Una inmunoglobulina aislada que actúa como mediador en la lesión de tejidos posterior a una reperfusión,

o parte de unión a antígeno de la misma, que tiene una CDR1 de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 4 y una CDR2 de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 6

Procedimiento y composiciones para inhibir la lesión por reperfusión mediada por inmunoglobulina.

Antecedentes de la invención

El sistema del complemento participa tanto en la inmunidad innata como en la inmunidad adaptativa (Muller-Eberhard, H.J. (1988) Ann. Rev. Biochem. 57, 321-347; Carroll, M.C. (1998) Ann. Rev. Immunol 16, 545-568; Fearon y col., (1995) Annu. Rev. Immunol 13, 127-149). Estudios recientes que usan ratones deficientes en componentes específicos del complemento del suero o receptores del complemento (por ejemplo, CD21/CD35) no sólo han confirmado muchos papeles conocidos del complemento, sino que han proporcionado nuevas perspectivas sobre mecanismos importantes en la inmunidad natural y adaptativa (Carroll, M.C. (1998) supra). Por ejemplo, un mecanismo por medio del cual el complemento potencia la generación de respuestas de memoria a antígenos dependientes de células T es mediando una señal de supervivencia en células B del centro germinal (CG) a través del co-receptor CD21/CD19/Tapa-1. Como alternativa, los ratones deficientes han sido importantes para confirmar la importancia de identificar la ruta clásica como esencial para la inducción de lesiones (Weiser y col., (1996) J. Exp. Med. 1857-1864).

La lesión por isquemia-reperfusión (I/R) se refiere a una lesión inflamatoria en el endotelio y tejidos del parénquima subyacentes después de la reperfusión de tejidos hipóxicos. Es un síndrome general que es responsable tanto de la lesión aguda como de la lesión crónica en diversos tejidos que incluyen, por ejemplo, el miocardio, sistema nervioso central, extremidades inferiores e intestino. La lesión por isquemia-reperfusión puede producir necrosis y lesiones celulares irreversibles. Por ejemplo, la reperfusión del músculo esquelético isquémico produce una lesión en las células endoteliales caracterizada por fuga vascular con edema de permeabilidad (Weiser y col., (1996) J. Exp. Med. 1857-1864) y la reperfusión del intestino delgado conduce a la destrucción de la mucosa (Williams, y col., (1999) J. Appl. Physiol., 938-942). En general, cuanto mayor es el periodo de isquemia más pronunciada es la respuesta inflamatoria. El grado de lesión por I/R también se determina por factores tales como el tamaño de la región isquémica y los tejidos particulares implicados (Williams, y col., (1999) J. Appl.Physiol., 93 8-942).

Un mediador importante de la lesión por I/R es el sistema del complemento. Weisman y col. informaron sobre un mecanismo para bloquear parcialmente la lesión por I/R usando un inhibidor soluble del complemento C3b (sCR1) en un modelo cardiaco de rata (Weisman y col. (1990) Science 249, 146-151). El receptor CR1 soluble es muy eficaz para inactivar la C3 convertasa, es decir, el complejo enzimático que convierte C3 nativo en su forma C3b activa. El receptor CR1 actúa tanto como cofactor en la escisión por el factor I de C3b como en el desplazamiento de C3b de la convertasa. La inyección intravenosa en ratones de sCR1 antes de la inducción de isquemia redujo significativamente la lesión tras la reperfusión de los animales tratados. El examen histológico de los animales tratados reveló una reducción en el nivel de deposición del complemento en el músculo cardíaco y en el grado de lesión en el tejido (Weisman y col. (1990) supra). Se obtuvieron resultados similares pretratando ratones con sCR1 en un modelo de lesión en extremidades inferiores (Hill y col. (1992) J. Immunol. 149, 1723-1730). En este modelo, se bloqueó el flujo sanguíneo a la extremidad inferior durante aproximadamente 2 horas poniendo un torniquete en la extremidad inferior. Antes de restablecer el flujo sanguíneo a los tejidos, a los ratones se les administró albúmina radioyodada por vía intravenosa como marcador de permeabilidad.

Aunque estos estudios determinan que la lesión estaba mediada por el complemento no trataban la cuestión del mecanismo de inicio de la lesión. Weiser y col. han demostrado que los ratones deficientes en anticuerpo están parcialmente protegidos de la lesión en el modelo de extremidad inferior. La lesión se restaura por reconstitución con suero de ratón normal. Williams y col. ampliaron esta observación al modelo de intestino delgado y demostraron que la IgM purificada era suficiente para restaurar la lesión en los ratones deficientes en anticuerpo.

