Un procedimiento para diagnosticar la presencia de un cáncer gástrico en un mamífero,

comprendiendo el procedimiento la detección de si el gen c-Myb está amplificado en una muestra gástrica de ensayo del mamífero en relación con una muestra control, donde la amplificación del gen c-Myb indica la presencia de cáncer gástrico en el mamífero

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a procedimientos y composiciones para el diagnóstico y tratamiento de cánceres asociados con la amplificación génica.

ANTECEDENTES

El cáncer se caracteriza por un aumento en el número de células anómalas, o neoplásicas, derivadas de un tejido normal que proliferan y, en determinadas circunstancias, invaden tejidos adyacentes y finalmente se metastatizan a través de la sangre o del sistema linfático. La alteración de la expresión génica está íntimamente relacionada con el crecimiento celular incontrolado y la desdiferenciación, que son características frecuentes del cáncer. Determinados cánceres se caracterizan por la sobreexpresión de determinados genes, es decir, oncogenes. Un mecanismo bien conocido de la sobreexpresión génica en las células cancerígenas es la amplificación génica. La amplificación génica es un proceso en el que se producen múltiples copias de uno o más genes en el cromosoma de una célula. En ciertos casos, el proceso implica la replicación no programada de la región del cromosoma que contiene estos genes, seguida de la recombinación de los segmentos replicados de nuevo dentro del cromosoma (Alitalo y col., Adv. Cancer Res., 47:235-281 [1986]). En determinados casos, la sobreexpresión de un gen se correlaciona con la amplificación génica, es decir, es proporcional al número de copias producidas.

La amplificación y/o sobreexpresión de determinados protooncogenes, es decir, aquellos que codifican factores de crecimiento y receptores de los factores de crecimiento, tiene una función importante en la patogénesis de diversas enfermedades neoplásicas humanas. En determinadas circunstancias, la amplificación y/o sobreexpresión se asocian con formas más malignas del cáncer y, por tanto, pueden predecir el resultado clínico (Schwab y col., Genes Chromosomes Cancer, 1:181-193 [1990]; Alitalo y col., supra). Por ejemplo, el gen humano erbB2 (también conocido como her2 o c-erbB-2), que codifica un receptor glicoproteína transmembrana 185 kd (p185HER2 o HER2) relacionado con el receptor del factor de crecimiento epidérmico EGFR, se sobreexpresa en aproximadamente el 25% a 30% de los cánceres de mama humanos (Slamon y col., Science, 235:177-182 [1987]; Slamon y col., Science, 244:707-712 [1989]). La sobreexpresión de erbB2 se considera un factor de predicción de un mal pronóstico, especialmente en pacientes con enfermedad primaria que afecta a los ganglios linfáticos axilares (Slamon y col., [1987] y [1989], supra; Ravdin y Chamness, Gene, 159:19-27 [1995] y Hynes y Stern, Biochim. Biophys. Acta, 1198:165-184 [1994]). La sobreexpresión de erbB2 también se ha ligado a la sensibilidad y/o resistencia a determinada terapia hormonal y a regímenes quimioterapéuticos, incluyendo CMF (ciclofosfamida, metotrexato y fluorouracilo) y antraciclinas (Baselga y col., Oncology, 11 (3 supl. 1): 43-48 [1997]). Los pacientes que sobreexpresan erbB2 muestran una respuesta mayor al tratamiento con taxanos. Id.

La sobreexpresión de erbB2 ha proporcionado la base para los tratamientos dirigidos de cáncer de mama. Un anticuerpo monoclonal anti-ErbB2 (anti-HER2) humanizado recombinante (HerceptinTM, Genentech, Inc.) se ha usado con éxito para tratar a pacientes con cáncer de mama metastásico que sobreexpresa ErbB2. (Baselga y col., J. Clin. Oncol., 14:737-744 [1996]).

Existe una necesidad continua de composiciones y procedimientos que se dirijan a los genes amplificados y a los productos de estos genes en el diagnóstico y tratamiento del cáncer.

