PROTEÍNAS QUIMÉRICAS VII-FC DEL FACTOR DE COAGULACIÓN PARA EL TRATAMIENTO DE UN TRASTORNO HEMOSTÁTICO.

Una composición farmacéutica que comprende una proteína quimérica y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable,

en donde dicha proteína quimérica comprende por lo menos una porción de una región constante de inmunoglobulina que es un socio de unión FcRn, un factor de coagulación seleccionado del grupo que consiste de análogos del Factor VII, Factor VIIa, y Factor VII o Factor VIIa que tiene por lo menos 70% de identidad para la porción del Factor VII del polipéptido codificado por la SEQ ID NO: 4, y opcionalmente por lo menos un ligador, en donde dicha composición farmacéutica es para uso en la prevención o el tratamiento de un trastorno hemostático o una hemorragia aguda

Campo de la Invención

La invención se relaciona de manera general con el campo de los terapéuticos para trastornos hemostáticos. Más específicamente, la invención se relaciona con una proteína quimérica para el tratamiento de un trastorno hemostático.

Antecedente de la Invención

Los trastornos hemostáticos se caracterizan por sangrado no controlado que resulta de la incapacidad o capacidad reducida para formar coágulos de fibrina. Los trastornos hemostáticos pueden resultar de un defecto genético o se pueden adquirir como un resultado de una afección médica no relacionada (por ejemplo, enfermedad autoinmune, quimioterapia relacionada y cáncer) (Kasper 2000, Hemophilia 6(Supp): 13; Cohen et al. 1996, Bailiere's Clinical Hematology 9(2):331). Típicamente, los trastornos hemostáticos resultan de la deficiencia de un factor de coagulación sanguíneo específico. Ejemplos clásicos de los trastornos hemostáticos incluyen hemofilia A, que resulta de una deficiencia en el factor VIII; hemofilia B (Enfermedad de Christmas), que resulta de una deficiencia en el factor IX; y enfermedad de von Willebrand, que resulta en un defecto en un factor de von Willebrand. El factor de Von Willebrand circula con la asociación del factor VIII y lo estabiliza. Este media la adherencia de las plaquetas una con la otra y a las paredes de vasos sanguíneos lesionados. Otros, trastornos hemostáticos menos comunes incluyen la deficiencia del factor XI (deficiencia PTA), deficiencia del factor XII, así como también deficiencias o anormalidades estructurales en el fibrinógeno, protrombina, factor V, factor VII, factor X, o factor XIII (Kasper 2000, Hemophilia 6(Supp):13).

Los factores de coagulación actúan en conjunto uno con el otro en una cascada de coagulación que finalmente resulta en la formación de un coágulo de fibrina (Figura 1). Estos factores pueden existir en un estado de reposo como una proenzima o zimógeno o en un estado enzimático activado cuando se estimulan para formar un coágulo. La estimulación de estos factores puede ocurrir mediante dos rutas distintas, la ruta intrínseca y la ruta extrínseca. La ruta intrínseca se refiere a aquellas reacciones que conducen a la formación de coágulos a través de la utilización de factores que se presentan solo en el plasma. En contraste, la ruta extrínseca se refiere a aquellas reacciones que conducen a la formación de coágulos que se liberan del factor de tejido vinculado a la membrana luego de la interrupción del endotelio de vaso.

El Factor VII participa en ambas rutas que dividen el factor X dentro del factor Xa activado en conjunto con el factor de tejido en la ruta extrínseca o que interactúa con el factor IXa en la ruta intrínseca. El factor VII actúa en la en la dirección anterógrada e independientemente de factores VIII y IX cuando actúa a través de la ruta extrínseca, así evitando la necesidad de estos factores de coagulación. Este es, por lo tanto, un candidato terapéutico atractivo para tratar los trastornos hemostáticos, especialmente Hemofilia A y B. (Patente Estadounidense No. 6,310,183; WO 01/58935).

El Factor VII es una proteína dependiente de vitamina K sintetizada en el hígado y se secreta dentro de la sangre como una glucoproteína monocatenaria con un peso molecular de 53 kDa (Broze et al. 1980, J. Biol. Chem. 255:1242). El zimógeno de factor VII se convierte en una forma activada (FVIIa) mediante división proteolítica en un sitio único, Arg152-Ile153, que resulta en dos cadenas, pesada (254 aminoácidos) y liviana (154 aminoácidos) ligada por un enlace de disulfuro único (Hagen et al. 1986, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 83:2412). La forma activada del factor VII se une al factor de tejido, que luego convierte el factor X al factor Xa. Se requiere que el Factor Xa convierta la protrombina a trombina, que convierta el fibrinógeno a fibrina como una etapa final en la formación de un coágulo de fibrina.

