Procedimientos para el secado de bacteriófagos y composiciones que contienen bacteriófagos.

Un procedimiento para fabricar una preparación de bacteriófagos secos,

que comprende someter un líquido a granel que incluye un bacteriófago a un secado por combustión a pulsos .

Procedimientos para el secado de bacteriófagos y composiciones que contienen bacteriófagos.

Campo técnico

La presente invención se refiere en general a procedimientos para el secado de bacteriófagos y composiciones que incluyen los bacteriófagos. Más específicamente, la presente invención se refiere al uso de los procesos de secado por pulverización por atomización con combustión a pulsos para rociar bacteriófagos secos y composiciones que contienen bacteriófagos.

Antecedentes de la técnica relacionada Los bacteriófagos pueden ser producidos mediante procesos de fermentación, en los que los medios líquidos de fermentación, hospedadores bacterianos y bacteriófagos se mezclan entre sí y se incuban. De dichos procesos de fermentación se obtienen mezclas líquidas de lisado que incluyen restos de bacterias, medios de fermentación y bacteriófagos en mayor concentración. En la producción de bacteriófagos, hay que considerar la naturaleza del lisado y la interacción con el hospedador lisado. Los bacteriófagos viven en el medio de fermentación y generalmente siguen existiendo dentro de ese lisado durante largos períodos de tiempo (con pocas excepciones) . Si el bacteriófago se retira del lisado líquido, o si el ambiente se cambia ligeramente, la viabilidad del bacteriófago podría verse comprometida.

Además, los líquidos, tales como el agua, promueven la interacción deseada aleatoria entre el bacteriófago y el hospedador bacteriano específico. En consecuencia, el bacteriófago se aplica normalmente en forma líquida a sustratos (por ejemplo, plantas, carnes, etc.) que pueden estar contaminados o infectados con bacterias diana específicas.

Como tales, normalmente, las soluciones líquidas del lisado que resultan de los procesos de fermentación de bacteriófagos se aclaran simplemente para producir un producto bacteriófago final, que se envía entonces sin más modificación.

Hay, sin embargo, situaciones en las que sería más deseable suministrar un producto bacteriófago seco o un producto bacteriófago más compacto (por ej., concentrado) . Un ejemplo de tal situación es cuando una bacteria hospedadora excreta una enzima particular, proteasa, toxina u otro subproducto que puede dañar al bacteriófago con el tiempo; por ej., cuando se degradan las proteínas (que son los elementos estructurales de los bacteriófagos) dando lugar a la eventual destrucción del bacteriófago que se mantiene dentro de la solución de lisado líquido (aclarado o no) . Esta degradación se produce con el tiempo, incluso después de que los hospedadores bacterianos hayan sido destruidos por el bacteriófago y puede ocurrir en tan sólo unas pocas horas o prolongarse varios días o incluso semanas. Como resultado, la producción de productos líquidos de bacteriófago se ha limitado a hospedadores bacterianos con un "buen comportamiento" (aquellos que no excretan subproductos que puedan perjudicar el bacteriófago) , los cuales pueden limitar los tipos o concentraciones de ciertos tipos de bacteriófagos que pueden ser efectivamente producidos a escala industrial.

Se han hecho varios intentos para producir productos bacteriófagos secos a una escala mayor, incluyendo procesos de liofilización (es decir, secado por congelación) , secado por pulverización y secado al vacío (ver, por ej., la Solicitud de publicación de Patente europea EP 0 403 292 (19 de diciembre de 1990) de Microbial Developments Limited, página 4, líneas 42-44 y 52-55) . Sin embargo, no está clara la viabilidad y virulencia de las partículas de bacteriófago desecadas. Por otra parte, la susceptibilidad de las partículas de bacteriófago a las condiciones (por ej., temperaturas, fuerzas de cizalladura, etc.) de tales procesos han resultado ser intentos infructuosos por "destruir" o de otro modo disminuir la virulencia de la gran mayoría de las partículas de bacteriófago. De hecho, los procesos convencionales de secado por pulverización suelen dar lugar generalmente a productos con al menos una reducción de cinco log (105) a ocho log (108) en la eficacia de bacteriófago, lo que representa una reducción en la eficacia del producto final, en comparación con su forma líquida pre-secado, del 99, 999 % al 99, 999999 %.

Se necesitan bacteriófagos y composiciones que contienen bacteriófagos que estén en forma seca (por ej., polvo, gránulos, etc.) , procedimientos de secado de bacteriófagos y composiciones que contienen bacteriófagos y procedimientos para el uso de bacteriófagos secos y composiciones secas que incluyen bacteriófagos.

Descripción de la invención Los bacteriófagos son sensibles a fuerzas de cizallamiento, a temperaturas extremadamente altas (incluyendo la cantidad de tiempo que se expone el bacteriófago a altas temperaturas) y a otras variables ambientales. Debido a la naturaleza sensible del bacteriófago, hay que procurar evitar daños en la anatomía de este microorganismo. Un problema, en particular, es mantener intactas las partes del bacteriófago necesarias para la adsorción, tales como las fibras de la cola. Si estas partes de la anatomía del bacteriófago no permanecen intactas o viables, el bacteriófago no será capaz de establecer contacto y adsorberse a las paredes de la cepa bacteriana diana.

