PROCEDIMIENTOS Y REACTIVOS PARA DIAGNOSTICAR LA INFECCION POR HANTAVIRUS.

Un procedimiento para detectar anticuerpos contra hantavirus en una muestra biológica que comprende:



(a) poner en contacto dicha muestra biológica con al menos seis antígenos recombinantes de hantavirus, en el que los al menos seis antígenos recombinantes de hantavirus comprenden una combinación de antígenos G1 y/o N de los serotipos de hantavirus Hantaan (HTNV), Puumala (PUUV), Seoul (SEOV), Dobrava (DOBV), Sin Nombre (SNV) y Andes (ANDV), en el que hay presente al menos un antígeno recombinante de cada uno de los serotipos, siendo la puesta en contacto realizada en condiciones que permiten que los anticuerpos contra los hantavirus, cuando están presentes en la muestra biológica, se unan con al menos uno de dichos antígenos G1 o N para formar un complejo de anticuerpo/antígeno; y

(b) detectar la presencia o la ausencia de dicho complejo de anticuerpo/antígeno, detectando así la presencia o la ausencia de anticuerpos contra hantavirus en dicha muestra

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2005/018066.

Solicitante: NOVARTIS VACCINES AND DIAGNOSTICS, INC..

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 4560 HORTON STREET,EMERYVILLE, CA 94608.

Inventor/es: NGUYEN,STEVE H, PICHUANTES,SERGIO.

Fecha de Publicación: .

Fecha Concesión Europea: 2 de Junio de 2010.

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C07K16/10 QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › de virus ARN.
  • G01N33/569K

Clasificación PCT:

  • A01N1/00 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A01 AGRICULTURA; SILVICULTURA; CRIA; CAZA; CAPTURA; PESCA.A01N CONSERVACION DE CUERPOS HUMANOS O ANIMALES O DE VEGETALES O DE PARTES DE ELLOS (conservación de alimentos o productos alimenticios A23 ); BIOCIDAS, p. ej. EN TANTO QUE SEAN DESINFECTANTES, PESTICIDAS O HERBICIDAS (preparaciones de uso médico, dental o para el aseo que eliminan o previenen el crecimiento o la proliferación de organismos no deseados A61K ); PRODUCTOS QUE ATRAEN O REPELEN A LOS ANIMALES; REGULADORES DEL CRECIMIENTO DE LOS VEGETALES. › Conservación de cuerpos humanos o animales, o partes de ellos.
  • A01N1/02 A01N […] › A01N 1/00 Conservación de cuerpos humanos o animales, o partes de ellos. › Conservación de partes vivas.
  • A61K35/12 A […] › A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE.A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › A61K 35/00 Preparaciones medicinales que contienen sustancias de constitución indeterminada o sus productos de reacción. › Sustancias procedentes de mamíferos; Composiciones que comprenden tejidos o células indeterminadas; Composiciones que comprenden células madre no embrionarias; Células modificadas genéticamente (vacunas o preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos A61K 39/00).
  • A61K39/00 A61K […] › Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53).
  • A61K39/12 A61K […] › A61K 39/00 Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53). › Antígenos virales.
  • A61K39/295 A61K 39/00 […] › Antígenos virales polivalentes (virus de la viruela o de la varicela A61K 39/285 ); Mezclas de antígenos virales y bacterianos.
  • A61K39/395 A61K 39/00 […] › Anticuerpos (aglutininas A61K 38/36 ); Inmunoglobulinas; Inmunosuero, p. ej. suero antilinfocitario.
  • A61K39/42 A61K 39/00 […] › virales.
  • C12Q1/00 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones.
  • C12Q1/70 C12Q […] › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen virus o bacteriófagos.
  • G01N33/00 FISICA.G01 METROLOGIA; ENSAYOS.G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00.
  • G01N33/50 G01N […] › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Análisis químico de material biológico, p. ej. de sangre o de orina; Ensayos mediante métodos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas con grupos coordinadores; Ensayos inmunológicos (procedimientos de medida o ensayos diferentes de los procedimientos inmunológicos en los que intervienen enzimas o microorganismos, composiciones o papeles reactivos a este efecto, procedimientos para preparar estas composiciones, procedimientos de control sensibles a las condiciones del medio en los procedimientos microbiológicos o enzimáticos C12Q).
  • G01N7/02 G01N […] › G01N 7/00 Análisis de materiales midiendo la presión o el volumen de un gas o de un vapor. › por absorción, adsorción o combustión de los constituyentes y medida de la variación de presión o de volumen del resto.

