Procedimientos de diagnóstico del síndrome del intestino irritable.

Un procedimiento de ayuda en el diagnóstico del síndrome del intestino irritable (SII) en un sujeto,

comprendiendo dicho procedimiento:

(a) poner en contacto una muestra de sangre o de suero del sujeto con un resto de unión a α-triptasa en condiciones adecuadas para transformar la α-triptasa presente en la muestra en un complejo que comprende α- triptasa y el resto de unión a α-triptasa; y

(b) determinar el nivel de dicho complejo, determinando así el nivel de α-triptasa presente en la muestra.

Procedimientos de diagnóstico del síndrome del intestino irritable ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

El síndrome del intestino irritable (Sil) es el más común de todos los trastornos gastrointestinales, afectando al 1- 2 % de la población general y representando más del 5 % de todos los pacientes con dolencias digestivas. Sin embargo, estudios sugieren que solo aproximadamente del 1 % al 5 % de aquellos afectados con Sil buscan en realidad atención médica. Los pacientes con Sil presentan síntomas dispares tales como, por ejemplo, dolor abdominal predominantemente relacionado con la defecación, diarrea, estreñimiento o alternando diarrea y estreñimiento, distensión abdominal, gases y excesivo moco en las heces. Más del 4 % de todos los pacientes con Sil tienen síntomas tan graves que tienen que ausentarse del trabajo, restringir su vida social, evitar relaciones sexuales, cancelar citas, dejar de viajar, tomar medicación e Incluso permanecer confinados en su casa por miedo a la vergüenza. El coste estimado de la asistencia sanitaria del Sil en los Estados Unidos es de 8 mil millones de dólares por año (Talley etál., Gastroenterol., 19:1736-1741 (1995)).

No se comprende bien la patoflslología precisa del Sil. Sin embargo, hay una elevada sensibilidad a la percepción de dolor visceral, conocida como sensibilización periférica. Esta sensibilización implica una reducción en el umbral y un aumento en la obtención de los procesos de transducción de neuronas aferentes primarias, atribulóle a una variedad de mediadores que incluyen monoamlnas (por ejemplo, catecolaminas e indolaminas), sustancia P, y una variedad de citocinas y prostanoides tales como prostaglandlnas tipo E (véase, por ejemplo, Mayer et ál., Gastroenterol., 17:271-293 (1994)). También participa en la etlopatología del Sil la disfunción motora Intestinal, que conduce a la manipulación anormal de contenidos ¡ntralumlnales y/o gas (véase, por ejemplo, Kellow et ál., Gastroenterol., 92:1885-1893 (1987); Levltt et ál., Ann. Int. Med., 124:422-424 (1996)). Los factores psicológicos también pueden contribuir a síntomas del Sil apareciendo conjuntamente con, si no son desencadenados por, perturbaciones que Incluyen depresión y ansiedad (véase, por ejemplo, Drossman et ál., Gastroenterol. Int., 8:47-9 (1995)).

No se comprenden bien las causas del Sil. Las paredes de los Intestinos están revestidas con capas de músculo que se contraen y se relajan a medida que mueven la comida del estómago a través del tubo intestinal al recto. Normalmente, estos músculos se contraen y se relajan en un ritmo coordinado. En pacientes con Sil, estas contracciones son normalmente más fuertes y duran más de lo normal. Como resultado, la comida es obligada a pasar por los intestinos más rápidamente en algunos casos causando gases, hinchazón y diarrea. En otros casos se produce lo opuesto: el paso de alimentos se ralentiza y las heces se endurecen y secan causando estreñimiento.

Queda por elucidar la patofisiología precisa del Sil. Mientras que la dismotilidad Intestinal y la percepción visceral alterada se consideran contribuyentes importantes a la patogénesis del síntoma (Quigley, Scand. J. Gastroenterol., 38(Suppl. 237):1-8 (23); Mayer et ál., Gastroenterol., 122:232-248 (22)), esta afección se ha considerado ahora generalmente como un trastorno del eje cerebro-intestinal. Recientemente también se han propuesto funciones de infección entérica e inflamación intestinal. Estudios han documentado la aparición de Sil tras gastroenteritis bacteriológicamente confirmada, mientras que otros han proporcionado pruebas de Inflamación de la mucosa de bajo grado (Spiller et ál., Gut, 47:84-811 (2); Dunlop et ál., Gastroenterol., 125:1651-1659 (23); Cumberland et ál., Epidemiol. Infect., 13:453-46 (23)) e inmunoactivación (Gwee et ál., Gut, 52:523-526 (23); Pimentel et ál., Am. J. Gastroenterol., 95:353-356 (2)) en Sil. La flora entérica también participa, y un estudio reciente demostró la eficacia del organismo probiótico Bifidobacterium en el tratamiento del trastorno mediante modulación de la actividad inmune (O'Mahony etál., Gastroenterol., 128:541-551 (25)).

