […] › en los que intervienen ácidos nucleicos.

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