También existe la necesidad continua de composiciones y procedimientos para el diagnóstico y/o tratamiento del cáncer gástrico (de estómago). Aproximadamente del 90% al 95% de los cánceres gástricos malignos son adenocarcinomas derivados de células epiteliales de la capa más interna del estómago. Los tumores gastrointestinales estromales (GIST, por sus siglas en inglés) son tumores no epiteliales derivados del tejido conjuntivo raros. Aproximadamente el 70% de los GIST aparecen en el estómago. Más de 800.000 personas fueron diagnosticadas de cáncer gástrico y más de 630.000 murieron de cáncer gástrico en el año 2000. El pronóstico del cáncer gástrico es malo, con prácticamente la mitad de los pacientes con enfermedad metastásica en el momento del diagnóstico. La tasa de supervivencia a 5 años es, a menudo, menor del 20%. Véase Ajani (2002) “Gastric Cancer: Epidemiology and Therapy," en Encyclopedia of Cancer, vol. 2 (Elsevier Sciences, USA), páginas 249

252.

Se ha detectado transcripción del oncogén myb en algunos cánceres gástricos aunque también en tejidos no relacionados y los autores concluyeron que es improbable que el marcador sirva para diagnosticar dicho tipo de cáncer (Spikoeskii y col.; Voprosy Onkologii vol. 31, Nº 12, 1985, páginas 44-49).

La invención descrita en este documento cumple las necesidades descritas anteriormente y proporciona otros beneficios.

RESUMEN

En un aspecto, se proporcionan procedimientos y composiciones para el diagnóstico y tratamiento de cánceres gástricos asociados con la amplificación y/o sobreexpresión del gen c-Myb.

En un aspecto, se proporciona un procedimiento para diagnosticar la presencia de un cáncer gástrico en un mamífero, comprendiendo el procedimiento la detección de si el gen c-Myb está amplificado en una muestra gástrica de ensayo del mamífero en relación con una muestra control, donde la amplificación del gen c-Myb indica la presencia de cáncer gástrico en el mamífero. En una realización, detectar si el gen c-Myb está amplificado comprende detectar si el número de copias del gen c-Myb está aumentado en al menos 5 veces.

En otro aspecto, se proporciona un procedimiento para diagnosticar la presencia de un cáncer gástrico en un mamífero, comprendiendo el procedimiento la detección de si el gen c-Myb está amplificado en una muestra gástrica de ensayo del mamífero, donde un nivel más alto de exposición del gen c-Myb en la muestra gástrica de ensayo en relación con una muestra control indica la presencia de cáncer gástrico en el mamífero. En una realización, la detección de la expresión del gen c-Myb comprende determinar el nivel de transcripción del ARNm del gen c-Myb. En una realización, un nivel más alto de expresión del gen c-Myb comprende al menos un aumento de 5 veces en la transcripción del ARNm del gen c-Myb en la muestra gástrica de ensayo en relación con la muestra control. En una realización, la detección de la expresión del gen c-Myb comprende determinar el nivel de c-Myb. En una realización, la detección de la expresión del gen c-Myb comprende poner en contacto la muestra gástrica de prueba con un anticuerpo anti-c-Myb y determinar el nivel de expresión de c-Myb en la muestra gástrica de prueba detectando la unión del anticuerpo anti-c-Myb a c-Myb. En una realización, un nivel más alto de expresión del gen c-Myb comprende al menos un aumento de 5 veces en los niveles de c-Myb.

En otro aspecto, se proporciona un procedimiento de inhibición de la proliferación de una célula de cáncer gástrico, comprendiendo el procedimiento la exposición de la célula a un antagonista de c-Myb. En una realización, el antagonista de c-Myb es un ácido nucleico complementario de 10-30 nucleótidos de longitud que se une y reduce la expresión de un ácido nucleico que codifica c-Myb. En una realización, el ácido nucleico complementario es un oligodesoxinucleótido. En una realización, el antagonista de c-Myb es un ácido nucleico que se une al dominio de unión a ADN de c-Myb. En una realización, el antagonista de c-Myb es una molécula orgánica pequeña que se une a c-Myb. En una realización, el antagonista de c-Myb es un ácido nucleico que codifica un anticuerpo que se une a c-Myb. En una realización, el anticuerpo que se une a c-Myb es un fragmento de anticuerpo. En una realización, el anticuerpo que se une a c-Myb es un scFv.