El eje hipotalámico-hipofisario-adrenal (HPA) es el sistema de estrés endocrino central en los seres humanos (De Wied et ál., Front. Neuroendocrinol., 14:251-32 (1993)) y proporciona una conexión importante entre el cerebro y el sistema inmunitario intestinal. La activación del eje tiene lugar en respuesta a tanto estresantes físicos como psicológicos (Dinan, Br. J. Psychiatry, 164:365-371 (1994)), ambos de los cuales participan en la patofisiología del Sil (Cumberland et ál., Epidemiol. Infecí., 13:453-46 (23)). Se ha informado que los pacientes con Sil tienen una elevada tasa de abuso sexual y físico en la infancia junto con mayores tasas de acontecimientos estresantes de la vida en la adultez (Gaynes et ál., Baillieres Clin. Gastroenterol., 13:437-452 (1999)). Tal traumatismo psicosocial o mala estrategia de afrontamiento cognitivo afecta profundamente la gravedad de los síntomas, el funcionamiento diario y el desenlace de salud.

Aunque la etiología del Sil no se ha caracterizado completamente, la comunidad médica ha desarrollado una definición y criterios consenso, conocidos como los criterios de Roma II, para ayudar en el diagnóstico del Sil basándose en la historia del paciente. Los criterios de Roma II requieren tres meses de dolor o molestia abdominal continua o recurrente durante un periodo de un año que se alivia por defecación y/o se asocia a un cambio en la frecuencia de defecación o consistencia de las heces, además de dos o más de los siguientes: frecuencia de defecación alterada, forma de las heces alterada, defecación alterada, paso de moco, o hinchazón y distensión abdominal. La ausencia de cualquier trastorno estructural o bioquímico que pudiera estar causando los síntomas también es una afección necesaria. Como resultado, los criterios de Roma II solo pueden usarse cuando hay una

historia del paciente sustancial y es fidedigno solo cuando no hay anatomía intestinal anormal o proceso metabólico que explicara de otro modo los síntomas. Similarmente, los criterios de Roma II desarrollados recientemente por la comunidad médica pueden usarse solo cuando hay presentación de un conjunto específico de síntomas, una historia del paciente detallada y un examen físico.

Está bien documentado que el diagnosticar un paciente como que tiene Sil puede ser desafiante debido a la similitud en los síntomas entre Sil y otras enfermedades o trastornos. En realidad, debido a que los síntomas de Sil son similares o idénticos a los síntomas de tantas otras enfermedades intestinales, puede durar años antes de que se haga un diagnóstico correcto. Por ejemplo, los pacientes que tienen enfermedad inflamatoria del intestino (Eli), pero que presentan signos y síntomas leves tales como hinchazón, diarrea, estreñimiento y dolor abdominal, pueden ser difíciles de distinguir de pacientes con Sil. Como resultado, la similitud en los síntomas entre Sil y Eli dificulta el diagnóstico rápido y preciso. La dificultad en diagnosticar diferencialmente Sil y Eli obstaculiza el tratamiento temprano y eficaz de estas enfermedades. Desafortunadamente, actualmente no están disponibles procedimientos de diagnóstico rápidos y precisos para distinguir definitivamente el Sil de otras enfermedades o trastornos intestinales que presentan síntomas similares. La presente invención satisface esta necesidad y también proporciona ventajas relacionadas.

