Una proteína de unión aislada que se une al factor de crecimiento de hepatocitos humano (HGF) que comprende

(i) una región variable de cadena ligera de inmunoglobulina que comprende una CDRL1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº :

18, una CDRL2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 19 y una CDRL3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 20; y

(ii) una región variable de cadena pesada de inmunoglobulina que comprende una CDRH1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 15, una CDRH2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 16 ó SEC ID Nº : 203 y una CDRH3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 17.

Proteínas de unión al factor de crecimiento de hepatocitos (HGF)

SOLICITUDES RELACIONADAS

La presente solicitud reivindica el beneficio de prioridad de las Solicitudes Provisionales de Estados Unidos Nº 60/810.714, presentada el 2 de junio de 2006 y 60/860.461, presentada el 21 de noviembre de 2006.

CAMPO DE LA INVENCIÓN

El campo de la invención es la biología molecular, inmunología y oncología. Más particularmente, el campo es proteínas de unión basadas en anticuerpos que se unen a factor de crecimiento de hepatocitos humano (HGF) .

ANTECEDENTES

El Factor de Crecimiento de Hepatocitos (HGF) , también conocido como Factor de Difusión (SF) , es una proteína heterodimérica multifuncional producida predominantemente por células mesenquimales y es un efector de células que expresan la tirosina quinasa receptora Met (Bottaro et al (1991) SCIENCE 251: 802-804, Rubin et al (1993) BIOCHIM. BlOPHYS. Acta 1155: 357-371) . El receptor Met humano también se conoce como "c-Met". El HGF maduro contiene dos cadenas polipeptídicas, la cadena α y la cadena β. Estudios publicados sugieren que es la cadena α la que contiene el dominio de unión a receptor c-Met del HGF.

Cuando se une con su receptor afín, HGF media varias actividades celulares. La ruta de señalización de HGF-Met desempeña un papel en la regeneración de hígado, curación de heridas, regeneración neural, angiogénesis y tumores malignos. Véase, por ejemplo, Cao et al. (2001) PROC. NATL. ACAD. SCI. USA 98: 7443-7448, Burgess et al. (2006) CANCER RES. 66: 1721-1729, y Patentes de Estados Unidos Nº 5.997.868 y 5.707.624. Los investigadores han estado desarrollando varios moduladores de HGF, incluyendo anticuerpos, para tratar diversos trastornos que implican actividad de HGF, por ejemplo, ciertos cánceres sensibles a HGF. Véase, por ejemplo, Publicación de Solicitud Internacional Nº WO 2005/017107.

La estructura básica común de todos los anticuerpos se muestra de forma esquemática en la Figura 1. Los anticuerpos son proteínas multiméricas que contienen cuatro cadenas polipeptídicas. Dos de las cadenas polipeptídicas se denominan cadenas pesadas o H y dos de las cadenas polipeptídicas se denominan cadenas ligeras o L. Las cadenas pesadas y ligeras de inmunoglobulina están conectadas por un enlace disulfuro intercatenario. Las cadenas pesadas de inmunoglobulina están conectadas por varios enlaces disulfuro intercatenarios. Una cadena ligera está compuesta de una región variable (VL en la Figura 1) y una región constante (CL en la Figura 1) , mientras que la cadena pesada está compuesta de una región variable (VH en la Figura 1) y al menos tres regiones constantes (CH1, CH2 y CH3 en la Figura 1) . Las regiones variables determinan la especificidad del anticuerpo y las regiones constantes tienen otras funciones.

La información estructural y de aminoácidos indica que cada región variable comprende tres regiones hipervariables (también conocidas como regiones determinantes de complementariedad o CDR) flanqueadas por cuatro regiones flanqueantes o FR relativamente conservadas. Las tres CDR, denominadas CDR1, CDR2 y CDR3, son responsables de la especificidad de unión de anticuerpos individuales. Cuando los anticuerpos van a usarse como agentes terapéuticos y de diagnóstico, típicamente es deseable crear anticuerpos que tengan la mayor especificidad de unión y afinidad con la molécula diana. Se cree que diferencias en las regiones variables pueden tener efectos profundos en la especificidad y afinidad del anticuerpo.

En el documento WO 2005/017107 A, se describen anticuerpos para la proteína HGF humana. La patente de Estados Unidos Nº 5.707.624 describe el uso de anticuerpos anti-HGF en el tratamiento de sarcoma de Kaposi. De forma similar, la Patente de Estados Unidos Nº 5.997.868 describe el tratamiento de un tumor por administración de un anticuerpo anti-HGF al paciente a tratar para bloquear la capacidad de HGF endógeno para promover angiogénesis en el tumor. Más recientemente, los investigadores proponen que los anticuerpos que se unen a la cadena β de HGF pueden tener potencial como agentes terapéuticos en pacientes con tumores dependientes de HGF (Burgess (2006) mencionado anteriormente) .