Hechtman y col. (1998), FASEB Journal Volumen 12, página a34, examinaron el papel de IgM procedente de células B1-a de un modelo murino de isquemia-reperfusión intestinal. Concluyeron que la lesión local después de la isquemia-reperfusión intestinal depende de la IgM natural procedente de células B1-a peritoneales.

Austin y col. (1998) Surgical Forum, Volumen 49, páginas 341-342 compararon la respuesta de ratones de tipo silvestre a la isquemia-reperfusión intestinal con ratones deficientes en células B1 peritoneales, y determinaron que la IgM derivada de células B1 peritoneales media la lesión local después de la isquemia-reperfusión intestinal.

Sumario de la invención

La presente invención se basa, en parte, en la identificación de inmunoglobulinas (Ig) patógenas, en particular IgM patógenas, que reconocen un antígeno específico de isquemia. Sin quedar ligado a teoría alguna, se cree que la unión de estas IgM patógenas a un antígeno específico de isquemia desencadena, entre otras cosas, la activación de la ruta del complemento, lo cual finalmente tiene como resultado una lesión por reperfusión o isquémica. Los solicitantes también descubrieron que las IgM patógenas se producen por una subpoblación de células B, denominadas en la presente memoria "células B-1":

La presente invención proporciona una inmunoglobulina aislada que actúa de mediador en lesiones tisulares después de la reperfusión, de acuerdo con la reivindicación 1.

Por consiguiente, también se describe un procedimiento para tratar o prevenir una lesión por reperfusión o isquémica mediada por inmunoglobulina en un sujeto, que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un inhibidor de una interacción entre una inmunoglobulina patógena, por ejemplo, una IgM patógena, y un antígeno específico de isquemia, con lo que se reduce el número de inmunoglobulinas patógenas unidas al antígeno específico de isquemia, de tal forma que se inhibe o se reduce la lesión.

En una realización preferida, la lesión por reperfusión o isquémica se produce después de un episodio natural, por ejemplo, como un ictus. La lesión por reperfusión o isquémica puede producirse durante y/o después de un procedimiento quirúrgico. Los procedimientos quirúrgicos ejemplares que produce la lesión incluyen una técnica correctiva de vasos seleccionada entre el grupo consistente en angioplastia, procedimiento de colocación de endoprótesis vascular, aterectomía y cirugía de revascularización. En una realización preferida, la lesión por reperfusión o isquemia se produce en un tejido cardiovascular, por ejemplo, el corazón.

Preferentemente, el inhibidor antagoniza la inmunoglobulina patógena mediante una o más de las siguientes actividades: (i) inhibe o reduce una interacción (por ejemplo, unión) entre la inmunoglobulina patógena y el antígeno específico de isquemia; (ii) inhibe o reduce una interacción (por ejemplo, unión) entre la inmunoglobulina patógena y un componente de la ruta del complemento; (iii) neutraliza la inmunoglobulina patógena, por ejemplo secuestrando la inmunoglobulina y/o fijando como objetivo su degradación; o (iv) inhibe o reduce la producción de la inmunoglobulina patógena, por ejemplo, bloquea la síntesis, ensamblaje y/o modificaciones postraduccionales del anticuerpo patógeno. El inhibidor puede ser una proteína o un péptido; una molécula pequeña; un anticuerpo o un fragmento del mismo, por ejemplo, un anticuerpo anti-idiotípico; un carbohidrato; o una glicoproteína. En otra realización preferida, el inhibidor puede ser un anticuerpo modificado como se describe en la presente memoria. En una realización preferida, el inhibidor se administra en una o en exposiciones secuenciales durante un periodo de horas, días, semanas, meses o años. El inhibidor puede administrarse antes, durante y/o después de un episodio natural que produce la lesión. El inhibidor también puede administrarse antes, durante y/o después de un procedimiento quirúrgico, por ejemplo un procedimiento quirúrgico asociado con lesión por reperfusión o isquémica. En una realización preferida, el inhibidor se administra en combinación con otros agentes terapéuticos, por ejemplo, un agente anti-coagulación, un inhibidor del complemento.

En...

1. Una inmunoglobulina aislada que actúa como mediador en la lesión de tejidos posterior a una reperfusión, o parte de unión a antígeno de la misma, que tiene una CDR1 de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 4 y una CDR2 de cadena pesada que comprende la SEC ID Nº: 6.

2. La inmunoglobulina aislada de la reivindicación 1, que es una IgM.

3. La inmunoglobulina aislada de la reivindicación 1, que se produce por células B-1.

4. La inmunoglobulina aislada de la reivindicación 1, que tiene una mutación que altera la unión o actividad del complemento.

5. Una célula huésped que produce la inmunoglobulina aislada de las reivindicaciones 1 ó 4.

6. La célula huésped de la reivindicación 5 que es una célula huésped de mamífero.