BREVE RESUMEN DE LA INVENCIÓN

La presente invención proporciona procedimientos, ensayos, sistemas y código para clasificar con exactitud si una muestra de un individuo está asociada o no a síndrome del intestino irritable (Sil). Como ejemplo no limitante, la presente invención es útil para clasificar una muestra de un individuo como una muestra de Sil usando un algoritmo estadístico y/o datos empíricos. Similarmente, la presente invención también proporciona procedimientos, ensayos, sistemas y código que ayuda en el diagnóstico del síndrome del intestino irritable (Sil) en un sujeto. La presente invención también es útil para descartar una o más enfermedades o trastornos que presentan síntomas similares al Sil y confirmar Sil usando una combinación de algoritmos estadísticos y/o datos empíricos. Así, la presente invención proporciona una predicción de diagnóstico precisa de Sil e información de pronóstico útil para orientar en las decisiones de tratamiento.

En un aspecto, la presente invención proporciona un procedimiento de ayuda en el diagnóstico del síndrome del intestino irritable (Sil) en un sujeto, comprendiendo el procedimiento: (a) poner en contacto una muestra de sangre o suero... [Seguir leyendo]

1.- Un procedimiento de ayuda en el diagnóstico del síndrome del intestino irritable (Sil) en un sujeto, comprendiendo dicho procedimiento:

(a) poner en contacto una muestra de sangre o de suero del sujeto con un resto de unión a p-triptasa en condiciones adecuadas para transformar la p-triptasa presente en la muestra en un complejo que comprende p- triptasa y el resto de unión a p-triptasa; y

(b) determinar el nivel de dicho complejo, determinando así el nivel de p-triptasa presente en la muestra.

2.- El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el procedimiento comprende además:

(c) comparar el nivel de p-triptasa presente en la muestra con un nivel de control, en el que el nivel de control es el nivel de p-triptasa presente en una muestra de sangre o de suero de un sujeto sano, en el que un elevado nivel de p- triptasa presente en la muestra con respecto al nivel de control es indicativo de una elevada probabilidad de que dicho sujeto tenga Sil, y/o en el que el mismo nivel o un nivel reducido de p-triptasa presente en la muestra con respecto al nivel de control es indicativo de una elevada probabilidad de que dicho sujeto no tenga Sil.

3.- El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el procedimiento comprende además:

(c) comparar el nivel de p-triptasa presente en la muestra con un nivel de control, en el que el nivel de control es el nivel de p-triptasa presente en una muestra de sangre o de suero de un sujeto con Sil, en el que el mismo nivel o un nivel elevado de p-triptasa presente en la muestra con respecto al nivel de control es indicativo de una elevada probabilidad de que dicho sujeto tenga Sil, y/o

en el que un nivel reducido de p-triptasa presente en la muestra con respecto al nivel de control es indicativo de una elevada probabilidad de que dicho sujeto no tenga Sil.

4.- El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el procedimiento comprende además determinar el nivel de histamina y/o prostaglandina E2 (PGE2) presente en la muestra.

- El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que se sospecha que el sujeto tiene Sil.

6 - El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el resto de unión comprende un anticuerpo, en el que el procedimiento es preferentemente un enzimoinmunoanálisis de adsorción (ELISA), más preferentemente un ELISA de sándwich, en el que el ELISA de sándwich comprende opcionalmente el uso de un anticuerpo anti-triptasa conjugado con fosfatasa alcalina como anticuerpo de detección y un sustrato luminiscente que contiene CPSD para potenciar la sensibilidad del ensayo.

7 - Un procedimiento de monitorización de la progresión o regresión del síndrome del intestino irritable (Sil) en un sujeto, comprendiendo el procedimiento:

(a) poner en contacto una primera muestra de sangre o de suero tomada del sujeto en un primer momento con un resto de unión a p-triptasa en condiciones adecuadas para transformar la p-triptasa presente en la muestra en un complejo que comprende p-triptasa y el resto de unión a p-triptasa;

(b) determinar el nivel de dicho complejo, determinando así el nivel de p-triptasa presente en la primera muestra;

(c) poner en contacto una segunda muestra de sangre o de suero tomada del sujeto en un segundo momento con un resto de unión a p-triptasa en condiciones adecuadas para transformar la p-triptasa presente en la muestra en un complejo que comprende p-triptasa y el resto de unión a p-triptasa;

(d) determinar el nivel de dicho complejo, determinando así el nivel de p-triptasa presente en la segunda muestra; y

(e) comparar el nivel de p-triptasa presente en la primera muestra con el nivel de p-triptasa presente en la segunda muestra, en el que un mayor nivel de p-triptasa en la segunda muestra con respecto a la primera muestra es indicativo de la progresión de Sil en el sujeto y un menor nivel de p -triptasa en la segunda muestra con respecto a la primera muestra es indicativo de la regresión de Sil en el sujeto, en el que el procedimiento comprende opcionalmente además determinar el nivel de histamina y/o prostaglandina E2 (PGE2) presente en las muestras.