La presente invención, en un aspecto, incluye un procedimiento para fabricar una preparación de bacteriófagos seca según la reivindicación 1. En diversas realizaciones, tales procesos pueden incluir someter un líquido a granel a secado por combustión a pulsos. Además del bacteriófago, el líquido a granel puede incluir al menos uno de un medio de fermentación, un lisado y una bacteria hospedadora. En algunas realizaciones, el líquido a granel puede tener un volumen de hasta veinte (20) litros.

En el líquido a granel también puede introducirse un material de soporte para aumentar su contenido de sólidos. Ejemplos de materiales de soporte adecuados incluyen leche en polvo, trehalosa y maltodextrina. En algunas realizaciones, el contenido de sólidos del líquido a granel puede ajustarse al menos al 20 %.

Durante el secado por combustión a pulsos, el líquido a granel puede ser sometido a una presión de hasta 0, 1 bar. La temperatura de contacto del proceso de combustión de impulsos de secado puede ser 540°C o menos. Una temperatura de salida durante el proceso de secado por combustión a pulsos puede ser 82 ºC o menos. El secado por combustión a pulsos puede efectuarse a una velocidad de un litro cada noventa (90) segundos o más rápido.

El procesamiento de secado por combustión a pulsos de bacteriófagos puede mantener la eficacia y la virulencia de las partículas de bacteriófagos de una manera que reduce el número de partículas de bacteriófagos viables del producto bacteriófago líquido procesado en el producto bacteriófago seco, en no más de aproximadamente un log (101) .

Otros aspectos, así como características y ventajas de la presente invención serán evidentes para los expertos en la técnica mediante la consideración de la siguiente descripción y las reivindicaciones adjuntas.

Mejor (es) modo (s) de llevar a cabo la invención La presente invención incluye procedimientos para la formación de productos bacteriófagos secos a partir de productos bacteriófagos líquidos, tales como mezclas de fermentación que incluyen bacteriófagos y, opcionalmente, medios de fermentación, hospedadores bacterianos para el bacteriófago y/o restos de bacterias o "lisado". En un procedimiento de este tipo, una preparación líquida a granel que incluye el bacteriófago (es decir, una cantidad a escala industrial, que se puede medir en galones o litros) se puede secar en menos de diez horas y, en algunas realizaciones, unos pocos litros del producto bacteriófago líquido (por ej., hasta unos veinte litros) pueden secarse tan rápido como en aproximadamente treinta minutos, veinte minutos, o incluso diez minutos o menos. Por lo tanto, el secado se puede efectuar a una velocidad de aproximadamente un litro por minuto y medio, aproximadamente un litro por minuto o incluso dos litros por minuto.

Cuando se emplean procedimientos para formar productos bacteriófagos secos de acuerdo con las enseñanzas de la presente invención, la viabilidad de un producto bacteriófago líquido, o su virulencia (es decir, la capacidad del bacteriófago para infectar una bacteria hospedadora) , se mantiene sustancialmente durante el proceso de secado. Como ejemplo, en algunas realizaciones, el producto bacteriófago seco que resulta de un proceso de secado de la presente invención puede reducir el número de partículas de bacteriófago viables o virulentas a no menos del diez por ciento (10 %) del número de partículas de bacteriófago viables o virulentas que... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para fabricar una preparación de bacteriófagos secos, que comprende someter un líquido a granel que incluye un bacteriófago a un secado por combustión a pulsos.

2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que someter comprende someter un líquido a granel que incluye el bacteriófago y al menos uno de un medio de fermentación, un lisado y una bacteria hospedadora al secado por combustión a pulsos.

3. El procedimiento de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, que comprende además:

introducir un material de soporte en el líquido a granel para aumentar el contenido de sólidos del líquido a granel, en el que someter comprende someter un líquido a granel que incluye el material de soporte al secado por combustión a pulsos.

4. El procedimiento de la reivindicación 3, en el que la introducción del material de soporte comprende ajustar un contenido de sólidos del líquido a granel de al menos el 20 %.

5. El procedimiento de la reivindicación 3 o la reivindicación 4, en el que la introducción del material de soporte comprende la introducción de al menos uno de leche en polvo, trehalosa y maltodextrina en el líquido a granel.

6. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que someter comprende someter el líquido a granel a una presión máxima de 0, 1 bar.

7. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que someter comprende someter el líquido a granel a una temperatura de contacto de 540°C o menos.

8. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que el proceso de secado por combustión a pulsos emplea una temperatura de salida de 82 ºC o menos.

9. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que someter el líquido a granel al secado por combustión a pulsos tiene como resultado, a lo sumo, una reducción de un log en el número de partículas de bacteriófagos viables desde el líquido a granel a un producto bacteriófago seco.

10. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que el secado por combustión a pulsos se efectúa a una velocidad de un litro cada noventa segundos, o más rápido.

11. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que el líquido a granel tiene un volumen de hasta veinte litros.