No obstante, existe aún una necesidad de moduladores de HGF adicionales que puedan usarse como agentes terapéuticos y de diagnóstico.

DESCRIPCIÓN RESUMIDA DE LA INVENCIÓN

La invención se basa, en parte, en el descubrimiento de una familia de proteínas de unión que se unen específicamente a HGF, en particular HGF humano. Las proteínas de unión están basadas en anticuerpos en la medida en que contienen sitios de unión a antígeno (es decir, HGF) basados en las CDR de una familia de anticuerpos que se unen específicamente a HGF. Las CDR confieren la especificidad de unión de las proteínas de unión para HGF. Las proteínas de unión pueden usarse como agentes de diagnóstico y terapéuticos. Cuando se usan como un agente terapéutico, las proteínas de unión se modifican por ingeniería genética (por ejemplo, se humanizan) para reducir o eliminar el riesgo de inducir una respuesta inmune contra la proteína de unión cuando se administra al receptor (por ejemplo, un ser humano) .

Las proteínas de unión neutralizan la actividad de HGF y, por lo tanto, pueden usarse como un agente terapéutico. En ciertas realizaciones, las proteínas de unión evitan que HGF se una a su receptor afín, c-Met, neutralizando de este modo la actividad de HGF. Debido a que se ha implicado HGF en el crecimiento y proliferación de células cancerosas, las proteínas de unión pueden usarse para inhibir la proliferación de células cancerosas. Además, cuando se administran a un mamífero, las proteínas de unión pueden inhibir o reducir el crecimiento tumoral en el mamífero.

La invención proporciona una proteína de unión aislada que se une al factor de crecimiento de hepatocitos humano (HGF) que comprende.

(i) una región variable de cadena ligera de inmunoglobulina que comprende una CDRL1 que comprende la secuencia de aminoácidos SEC ID Nº : 18, una CDRL2 que comprende la secuencia de aminoácidos SEC ID Nº : 19 y una CDRL3 que comprende la secuencia de aminoácidos SEC ID Nº : 20; y

(ii) una región variable de cadena pesada de inmunoglobulina que comprende una CDRH1 que comprende la secuencia de aminoácidos SEC ID Nº : 15, una CDRH2 que comprende la secuencia de aminoácidos SEC ID Nº : 16 o SEC ID Nº : 203 y una CDRH3 que comprende la secuencia de aminoácidos SEC ID Nº : 17.

La invención proporciona adicionalmente una proteína de unión aislada que se une al factor de crecimiento de hepatocitos humano (HGF) que comprende una región variable de cadena ligera de inmunoglobulina y una región variable de cadena pesada de inmunoglobulina seleccionadas del grupo que consiste en:

(a) una región variable de cadena ligera de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de los restos 21-127 de SEC ID Nº : 14, y una región variable de cadena pesada de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de los restos 20-137 de SEC ID Nº : 12;

(b) una región variable de cadena ligera de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 173 y una región variable de cadena pesada de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 165;

(c) una región variable de cadena ligera de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 173 y una región variable de cadena pesada de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 169,

(d) una región variable de cadena ligera de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 179 y una región variable de cadena pesada de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 165; y

(e) una región variable de cadena ligera de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 179 y una región variable de cadena pesada de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 169.

La invención también proporciona una proteína de unión aislada que se une al factor de crecimiento de hepatocitos humano (HGF) que comprende una cadena ligera de inmunoglobulina y una cadena pesada de inmunoglobulina seleccionadas del grupo que consiste en:

(a) una cadena ligera de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 177 y una cadena pesada de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos... [Seguir leyendo]

1. Una proteína de unión aislada que se une al factor de crecimiento de hepatocitos humano (HGF) que comprende

(i) una región variable de cadena ligera de inmunoglobulina que comprende una CDRL1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 18, una CDRL2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 19 y una CDRL3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 20; y

(ii) una región variable de cadena pesada de inmunoglobulina que comprende una CDRH1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 15, una CDRH2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 16 ó SEC ID Nº : 203 y una CDRH3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 17.

2. La proteína de unión de la reivindicación 1, en la que la región variable de la cadena ligera de inmunoglobulina comprende una CDRL1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 18, una CDRL2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 19 y una CDRL3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 20; y la región variable de la cadena pesada de inmunoglobulina comprende una CDRH1 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 15, una CDRH2 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 203 y una CDRH3 que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 17.