El Factor VII experimenta modificaciones post-traduccionales, incluyendo carboxilación dependiente de vitamina K que resulta en diez residuos de ácido γ-carboxiglutámico en la región de terminal N de la molécula. Otras modificaciones post-traduccionales incluyen adhesión del grupo funcional de azúcar en dos sitios de glicosilación ligados a N de ocurrencia natural en la posición 145 y 322, respectivamente, y en dos sitios de glicosilación de ocurrencia natural ligados a O en la posición 52 y 60, respectivamente (WO 01/58935).

La terapia tradicional para trastornos hemostáticos se llama reemplazo parenteral de los factores de coagulación deficientes tal como factor VII, factor VIII o factor IX (ver, por ejemplo, Patente Estadounidense Nos. 6,310,183 y 4,784,950). El tratamiento frecuentemente implica administrar los factores de coagulación para tratar las hemorragias agudas así como también administrar factores de coagulación para determinar profilácticamente la ocurrencia de las hemorragias agudas futuras. Se ha encontrado que la profilaxis reduce el riesgo de desarrollar problemas de articulaciones y artritis asociada con las hemorragias agudas frecuentes (Petrini 2001, Hemofilia 7:99; Fischer et al. 2002, Blood 99(7):2337).

Las terapias tradicionales, sin embargo, tienen muchos problemas asociados. Los factores de coagulación actuales se pueden administrar parenteralmente con el fin de lograr dosis efectivas debido a que a la fecha los métodos no invasivos no han sido exitosos en lograr los niveles terapéuticos. Los problemas asociados con la administración parenteral incluyen la oclusión del sitio de inyección, dolor e infección. El uso de un catéter en línea incrementa el riesgo de todos estos eventos. Los problemas específicos asociados con la administración parenteral de los factores de coagulación en bebés y niños pequeños que incluyen acceso venoso central. Adicionalmente, la administración parenteral de los factores de coagulación corre el riesgo de precipitar una hemorragia. Estos problemas son particularmente relevantes cuando el paciente experimenta la administración profiláctica regular de un factor de coagulación.

Los factores de coagulación tal como factor IX y factor VIII se pueden dar frecuentemente y en grandes dosis que resultan en el desarrollo de anticuerpos inhibidores contra el factor de coagulación en un número significativo de pacientes (ver, por ejemplo, Nilsson 1992, Transfusion Medicine Review 6(4):285; Cohen et al. 1996, Bailiere's Clinical Hematology 9(2):331).

Un aspecto de la invención proporciona un tratamiento efectivo más seguro para trastornos hemostáticos. Otro aspecto de la invención proporciona semivida de suero incrementada y biodisponibilidad incrementada de los terapéuticos administrados a través de medios no invasivos para el tratamiento de los trastornos hemostáticos que reduce por lo tanto el riesgo de incurrir en una hemorragia, infección y oclusión del sitio de inyección asociado con la administración parenteral. Otro aspecto de la invención proporciona terapia para trastornos hemostáticos con riesgo reducido, comparado con las terapias actuales, de desarrollo de anticuerpos inhibidores contra el factor de coagulación. Todavía otro aspecto de la invención proporciona un tratamiento profiláctico de un trastorno hemostático.

Los aspectos de la invención proporcionan una proteína quimérica comprendida de por lo menos un factor de coagulación y por lo menos una porción de una región constante de inmunoglobulina, en donde el factor de coagulación es capaz de promover la coagulación de la sangre y/o la formación de coágulos de fibrina.

Las proteínas quiméricas que comprenden una porción Fc de una inmunoglobulina se conocen (ver, por ejemplo, Patente Estadounidense Nos. 6,030,613, 6,086,875, 6,485,726, y Solicitud PCT No. US/02/21335) y mientras que las proteínas quiméricas comprendidas de factores mutantes de coagulación sin actividad de coagulación, y las inmunoglobulinas se han descrito previamente (WO 01/02439), las proteínas quiméricas que comprende un factor de coagulación (es decir, que tienen actividad de coagulación) y no se ha descrito por lo menos una porción de una región constante de inmunoglobulina. El factor de coagulación como se define adelante y como se utiliza aquí se refiere a cualquier molécula con actividad de coagulación.

La EP 0464533 describe construcciones de fusión quimérica y proteínas purificadas de tromboplastina (factor de tejido TF que es un factor de coagulación sanguíneo) con la región constante de inmunoglobulina Fc pero no describe ninguna de las fusiones... [Seguir leyendo]

1. Una composición farmacéutica que comprende una proteína quimérica y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable, en donde dicha proteína quimérica comprende por lo menos una porción de una región constante de inmunoglobulina que es un socio de unión FcRn, un factor de coagulación seleccionado del grupo que consiste de análogos del Factor VII, Factor VIIa, y Factor VII o Factor VIIa que tiene por lo menos 70% de identidad para la porción del Factor VII del polipéptido codificado por la SEQ ID NO: 4, y opcionalmente por lo menos un ligador, en donde dicha composición farmacéutica es para uso en la prevención o el tratamiento de un trastorno hemostático o una hemorragia aguda.