Fragmento de la descripción:

Procedimientos y reactivos para diagnosticar la infección por hantavirus.

Campo técnico

La presente invención se refiere, en general, a los hantavirus. En particular, la invención se refiere a reactivos inmunogénicos derivados de múltiples serotipos de hantavirus, incluyendo la nucleocápside inmunogénica y polipéptidos glicoproteicos, para su uso en composiciones para diagnosticar la infección por hantavirus.

Antecedentes

Los hantavirus (Bunyaviridae: Hantavirus) son virus de ARN de sentido negativo y con envoltura lipídica. El ARN del genoma viral es tripartito, constando de tres fragmentos denominados en general S, M y L que se refieren a los fragmentos pequeño, mediano y grande del genoma, respectivamente. El segmento M codifica una proteína precursora que es procesada para formar las dos glucoproteínas de la envoltura denominadas G1 y G2. El segmento S codifica una proteína de la nucleocápside denominada N que forma la nucleocápside helicoidal filamentosa del virus y produce la respuesta humoral. El segmento L del genoma codifica una ARN polimerasa dependiente del ARN (RDRP). Se han descubierto más de 20 hantavirus distintos en asociación con roedores o insectívoros huéspedes específicos en todo el mundo. Se han publicado sus modos de transmisión a seres humanos, los reservorios naturales y las características clínicas de la infección humana (véase, p. ej., Mertz et al., Adv. Internal Med. (1997) 42:369-421).

El Síndrome Pulmonar por Hantavirus (HPS), también conocido como Síndrome Cardiopulmonar por Hantavirus (HCPS), es una enfermedad febril aguda con una tasa de mortalidad de hasta el 50%. Los pacientes se presentan con síntomas inespecíficos que progresan rápidamente hacia un edema pulmonar fulminante y un colapso cardiovascular. El agente predominante del HPS en Estados Unidos es el Virus Sin Nombre (SNV; también conocido como Virus Four Corners y Virus Muerto Canyon). (Sone et al., Lancet (1994) 344: 1637; Khan et al., J. Med. Virol (1995) 46:281-286; Kahn et al., Am. J. Med. (1996) 100:46-48; Morzunov et al., J Virol (1995) 69:1980-1983; Rollin et al., J. Med. Virol (1995) 46:35-39; Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades, Morbid. Mortal. Weekly Rep. (1993) 43:45-48). Se han asociado al menos otros tres hantavirus con el HPS en Estados Unidos, incluyendo el Virus New York (NYV), el Virus Black Creek Canal (BCV) y el Virus Bayou (BAYV).

En todo el mundo, hay un mayor número de enfermedades provocadas por hantavirus euroasiáticos que causan fiebre hemorrágica y el Síndrome Renal (HFRS). Los virus asociados al HFRS incluyen el Virus Hantaan (HTNV), Virus Puumala (PUUV), Virus Seoul (SEOV) y Virus Dobrava-Belgrade (DOBV) (Lee et al., J. Infect. Dis. (1978) 137:298-308; Lee, et al., J. Infect. Dis. (1982) 146:638-644; Lee et al., J. Infect. Dis. (1982) 146:645-651; Brummer- Korvenkontio et al., J. Infect. Dis. (1980) 141:131-134). Las manifestaciones clínicas del HFRS son generalmente más graves para las infecciones por el HTNV y el DOBV, mientras que la infección por PUUV está asociada a una forma más suave del HFRS, nefropatía epidérmica (NE), que se da en Escandinavia, Finlandia, Rusia Occidental y Europa Central. Se han publicado tasas de mortalidad de hasta el 20% por las formas más graves del HFRS.