3. La proteína de unión de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en la que las secuencias CDR se interponen entre secuencias flanqueantes humanas o humanizadas.

4. La proteína de unión de la reivindicación 1 que se une al factor de crecimiento de hepatocitos humano (HGF) que comprende una región variable de cadena ligera de inmunoglobulina y una región variable de cadena pesada de inmunoglobulina seleccionada del grupo que consiste en:

(a) una región variable de cadena ligera de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de los residuo.

2. 127 de SEC ID Nº : 14, y una región variable de la cadena pesada de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de los residuo.

2. 137 de SEC ID Nº : 12;

(b) una región variable de la cadena ligera de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 173 y una región variable de la cadena pesada de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 165;

(c) una región variable de la cadena ligera de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 173 y una región variable de la cadena pesada de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 169;

(d) una región variable de la cadena ligera de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 179 y una región variable de la cadena pesada de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 165; y

(e) una región variable de la cadena ligera de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 179 y una región variable de la cadena pesada de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 169.

5. La proteína de unión de la reivindicación 4, en la que la región variable de la cadena ligera de inmunoglobulina comprende la secuencia de aminoácidos de los residuo.

2. 127 de SEC ID Nº : 14, y la región variable de la cadena pesada de inmunoglobulina comprende la secuencia de aminoácidos de los residuo.

2. 137 de SEC ID Nº : 12.

6. La proteína de unión de la reivindicación 4, en la que la región variable de la cadena ligera de inmunoglobulina comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 173 y la región variable de la cadena pesada de inmunoglobulina comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 169.

7. La proteína de unión de la reivindicación 1 que se une al factor de crecimiento de hepatocitos humano (HGF) que comprende una cadena ligera de inmunoglobulina y una cadena pesada de inmunoglobulina seleccionadas del grupo que consiste en:

(a) una cadena ligera de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 177 y una cadena pesada de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 167;

(b) una cadena ligera de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 177 y una cadena pesada de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 171;

(c) una cadena ligera de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 177 y una cadena pesada de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 210;

(d) una cadena ligera de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 181 y una cadena pesada de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 167;

(e) una cadena ligera de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 181 y una cadena pesada de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 171; y

(f) una cadena ligera de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 181 y una cadena pesada de inmunoglobulina que comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 210.

8. La proteína de unión de la reivindicación 7, siendo la proteína de unión un anticuerpo monoclonal o fragmento de proteína de unión a antígeno del mismo.

9. La proteína de unión de la reivindicación 7, en la que la cadena ligera de inmunoglobulina comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 177 y la cadena pesada de inmunoglobulina comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 171.

10. La proteína de unión de la reivindicación 7, en la que la cadena ligera de inmunoglobulina comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 177 y la cadena pesada de inmunoglobulina comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº : 210.

11. La proteína de unión de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para su uso en terapia.

12. La proteína de unión de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para su uso en la inhibición o reducción de proliferación de una célula tumoral.

13. La proteína de unión de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para su uso en la inhibición o reducción del crecimiento tumoral en un mamífero.

14. Un ácido nucleico aislado que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una región variable de cadena ligera de inmunoglobulina de las reivindicaciones 1-6 y una secuencia de nucleótidos que codifica una región variable de cadena pesada de inmunoglobulina de las reivindicaciones 1-6.

15. Un vector de expresión que comprende la secuencia de ácido nucleico de la reivindicación 14.

16. Una célula hospedadora que comprende el vector de expresión de la reivindicación 15.

17. Una célula hospedadora que comprende un vector de expresión que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica una región variable de cadena ligera de inmunoglobulina de las reivindicaciones 1-6 y un vector de expresión que comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica una región variable de cadena pesada de inmunoglobulina de las reivindicaciones 1-6.

18. Un método para producir la proteína de unión de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, comprendiendo el método:

(i) dejar crecer la célula hospedadora de la reivindicación 16 o reivindicación 17 en condiciones tales que la célula hospedadora exprese la región variable de cadena pesada de inmunoglobulina y la región variable de cadena ligera de inmunoglobulina; y

(ii) recoger la región variable de cadena pesada de inmunoglobulina y la región variable de cadena ligera de inmunoglobulina.

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REFERENCIAS CITADAS EN LA DESCRIPCIÓN

Esta lista de referencias citadas por el solicitante es únicamente para la comodidad del lector. No forma parte del documento de la patente europea. A pesar del cuidado tenido en la recopilación de las referencias, no se pueden excluir errores u omisiones y la EPO niega toda responsabilidad en este sentido.

Documentos de patentes citados en la descripción

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