SCD40L, PAPP-A y factor de crecimiento placentario (PIGF) como combinación de marcadores bioquímicos en enfermedades cardiovasculares.

Procedimiento in vitro para el análisis de muestras para el diagnóstico y/o el pronóstico de enfermedadescardiovasculares agudas,

en el que el procedimiento comprende las siguientes etapas:

a) facilitar una muestra biológica que va a someterse a ensayo, seleccionada del grupo constituido por sangreperiférica o fracciones de la misma y suspensiones de cultivo celular o fracciones de las mismas, de un sujeto;

b) determinar la concentración de los marcadores PAPP-A e IL-10 en la muestra,

c) dado el caso, determinar la concentración en la muestra al menos de otro marcador seleccionado de ligandoCD40 soluble (sCD40L), PlGF, troponina T (TnT), MPO, NT-proBNP, VEGF, BNP y otros marcadoresinflamatorios, particularmente CRP, hsCRP, y

d) comparar el/los resultado/s obtenido/s para la muestra que va a someterse a ensayo con valores de referenciay/o los valores de muestras de referencia,

en el que con un valor umbral por debajo de 3,5 ng/l de IL-10, valores de PAPP-A por encima de 12,6 mIU/l indicanun riesgo cardiovascular especialmente alto.

SCD40L, PAPP-A y factor de crecimiento placentario (PIGF) como combinación de marcadores bioquímicos en enfermedades cardiovasculares

La invención se refiere a nuevos marcadores de la inflamación vascular y combinaciones de los mismos como herramientas para el diagnóstico y su pronóstico en pacientes con enfermedades cardiovasculares. Los marcadores sirven adicionalmente como herramientas que facilitan la selección de principios activos para el tratamiento de tales enfermedades y finalmente como punto de partida para el tratamiento de enfermedades cardiovasculares. Adicionalmente, la invención se refiere a la creación de un perfil de riesgo individual de fenómenos negativos que están relacionados con el avance de la arteriosclerosis.

Antecedentes de la invención

La formación de un trombo en el vaso coronario es el acontecimiento desencadenante de una enfermedad cardiaca coronaria inestable. El papel central de la activación plaquetaria en pacientes con una enfermedad cardiaca coronaria inestable lo refuerzan adicionalmente los metabolitos de tromboxanos y las prostaglandinas que liberan las plaquetas. Por tanto, la activación plaquetaria es una diana terapéutica general. Hasta ahora, las terapias de este tipo han comprendido el uso de aspirina, tienopiridinas y un inhibidor de la glicoproteína IIb/IIIa directo. Sin embargo hasta hoy no pudo identificarse un marcador bioquímico fiable de la activación plaquetaria. Ciertos resultados con Pselectina, el marcador más prometedor hasta ahora para una activación plaquetaria, son hasta hoy controvertidos.

Los individuos que padecen una enfermedad cardiovascular, pueden clasificarse en individuos que no muestran ningún síntoma y aquéllos que muestran el dolor de pecho. El último grupo mencionado puede clasificarse en individuos que presentan una angina de pecho estable (SAP) y aquéllos con síndromes coronarios agudos (ACS) . Los pacientes con ACS pueden presentar una angina de pecho instable (IAP) o estos pacientes padecieron ya un infarto de miocardio (MI) . El MI puede ser un MI con ST elevado o un MI sin ST elevado. La aparición de un MI puede estar acompañada de una disfunción ventricular izquierda (LVD) . Por último, los pacientes con LVD atraviesan un fallo cardiaco congestivo (CHF) con una tasa de mortalidad de aproximadamente un 15 % o no muestran ningún síntoma.

Los pacientes que ingresan con dolores de pecho, se examinan en relación a una elevación o disminución del ST. Este es el caso que el individuo se opera con una probabilidad de casi el 100 % de permanecer en el hospital. Dado que, sin embargo, no todos los individuos con un MI muestran anomalías del ST, se determina el nivel de troponina (TnT) que en el caso de valores altos no habituales indica una alta probabilidad de que se produzca un MI.