Entre los hantavirus asociados con el HFRS, el HTNV, el SEOV y el DOBV son antigénicamente similares. Los virus asociados al HPS también están estrechamente relacionados entre sí y reaccionan de forma cruzada con el PUUV. La reactividad cruzada antigénica es más pronunciada entre las proteínas N virales. En los análisis de diagnóstico de antígenos recombinantes, el antígeno N viral es dominante frente a las glucoproteínas virales. Los anticuerpos contra el antígeno N surgen pronto en el transcurso de la infección, y se detectan universalmente en la convalecencia. Todas las personas con una infección aguda por el SNV tienen anticuerpos detectables contra el antígeno N del SNV de la clase IgM mediante la aparición de síntomas clínicos, y casi todos tienen anticuerpos IgG dirigidos contra los antígenos N y G1 (Bharadwaj et al., J. Infect. Dis. (2000) 182:43-48). Los anticuerpos contra G1 del SNV no son reactivos con los antígenos G1 de otros hantavirus (Jenison et al., J. Virol. (1994) 68:3000-3006; Hjelle et al, J. Gen. Virol. (1994) 75:2881-2888).

Los hantavirus se transmiten a los seres humanos por inhalación de aerosoles contaminados por virus de la saliva, la orina y las heces de roedores. Un trabajador puede contraer una infección por hantavirus simplemente entrando en una habitación con roedores infectados, lo que apoya enormemente la opinión imperante de que los hantavirus se transmiten por el aire. Esta observación también está apoyada por una reciente investigación epidemiológica que muestra que las exposiciones en espacios interiores son sumamente comunes. Se ha demostrado la transmisión de persona a persona para el Virus Andes (ANDV) en Argentina, y es probable que sea responsable de dos grupos familiares en Chile. El virus también se puede transmitir por mordiscos de roedores y, posiblemente, a través de la ingestión de alimentos o agua contaminados.

Todas las especies de hantavirus parecen estar fundamentalmente asociadas a un roedor huésped específico. Hay tres grandes grupos de hantavirus y están asociados a las subfamilias de roedores Murinae, Arvicolinae y Sigmondontinae. Las relaciones filogenéticas entre los roedores de estas diversas subfamilias son paralelas, para la mayor parte, a las relaciones filogenéticas y antigénicas de los virus asociados a cada reservorio en particular. Cada uno de estos grupos de hantavirus contiene una o más especies o tipos que son conocidos patógenos humanos. En la Tabla 1, se presenta la información relativa a los diversos hantavirus.

TABLA 1

TABLA 1 (continuación)

Se han hecho progresos significativos en el tratamiento de la infección por hantavirus, pero un tratamiento satisfactorio requiere que los pacientes sean diagnosticados antes del estadio preagónico inmediato de la enfermedad. Se han hecho avances en la atención terciaria que pueden reducir la mortalidad debida a la infección por hantavirus. Sin embargo, como la infección progresa muy rápido, es probable que estos avances sólo tengan efecto en el pronóstico de aquellos pacientes que puedan ser diagnosticados de la manera oportuna. Un procedimiento para la detección rápida de los anticuerpos apropiados contra hantavirus en el ámbito rural y que pudiera aplicarse en los estadios tempranos de la enfermedad podría mejorar la posibilidad de una intervención temprana.

Se han intentado aplicar varios análisis para el diagnóstico a tiempo de la infección por hantavirus. Por ejemplo, se ha empleado una variedad de formatos para el diagnóstico serológico de la infección por hantavirus, incluyendo el aglutinamiento de perlas, los análisis de inmunofluorescencia e inmunoprecipitación, usando virus cultivados en laboratorio, la inhibición de la hemoaglutinación, análisis de neutralización de la reducción de placas y focos, y formatos de ELISA (Lee et al., J. Infect. Dis. (1978) 137:298-308; Lee et al., J. Infect. Dis. (1982) 146:638-644; Lee et al., J. Infect. Dis. (1982), 146: 645-651; Lundkvist et al., Clin. Diagnos. Lab. Immunol. (1995) 2:82-56; Chu et al., Virology (1994) 198: 196-204; Elgh et al., J. Med. Virol (1995) 45: 146-150).