En otro aspecto, se proporciona un procedimiento para tratar un cáncer gástrico asociado con la amplificación o sobreexpresión del gen c-Myb, comprendiendo el procedimiento la administración al individuo que tiene el cáncer gástrico una cantidad eficaz de una formulación farmacéutica que comprende un antagonista de c-Myb. En una realización, el antagonista de c-Myb es un ácido nucleico complementario de 10-30 nucleótidos de longitud que se une y reduce la expresión de un ácido nucleico que codifica c-Myb. En una realización, el ácido nucleico complementario es un oligodesoxinucleótido.... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para diagnosticar la presencia de un cáncer gástrico en un mamífero, comprendiendo el procedimiento la detección de si el gen c-Myb está amplificado en una muestra gástrica de ensayo del mamífero en relación con una muestra control, donde la amplificación del gen c-Myb indica la presencia de cáncer gástrico en el mamífero.

2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que detectar si el gen c-Myb está amplificado comprende detectar si el número de copias del gen c-Myb está aumentado en al menos 5 veces.

3. Un procedimiento para diagnosticar la presencia de un cáncer gástrico en un mamífero, comprendiendo el procedimiento la detección de la expresión del gen c-Myb en una muestra gástrica de ensayo de un mamífero donde un nivel más alto de expresión del gen c-Myb en la muestra gástrica de ensayo en relación con una muestra control indica la presencia de cáncer gástrico en el mamífero.

4. El procedimiento de la reivindicación 3, en el que la detección de la expresión del gen c-Myb comprende determinar el nivel de transcripción del ARNm del gen c-Myb.

5. El procedimiento de la reivindicación 4, en el que un nivel más alto de expresión del gen c-Myb comprende un aumento de al menos 5 veces en la transcripción del ARNm del gen c-Myb en la muestra gástrica de ensayo en relación con la muestra control.

6. El procedimiento de la reivindicación 3, en el que la detección de la expresión del gen c-Myb comprende determinar el nivel de c-Myb.

7. El procedimiento de la reivindicación 6, en el que la detección de la expresión del gen c-Myb comprende poner en contacto la muestra gástrica de prueba con un anticuerpo anti-c-Myb y determinar el nivel de expresión de c-Myb en la muestra gástrica de prueba detectando la unión del anticuerpo anti-c-Myb a c-Myb.

8. El procedimiento de la reivindicación 6, en el que un nivel más alto de expresión del gen c-Myb comprende un aumento de al menos 5 veces en los niveles de c-Myb.

9. Un antagonista de c-Myb para su uso en un procedimiento para tratar un cáncer gástrico asociado con la amplificación o sobreexpresión del gen c-Myb, comprendiendo el procedimiento administrar al individuo que tiene el cáncer gástrico una cantidad eficaz de una formulación farmacéutica que comprende el antagonista de c-Myb, donde el antagonista de c-Myb se selecciona entre: un ácido nucleico antisentido que se une al ácido nucleico que codifica c-Myb; un ácido nucleico que se une al dominio de unión a ADN de c-Myb; un ácido nucleico que codifica un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo que se une a c-Myb y un anticuerpo o fragmento de anticuerpo que se une a c-Myb.

10. El antagonista de c-Myb para su uso según la reivindicación 9, en el que el antagonista de c-Myb es un ácido nucleico complementario de 10-30 nucleótidos de longitud que se une y reduce la expresión de un ácido nucleico que codifica para c-Myb.

11. El antagonista de c-Myb para su uso según la reivindicación 10, en el que el ácido nucleico antisentido es un oligodesoxinucleótido.

12. El antagonista de c-Myb para su uso según la reivindicación 9, en el que el antagonista de c-Myb es un ácido nucleico que se une a dominio de unión a ADN de c-Myb.

13. El antagonista de c-Myb para su uso según la reivindicación 9, en el que el antagonista de c-Myb es un ácido nucleico que codifica un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo.

14. El antagonista de c-Myb para su uso según la reivindicación 13, en el que el fragmento de anticuerpo que se une a c-Myb es un scFV.

15. Un procedimiento para determinar si un individuo que tiene cáncer gástrico responderá a un agente terapéutico dirigido a c-Myb o al gen c-Myb, comprendiendo el procedimiento la determinación de si el gen c-Myb está amplificado en el cáncer gástrico, donde la amplificación del gen c-Myb indica que el individuo responderá al agente terapéutico.

16. El procedimiento de la reivindicación 15, el agente terapéutico se selecciona entre un

ácido nucleico complementario, un ácido nucleico que se une al dominio de unión a ADN de c-Myb, una molécula orgánica pequeña que se une a c-Myb y un ácido nucleico que codifica un anticuerpo que se une a c-Myb.