Ciertos avances recientes en la investigación básica ha establecido un papel fundamental de la inflamación en la mediación de todas las fases de la arteriosclerosis, desde su inicio a través de avances y, finalmente, las complicaciones trombóticas de lesiones arterioscleróticas [Libby P, Ridker PM, Maseri A. Inflammation and atherosclerosis. Circulation 2002;105 (9) : 1135-43. Ross R. Atherosclerosis-an inflammator y disease. N Engl J Med 1999;340 (2) :115-26. Davies MJ, Thomas AC. Plaque fissuring-the cause of acute myocardial infarction, sudden ischaemic death, and crescendo angina. Br Heart J 1985;53 (4) :363-73. Libby P. Molecular bases of the acute coronar y syndromes. Circulation 1995;91 (11) :2844-50.]. Los resultados obtenidos a partir de la relación entre la inflamación y la arteriosclerosis constituyen las razones para el uso de marcadores inflamatorios circulantes como instrumentos predictivos potenciales en pacientes con síndromes coronarios agudos. De hecho, los niveles elevados de marcadores inflamatorios, tales como por ejemplo proteína C reactiva altamente sensible (hsCRP) , amiloide A sérico e interleucina-6 (IL-6) , no sólo van acompañados generalmente de síndromes coronarios agudos [Berk BC, Weintraub WS, Alexander RW. Elevation of C-reactive protein in “active” coronar y arter y disease. Am J Cordial 1990;65 (3) :168-72., Biasucci LM, Vitelli A, Liuzzo G, et al. Elevated levels of interleukin-6 in unstable angina. Circulation 1996;94 (5) :874-7.], sino (lo que es más importante) que pueden pronosticar también una afirmación sobre la salida clínica de pacientes con síndromes coronarios agudos [Liuzzo G, Biasucci LM, Gallimore JR, et al. The prognostic value of C-reactive protein and serum amyloid a protein in severe unstable angina. N Engl J Med 1994;331 (7) :417-24., Biasucci LM, Liuzzo G, Grillo RL, et al. Elevated levels of C-reactive protein at discharge in patients with unstable angina predict recurrent instability. Circulation 1999;99 (7) :855-60., Toss H, Lindahl B, Siegbahn A, Wallentin L. Prognostic influence of increased fibrinogen and C-reactive protein levels in unstable coronar y arter y disease. FRISC Study Group. Fragmin during Instability in Coronar y Arter y Disease. Circulation 1997;96 (12) :4204-10.]. Aunque la proteína hsCRP en fase aguda “clásica” se considera como el biomarcador más prometedor para fines clínicos, existe una heterogenicidad sustancial en cuanto a la prevalencia de niveles de hsCRP elevados en pacientes con síndromes coronarios agudos [Biasucci LM, Liuzzo G, Colizzi C, Rizzello V. Clinical use of C-reactive protein for the prognostic stratification of patients with ischemic heart disease. Ital Heart J 2001 ;2 (3) :164-71.].

Así más del 30 % de los pacientes con angina inestable agravada no muestran niveles de hsCRP elevados [Liuzzo G, Biasucci LM, Gallimore JR, et al. The prognostic value of C-reactive protein and serum amyloid a protein in severe unstable angina. N Engl J Med 1994;331 (7) :417-24., Heeschen C, Hamm CW, Bruemmer J, Simeons ML. Predictive value of C-reactive protein and troponin T in patients with unstable angina: a comparative analysis. CAPTURE Investigators. Chimeric c7E3 AntiPlatelet Therapy in Unstable angina refractor y to standard treatment trial. J Am Coll

Cardiol 2000;35 (6) :1535-42.]. Además, ciertas diferencias individuales en la dimensión de la respuesta frente a determinados estímulos inflamatorios pueden influir posiblemente en los niveles de los reactivos en fase aguda “aguas abajo”, tales como hsCRP [Pepys MB, Hirschfield GM. C-reactive protein and its role in the pathogenesis of myocardial infarction. Ital Heart J 2001, 2 (11) :804-6., Liuzzo G, Biasucci LM, Rebuzzi AG, et al. Plasma protein acute-phase response in unstable angina is not induced by ischemic injur y . Circulation 1996;94 (10) :2373-80.]. Por tanto existe todavía un reto importante en identificar estímulos próximos para la inflamación vascular que pueden usarse como marcadores séricos que predicen riesgos en pacientes con arteriosclerosis coronaria.