También se ha usado el análisis de inmunotransferencia en tiras en un intento por realizar el diagnóstico eficaz de la infección por hantavirus (véase, p. ej., Hjelle et al., J. Clin. Microbiol. (1997) 35:600-608; Bharadwaj et al., J. Infect. Dis. (2000) 182:43-48; Yee, et al., J. Wildl. Dis. (2003) 39:271-277). Sin embargo, actualmente no hay disponible un análisis universal para identificar las múltiples cepas de hantavirus.

La disponibilidad generalizada de un análisis preciso, eficaz y rápido para la infección por hantavirus sería enormemente deseable y podría salvar un número considerable de vidas.

Resumen de la invención

La presente invención proporciona un procedimiento simple, preciso y eficaz para diagnosticar...

 


Reivindicaciones:

1. Un procedimiento para detectar anticuerpos contra hantavirus en una muestra biológica que comprende:

(a) poner en contacto dicha muestra biológica con al menos seis antígenos recombinantes de hantavirus, en el que los al menos seis antígenos recombinantes de hantavirus comprenden una combinación de antígenos G1 y/o N de los serotipos de hantavirus Hantaan (HTNV), Puumala (PUUV), Seoul (SEOV), Dobrava (DOBV), Sin Nombre (SNV) y Andes (ANDV), en el que hay presente al menos un antígeno recombinante de cada uno de los serotipos, siendo la puesta en contacto realizada en condiciones que permiten que los anticuerpos contra los hantavirus, cuando están presentes en la muestra biológica, se unan con al menos uno de dichos antígenos G1 o N para formar un complejo de anticuerpo/antígeno; y
(b) detectar la presencia o la ausencia de dicho complejo de anticuerpo/antígeno, detectando así la presencia o la ausencia de anticuerpos contra hantavirus en dicha muestra.

2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que dicho(s) antígeno(s) G1 comprenden una secuencia de aminoácidos correspondiente a la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 40.

3. El procedimiento de la reivindicación 2, en el que dicho(s) antígeno(s) G1 son uno o más antígenos que comprenden una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo constituido por SEC ID N.º 14, SEC ID N.º 16, SEC ID N.º 18, SEC ID N.º 20, SEC ID N.º 22, SEC ID N.º 24, SEC ID N.º 42, SEC ID N.º 43, SEC ID N.º 44, SEC ID N.º 45, SEC ID N.º 46 y SEC ID N.º 47.

4. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que dicho(s) antígeno(s) N comprenden una secuencia de aminoácidos correspondiente a la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 39.

5. El procedimiento de la reivindicación 4, en el que dicho(s) antígeno(s) N son uno o más antígenos que comprenden una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo constituido por SEC ID N.º 26, SEC ID N.º 28, SEC ID N.º 30, SEC ID N.º 32, SEC ID N.º 34, SEC ID N.º 36, SEC ID N.º 48, SEC ID N.º 49, SEC ID N.º 50, SEC ID N.º 51, SEC ID N.º 52 y SEC ID N.º 53.

6. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que dicho(s) antígeno(s) G1 comprenden una secuencia de aminoácidos correspondiente a la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 40 y dicho(s) antígeno(s) N comprenden una secuencia de aminoácidos correspondiente a la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 39.

7. El procedimiento de la reivindicación 6, en el que dicho(s) antígeno(s) G1 son uno o más antígenos que comprenden una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo constituido por SEC ID N.º 14, SEC ID N.º 16, SEC ID N.º 18, SEC ID N.º 20, SEC ID N.º 22, SEC ID N.º 24, SEC ID N.º 42, SEC ID N.º 43, SEC ID N.º 44, SEC ID N.º 45, SEC ID N.º 46 y SEC ID N.º 47, y dicho(s) antígeno(s) N son uno o más antígenos que comprenden la secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo constituido por SEC ID N.º 26, SEC ID N.º 28, SEC ID N.º 30, SEC ID N.º 32, SEC ID N.º 34, SEC ID N.º 36, SEC ID N.º 48, SEC ID N.º 49, SEC ID N.º 50, SEC ID N.º 51, SEC ID N.º 52 y SEC ID N.º 53.

8. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que está presente al menos un antígeno G1 de cada uno de los serotipos de hantavirus HTNV, PUUV, SEOV, DOBV, SNV y ANDV, y está presente al menos un antígeno N de cada uno de los serotipos de hantavirus HTNV, PUUV, SEOV, DOBV, SNV y ANDV.

9. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1, 4 ó 5, en el que está presente al menos un antígeno N de cada uno de los serotipos de hantavirus HTNV, PUUV, SEOV, DOBV, SNV y ANDV.

10. Un equipo de análisis de inmunodiagnóstico para detectar la infección por hantavirus, equipo de análisis que comprende:

(a) al menos seis antígenos recombinantes de hantavirus, en el que los al menos seis antígenos recombinantes de hantavirus comprenden una combinación de antígenos G1 y/o N de los serotipos de hantavirus Hantaan (HTNV), Puumala (PUUV), Seoul (SEOV), Dobrava (DOBV), Sin Nombre (SNV) y Andes (ANDV), en el que está presente al menos un antígeno de cada uno de los serotipos;
(b) e instrucciones para realizar el análisis de inmunodiagnóstico.

11. El equipo de análisis de inmunodiagnóstico de la reivindicación 10, en el que dicho(s) antígeno(s) G1 comprenden una secuencia de aminoácidos correspondiente a la secuencia de aminoácidos de la SEC ID N.º 40.

12. El equipo de análisis de inmunodiagnóstico de la reivindicación 11, en el que dicho(s) antígeno(s) G1 son uno o más antígenos que comprenden una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo constituido por SEC ID N.º 14, SEC ID N.º 16, SEC ID N.º 18, SEC ID N.º 20, SEC ID N.º 22, SEC ID N.º 24, SEC ID N.º 42, SEC ID N.º 43, SEC ID N.º 44, SEC ID N.º 45, SEC ID N.º 46 y SEC ID N.º 47.

13. El equipo de análisis de inmunodiagnóstico de la reivindicación 10, en el que dicho(s) antígeno(s) N comprenden una secuencia de aminoácidos correspondiente a la secuencia de aminoácidos de la SEC ID N.º 39.

14. El equipo de análisis de inmunodiagnóstico de la reivindicación 13, en el que dicho(s) antígeno(s) N son uno o más antígenos que comprenden una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo constituido por SEC ID N.º 26, SEC ID N.º 28, SEC ID N.º 30, SEC ID N.º 32, SEC ID N.º 34, SEC ID N.º 36, SEC ID N.º 48, SEC ID N.º 49, SEC ID N.º 50, SEC ID N.º 51, SEC ID N.º 52 y SEC ID N.º 53.

15. El equipo de análisis de inmunodiagnóstico de la reivindicación 10, en el que dicho(s) antígeno(s) G1 comprenden una secuencia de aminoácidos correspondiente a la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 40 y dicho(s) antígeno(s) N comprenden una secuencia de aminoácidos correspondiente a la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 39.

16. El equipo de análisis de inmunodiagnóstico de la reivindicación 15, en el que dicho(s) antígeno(s) G1 son uno o más antígenos que comprenden una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo constituido por SEC ID N.º 14, SEC ID N.º 16, SEC ID N.º 18, SEC ID N.º 20, SEC ID N.º 22, SEC ID N.º 24, SEC ID N.º 42, SEC ID N.º 43, SEC ID N.º 44, SEC ID N.º 45, SEC ID N.º 46 y SEC ID N.º 47, y dicho(s) antígeno(s) N son uno o más antígenos que comprenden la secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo constituido por SEC ID N.º 26, SEC ID N.º 28, SEC ID N.º 30, SEC ID N.º 32, SEC ID N.º 34, SEC ID N.º 36, SEC ID N.º 48, SEC ID N.º 49, SEC ID N.º 50, SEC ID N.º 51, SEC ID N.º 52 y SEC ID N.º 53.

17. El equipo de análisis de inmunodiagnóstico de una cualquiera de las reivindicaciones 10-16, en el que está presente al menos un antígeno G1 de cada uno de los serotipos de hantavirus HTNV, PUUV, SEOV, DOBV, SNV y ANDV, y está presente al menos un antígeno N de cada uno de los serotipos de hantavirus HTNV, PUUV, SEOV, DOBV, SNV y ANDV.