2. La composición farmacéutica para uso de acuerdo con la reivindicación 1, que reduce el riesgo de incurrir en una hemorragia, infección, u oclusión del sitio de inyección asociado con una administración parenteral.

3. La composición farmacéutica para uso de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, que tiene una semivida de suero incrementada o biodisponibilidad.

4. La composición farmacéutica para uso de acuerdo con la reivindicación 1, que se va a administrar intravenosamente, subcutáneamente, intramuscularmente, oralmente, sublingualmente, bucalmente, nasalmente, rectalmente, vaginalmente, por medio de una ruta pulmonar, o por medio de una superficie de mucosa.

5. La composición farmacéutica para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que se va a administrar en una dosis de 0.1 - 1000 µg/kg.

6. La composición farmacéutica para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde la por lo menos una porción de una región constante de inmunoglobulina comprende un fragmento Fc.

7. La composición farmacéutica para uso de acuerdo con la reivindicación 6, en donde el fragmento Fc comprende una secuencia de aminoácido que tiene por lo menos 80% de identidad con la SEQ ID NO: 2.

8. Una composición farmacéutica que comprende una proteína quimérica y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable, en donde dicha proteína quimérica comprende una proteína que es un análogo del Factor VII o Factor VIIa que tiene por lo menos 70% de identidad con la SEQ ID NO: 1, en donde dicha composición farmacéutica es para uso en la prevención o el tratamiento de un trastorno hemostático o un trastorno hemorrágico agudo.

9. La composición farmacéutica para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde dicha proteína quimérica es un dímero.

10.La composición farmacéutica para uso de acuerdo con la reivindicación 9, en donde dicho dímero es un homodímero.

11.La composición farmacéutica para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en donde dicha proteína quimérica es un híbrido de monómero dímero.

12.La composición farmacéutica para uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la proteína quimérica comprende la Fórmula

X-L-F

en donde F es un fragmento Fc de una inmunoglobulina y L es un ligador o un enlace directo, y X se selecciona del grupo que consiste de análogos del Factor VII, Factor VIIa, y Factor VII o Factor VIIa que tiene por lo menos 70% de identidad para la porción del Factor VII del polipéptido codificado por la SEQ ID NO: 4.

13. La composición farmacéutica para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en donde dicha proteína quimérica comprende un ligador y dicho ligador comprende aproximadamente 1 a aproximadamente 20 aminoácidos.

14. La composición farmacéutica para uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en donde dicha proteína quimérica comprende un ligador y en donde dicho ligador comprende la secuencia (GGS)n o (GGGGS)n, en donde n es un entero de aproximadamente 1 a aproximadamente 10.

15. Una proteína quimérica que comprende: (i) por lo menos una porción de una región constante de inmunoglobulina que es un socio de unión FcRn; (ii) un factor de coagulación seleccionado del grupo que consiste de análogos del Factor VII, Factor VIIa, y Factor VII o Factor VIIa que tiene por lo menos 70% de identidad para la porción del Factor VII del polipéptido codificado por la SEQ ID NO: 4; y opcionalmente (iii) por lo menos un ligador,

5 para uso en la prevención o el tratamiento de un trastorno hemostático o un trastorno hemorrágico agudo.

16. La composición farmacéutica para uso de acuerdo con la reivindicación 1 o 12, o la proteína quimérica para uso de acuerdo con la reivindicación 15, en donde dichos análogos del Factor VII o Factor VIIa tienen por lo menos 85% de identidad para la porción del Factor VII del polipéptido codificado por la SEQ ID NO: 4.

17. La composición farmacéutica o la proteína quimérica para uso de acuerdo con la reivindicación 16, en donde

10 dichos análogos del Factor VII o Factor VIIa tienen por lo menos 95% de identidad para la porción del Factor VII del polipéptido codificado por la SEQ ID NO: 4.

18. La composición farmacéutica para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, 16 o 17, o la proteína quimérica para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 17, en donde el trastorno hemostático es hemofilia A o hemofilia B.

19. La composición farmacéutica para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, 16 o 17, o la proteína quimérica para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 17, en donde el trastorno hemostático se caracteriza por una tendencia espontánea a hemorragia o como un resultado de trauma, o en donde el trastorno hemorrágico agudo que resulta del trauma.

20. La composición farmacéutica para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 o 16 a 19, o 20 la proteína quimérica para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 15-19, en donde la prevención

o el tratamiento del trastorno hemostático o la hemorragia aguda comprende administrar la composición farmacéutica o la proteína quimérica, y administrar por lo menos un otro factor de coagulación o agente hemostático.