Mientras tanto aumentan indicios de que el sistema CD40-CD40L desempeña un papel importante en la fisiopatología de pacientes con una enfermedad cardiaca coronaria inestable. Excepto en la forma asociada celular, CD40L se produce también en una forma soluble, biológica y completamente activa, concretamente sCD40L. sCD40L se expulsan por linfocitos estimulados y se liberan activamente en relación a la estimulación plaquetaria. sCD40L actúa de manera pro-inflamatoria sobre células endoteliales y promueve la coagulación, induciendo los monocitos y las células endoteliales a la expresión de factores tisulares. Además, sCD40L contiene una secuencia KGD, un motivo de unión conocido que es específico para la integrina plaquetaria imperante aIIbº3. CD40L es realmente un ligando de aIIº3, un agonista plaquetario, y es necesario para la estabilidad de trombos arteriales. En suero de pacientes con síndromes coronarios agudos puede detectarse un aumento de sCD40L. Se informó (Schonbeck U, Varo N, Libby P, Buring J, Ridker PM. Circulation 2001; 104: 2266-8) de que mujeres aparentemente sanas que presentaban elevadas concentraciones en plasma de sCD40L, tenían al mismo tiempo un elevado riesgo de acontecimientos cardiovasculares.

Hallazgos más recientes demuestran que una ruptura de placas y la formación posterior de un trombo en pacientes con síndromes coronarios agudos puede conducir a una activación de la exposición de CD40L en plaquetas circulantes (Lee Y, Lee WH, Lee SC, Ahn KJ, Choi YH, Park SW, Seo JD, Park JE. Cardiology. 1999; 92: 11-6) . También se detectaron elevadas concentraciones de sCD40L en pacientes con angina, siendo especialmente altas las concentraciones en pacientes con angina inestable (Aukrust P, Muller F, Ueland... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento in vitro para el análisis de muestras para el diagnóstico y/o el pronóstico de enfermedades cardiovasculares agudas, en el que el procedimiento comprende las siguientes etapas:

a) facilitar una muestra biológica que va a someterse a ensayo, seleccionada del grupo constituido por sangre periférica o fracciones de la misma y suspensiones de cultivo celular o fracciones de las mismas, de un sujeto; b) determinar la concentración de los marcadores PAPP-A e IL-10 en la muestra, c) dado el caso, determinar la concentración en la muestra al menos de otro marcador seleccionado de ligando CD40 soluble (sCD40L) , PlGF, troponina T (TnT) , MPO, NT-proBNP, VEGF, BNP y otros marcadores inflamatorios, particularmente CRP, hsCRP, y d) comparar el/los resultado/s obtenido/s para la muestra que va a someterse a ensayo con valores de referencia y/o los valores de muestras de referencia,

en el que con un valor umbral por debajo de 3, 5 ng/l de IL-10, valores de PAPP-A por encima de 12, 6 mIU/l indican un riesgo cardiovascular especialmente alto.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que la muestra que va a someterse a ensayo y/o la muestra de referencia proceden de un ser humano.

3. Procedimiento según la reivindicación 1 ó 2, en el que la muestra que va a someterse a ensayo es plasma sanguíneo o suero sanguíneo, añadiéndose a la sangre periférica dado el caso un anticoagulante, particularmente heparina.

4. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 3, en el que la determinación de la concentración se realiza por medio de un procedimiento inmunológico por medio de moléculas que se unen a los marcadores, en el que las moléculas que se unen a los marcadores se seleccionan preferentemente del grupo constituido por anticuerpos antimarcadores o partes o fragmentos de los mismos y receptores de marcadores o partes de los mismos.

5. Procedimiento según la reivindicación 4, en el que los marcadores y/o las moléculas que se unen a los marcadores se encuentran en disolución o inmovilizados en una matriz.

6. Procedimiento según la reivindicación 4 ó 5, en el que las moléculas que se unen a los marcadores se detectan con un anticuerpo, en el que están acopladas una o varias moléculas de detección.

7. Procedimiento según una de las reivindicaciones 4 a 6, en el que los procedimientos inmunológicos se seleccionan del grupo constituido por ensayo inmunológico enzimático de tipo sándwich, ELISA y ensayos inmunológicos en fase sólida.

8. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 7, en el que las enfermedades cardiovasculares se seleccionan del grupo constituido por angina inestable, infarto de miocardio, síndrome cardiaco agudo, enfermedad arterial coronaria e insuficiencia cardiaca.

9. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 8, en el que el valor umbral de los resultados obtenidos para la muestra que va a someterse a ensayo se encuentra en 10, 0 μg/l de hsCRP en suero o plasma.

10. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 9, que comprende adicionalmente una monitorización de la terapia de las enfermedades cardiovasculares agudas, particularmente:

a) en el que la terapia comprende la administración de estatinas, y/o inhibidores del receptor de la glicoproteína IIb/III, b) en el que la terapia comprende la administración de un agente anti-inflamatorio y un tratamiento quirúrgico, particularmente una dilatación con balón, o c) para distinguir entre pacientes que reaccionan o no reaccionan a una terapia con abciximab.

Figura 18aFigura 19a Figura 20A