18. El equipo de análisis de inmunodiagnóstico de una cualquiera de las reivindicaciones 10, 13 ó 14, en el que está presente al menos un antígeno N de cada uno de los serotipos de hantavirus HTNV, PUUV, SEOV, DOBV, SNV y ANDV.

19. Un procedimiento para detectar antígenos de hantavirus en una muestra biológica que comprende:

(a) poner en contacto dicha muestra biológica con al menos seis anticuerpos diferentes, en el que cada uno de dichos anticuerpos es específico de al menos uno de los seis antígenos de hantavirus, en el que los seis antígenos de hantavirus comprenden una combinación de antígenos G1 y/o N de los serotipos de hantavirus Hantaan (HTNV), Puumala (PUUV), Seoul (SEOV), Dobrava (DOBV), Sin Nombre (SNV) y Andes (ANDV), en el que está presente al menos un anticuerpo específico de al menos un antígeno de cada uno de los serotipos, siendo la puesta en contacto realizada en condiciones que permiten que los antígenos de hantavirus, cuando están presentes en la muestra biológica, se unan con dichos anticuerpos para formar un complejo de anticuerpo/antígeno; y
(b) detectar la presencia o la ausencia de dicho complejo de anticuerpo/antígeno, detectando así la presencia o la ausencia de antígenos de hantavirus en dicha muestra.

20. El procedimiento de la reivindicación 19, en el que dichos anticuerpos son anticuerpos monoclonales.

21. Un equipo de análisis de inmunodiagnóstico para detectar la infección por hantavirus, equipo de análisis que comprende:

(a) al menos seis anticuerpos diferentes, en el que cada uno de dichos anticuerpos es específico de al menos uno de los seis antígenos de hantavirus, en el que los seis antígenos de hantavirus comprenden una combinación de antígenos G1 y/o N de los serotipos de hantavirus Hantaan (HTNV), Puumala (PUUV), Seoul (SEOV), Dobrava (DOBV), Sin Nombre (SNV) y Andes (ANDV), en el que está presente al menos un anticuerpo específico de al menos un antígeno de cada uno de los serotipos; y
(b) instrucciones para realizar el análisis de inmunodiagnóstico.

22. El equipo de análisis de inmunodiagnóstico de la reivindicación 21, en el que dichos anticuerpos son anticuerpos monoclonales.

23. Un soporte sólido que comprende al menos seis antígenos recombinantes de hantavirus, en el que los al menos seis antígenos recombinantes de hantavirus comprenden una combinación de antígenos G1 y/o N de los serotipos de hantavirus Hantaan (HTNV), Puumala (PUUV), Seoul (SEOV), Dobrava (DOBV), Sin Nombre (SNV) y Andes (ANDV), en el que está presente al menos un antígeno de cada uno de los serotipos.

24. El soporte sólido de la reivindicación 23, en el que dicho(s) antígeno(s) G1 comprenden una secuencia de aminoácidos correspondiente a la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 40.

25. El soporte sólido de la reivindicación 24, en el que dicho(s) antígeno(s) G1 son uno o más antígenos que comprenden una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo constituido por SEC ID N.º 14, SEC ID N.º 16, SEC ID N.º 18, SEC ID N.º 20, SEC ID N.º 22, SEC ID N.º 24, SEC ID N.º 42, SEC ID N.º 43, SEC ID N.º 44, SEC ID N.º 45, SEC ID N.º 46 y SEC ID N.º 47.

26. El soporte sólido de la reivindicación 23, en el que dicho(s) antígeno(s) N comprenden una secuencia de aminoácidos correspondiente a la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 39.

27. El soporte sólido de la reivindicación 26, en el que dicho(s) antígeno(s) N son uno o más antígenos que comprenden una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo constituido por SEC ID N.º 26, SEC ID N.º 28, SEC ID N.º 30, SEC ID N.º 32, SEC ID N.º 34, SEC ID N.º 36, SEC ID N.º 48, SEC ID N.º 49, SEC ID N.º 50, SEC ID N.º 51, SEC ID N.º 52 y SEC ID N.º 53.

28. El soporte sólido de la reivindicación 23, en el que dicho(s) antígeno(s) G1 comprenden una secuencia de aminoácidos correspondiente a la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 40 y dicho(s) antígeno(s) N comprenden una secuencia de aminoácidos correspondiente a la secuencia de aminoácidos de SEC ID N.º 39.