8.- El procedimiento según la reivindicación 7, en el que el procedimiento comprende monitorizar la eficacia del fármaco en un sujeto que recibe un fármaco útil para tratar síndrome del intestino irritable (Sil).

9.- El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el procedimiento comprende además determinar el nivel de al menos un biomarcador adicional en una muestra biológica del sujeto, el

biomarcador seleccionado del grupo que consiste en factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF), lipocalina asociada a gelatinasa de neutrófilos (NGAL), inductor débil de la apoptosis relacionado con TNF (TWEAK), oncogén alfa relacionado con el crecimiento (GRO-a), interleucina-1 beta (IL-1 (3), inhibidor tisular de la metaloproteinasa-1 (TIMP-1), anticuerpo anti-Saccharomyces cerevisiae (AS CA-lgA), anticuerpo anti-CBir-1 (CBirl), anticuerpo anti- neutrófilos citoplásmicos humanos (ANCA), IgA anti-transglutaminasa tisular humana (tTG), y una combinación de los mismos, en el que dicha muestra biológica está seleccionada preferentemente del grupo que consiste en suero, plasma, sangre completa y heces.

1.- El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el procedimiento comprende además determinar un perfil de síntomas para el sujeto, en el que dicho perfil de síntomas se determina identificando la presencia o gravedad de al menos un síntoma en dicho sujeto, en el que dicho al menos un síntoma está seleccionado preferentemente del grupo que consiste en dolor torácico, molestias torácicas, ardor de estómago, saciedad molesta después de haber tenido una comida de tamaño normal, incapacidad para terminar una comida de tamaño normal, dolor abdominal, molestia abdominal, estreñimiento, diarrea, hinchazón, distensión abdominal, pensamientos o sentimientos negativos asociados a tener dolor o molestia, y una combinación de los mismos, en el que el procedimiento comprende preferentemente el uso de un algoritmo basado en el nivel de un biomarcador de Sil, en el que el algoritmo se basa preferentemente adicionalmente en el perfil de síntomas, en el que dicho algoritmo comprende preferentemente un algoritmo estadístico, en el que dicho algoritmo estadístico comprende preferentemente un sistema de aprendizaje de clasificadores estadísticos o una combinación de al menos dos sistemas de aprendizaje de clasificadores estadísticos, en el que la combinación de al menos dos sistemas de aprendizaje de clasificadores estadísticos comprende preferentemente un clasificador de bosques aleatorios y un clasificador de redes neuronales.

11- El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el procedimiento comprende proporcionar una probabilidad de que el sujeto tiene Sil.

12 - El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el procedimiento comprende además clasificar un diagnóstico de Sil como Sil-estreñimiento (Sll-E), Sil-diarrea (Sll-D), Sil-mixto (Sll- M), Sil-alterno (SIl-A) o Sil post-infeccioso (SII-PI).

13 - El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que dicho procedimiento comprende además diagnosticar el sujeto que no tiene Sil como que tiene Eli, como que no tiene Eli, o como que es un sujeto sano.

14 - El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la etapa (a) comprende

(a) recubrir una superficie en fase sólida con un primer anticuerpo de captura anti-p-triptasa;

(b) poner en contacto la superficie en fase sólida con una muestra de sangre o de suero en condiciones adecuadas para transformar la p-triptasa presente en la muestra en un complejo que comprende p-triptasa y el anticuerpo de captura anti-p-triptasa;

(c) poner en contacto la p-triptasa y el complejo de anti-p-triptasa con un segundo anticuerpo de detección conjugado con fosfatasa alcalina en condiciones adecuadas para formar un complejo ternario; y

(d) poner en contacto el complejo ternario con un sustrato luminiscente de CPSD, en el que el límite de detección de p-triptasa en la muestra de sangre o de suero es preferentemente inferior a aproximadamente 1 pg/ml, más preferentemente inferior a aproximadamente 25 pg/ml