29. El soporte sólido de la reivindicación 28, en el que dicho(s) antígeno(s) G1 son uno o más antígenos que comprenden una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo constituido por SEC ID N.º 14, SEC ID N.º 16, SEC ID N.º 18, SEC ID N.º 20, SEC ID N.º 22, SEC ID N.º 24, SEC ID N.º 42, SEC ID N.º 43, SEC ID N.º 44, SEC ID N.º 45, SEC ID N.º 46 y SEC ID N.º 47, y dicho(s) antígeno(s) N son uno o más antígenos que comprenden la secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo constituido por SEC ID N.º 26, SEC ID N.º 28, SEC ID N.º 30, SEC ID N.º 32, SEC ID N.º 34, SEC ID N.º 36, SEC ID N.º 48, SEC ID N.º 49, SEC ID N.º 50, SEC ID N.º 51, SEC ID N.º 52 y SEC ID N.º 53.

30. El soporte sólido de una cualquiera de las reivindicaciones 23-29, en el que está presente al menos un antígeno G1 de cada uno de los serotipos de hantavirus HTNV, PUUV, SEOV, DOBV, SNV y ANDV, y está presente al menos un antígeno N de cada uno de los serotipos de hantavirus HTNV, PUUV, SEOV, DOBV, SNV y ANDV.

31. El soporte sólido de una cualquiera de las reivindicaciones 23, 26 ó 27 en el que está presente al menos un antígeno N de cada uno de los serotipos de hantavirus HTNV, PUUV, SEOV, DOBV, SNV y ANDV.

32. El soporte sólido de una cualquiera de las reivindicaciones 23-31, soporte sólido que es una tira de nitrocelulosa.

33. Un equipo de análisis de inmunodiagnóstico para detectar hantavirus, equipo de análisis que comprende:

(a) un soporte sólido según una cualquiera de las reivindicaciones 23-32; y
(b) instrucciones para realizar el análisis de inmunodiagnóstico.

34. Un procedimiento para detectar la presencia de anticuerpos contra hantavirus en una muestra biológica, procedimiento que comprende:

(a) proporcionar una muestra biológica;
(b) proporcionar un soporte sólido según una cualquiera de las reivindicaciones 23-32;
(c) poner en contacto dicha muestra biológica con dicho soporte sólido, en condiciones que permiten a los anticuerpos contra hantavirus, si están presentes en la muestra biológica, unirse con al menos uno de los antígenos de hantavirus para formar un complejo de anticuerpo/antígeno; y
(d) detectar la presencia del complejo de anticuerpo/antígeno, detectando así la presencia de los anticuerpos contra hantavirus en la muestra biológica.

35. El procedimiento de la reivindicación 34 que comprende además:

(e) eliminar los anticuerpos contra hantavirus sin unir;
(f) proporcionar uno o más restos capaces de asociarse con dicho complejo de anticuerpo/antígeno; y
(g) detectar la presencia de dicho uno o más restos,

detectando así la presencia de los anticuerpos contra hantavirus en la muestra biológica.

36. El procedimiento de la reivindicación 35, en el que dichos uno o más restos comprenden un antígeno de hantavirus marcado detectablemente.

37. El procedimiento de la reivindicación 36, en el que el marcador detectable es una enzima.

38. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-9, 19, 20 y 34-37, en el que dicha muestra biológica procede de una muestra de sangre humana.

39. Un procedimiento para preparar un flujo sanguíneo que comprende sangre entera, plaquetas, plasma o suero, sustancialmente libre de hantavirus que comprende:

(a) rastrear alícuotas de sangre entera, plaquetas, plasma o suero de las muestras sanguíneas recogidas mediante el procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1-9, 19, 20 y 34-37;
(b) eliminar cualquier muestra en la que se detecte un antígeno de hantavirus o un anticuerpo contra un hantavirus; y (c) combinar las muestras en las que no se detecte un antígeno de hantavirus ni un anticuerpo contra un hantavirus para proporcionar un flujo sanguíneo sustancialmente libre de hantavirus.

 

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