PROCEDIMIENTO DE OBTENCIÓN DE MEZCLAS DE POLISACÁRIDOS DE BAJOS PESOS MOLECULARES.

Procedimiento de obtención de mezclas de polisacáridos de bajos pesos moleculares,

sulfatados y que presentan la estructura general de los polisacáridos que constituye la heparina. Comprende salificar, en medio acuoso, una heparina por medio de una sal de amonio cuaternario de cadena larga; esterificar la sal así obtenida para formar un éster que tiene un grado de esterificación comprendido entre el 9,5 y el 14%; y despolimerizar dicho éster.

Los polisacáridos resultantes tienen aplicación en la profilaxis y tratamiento de accidentes trombóticos.

La presente invenci´on se refiere al campo de los polisac´aridos de bajos pesos moleculares. M´as particularmente la invenci´on se refiere al campo de las heparinas de bajo peso molecular.

Las heparinas son substancias biol´ogicas de extracci´on de la familia de los glicosaminoglicanos, utilizadas por sus propiedades anticoagulante y antitromb´otica. Principalmente, se utilizan en el tratamiento de las trombosis venosas post-operatorias. Sin embargo, en su forma nativa, las heparinas presentan un cierto n´umero de inconvenientes que limitan las condiciones de su utilizaci´on. En particular, la actividad anticoagulante puede ocasionar hemorragias, y la sensibilidad a ciertos factores s´ericos, tal pf4, impone la utilizaci´on de dosis relativamente importantes. Por lo tanto es necesario privilegiar la actividad antritromb´otica, atribu´ıda principalmente a la actividad antiprotrombinasa, a expensas de la actividad anticoagulante, atribu´ıda al efecto antitrombina.

Con este fin, se ha propuesto fragmentar las heparinas en mol´eculas de pesos moleculares medios menores. En particular, se conoce en el arte anterior la patente europea EP 40144. Esta patente describe mezclas de polisac´aridos sulfatados que tienen una estructura general de los polisac´aridos constituyentes de la heparina, que poseen el doble enlace etil´enico en una de las extremidades de su cadena, y cuyo peso molecular medio en peso est´a comprendido entre 2000 y 10000 Daltons. Estas mezclas se obtienen por despolimerizaci´on y saponificaci´on de un ester de heparina. Se ha indicado que presentan una actividad antitromb´otica elevada y una actividad anticoagulante global inferior a la de la heparina.

Sin embargo, uno de los mayores problemas que se encuentran con las heparinas reside en el hecho de que se trata de productos muy heterog´eneos. Por lo tanto es dif´ıcil apreciar la contribuci´on de cada una de las especies en la actividad de la heparina, conocer el comportamiento de estas especies durante la despolimerizaci´on y finalmente controlar la estructura de estas especies y sus proporciones respectivas en los productos finales. Por estas razones, los inconvenientes anteriormente mencionados no han podido ser resueltos de manera totalmente satisfactoria. Principalmente, los procedimientos descritos en el arte anterior, y en particular en la patente EP 40144 no permiten obtener mezclas que poseen las propiedades farmacol´ogicas requeridas para una mejor aplicaci´on, a saber una semi-vida plasm´atica suficientemente elevada, una velocidad de absorci´on bastante grande, una fuerte biodisponibilidad y tambi´en una peque˜na “anchura”.

Por lo tanto se han descrito otros procedimientos que permiten fragmentar la heparina, con vistas a disminuir sus efectos indeseables (Johnson et coll. Thrombos. Haemostas. Stuttg., 1.976, 35, 586; Lane et coll. Thrombosis Research 16, 651, Lasker et coll. US. 3.766.167) . Cada uno de estos procedimientos parece indicar que la actividad buscada est´a privilegiada cuando el grado de fragmentaci´on de la heparina aumenta (v´ease tambi´en la solicitud de patente europea EP 301618 relativa a pentasac´aridos que poseen una actividad antitromb´otica) .

En el mismo sentido, estudios recientes sobre el mecanismo de acci´on de las heparinas en la formaci´on de la trombina han puesto de manifiesto una influencia del peso molecular medio de las heparinas sobre su actividad in vitro (B´eguin et coll., Thromb. Haemost., 61, 30, 1989) . Los autores indican que las heparinas de bajo peso molecular poseen sobre todo una actividad antiprotombinasa y las heparinas de peso molecular m´as elevado, una actividad antitrombina.

Paralelamente, se ha propuesto igualmente fraccionar las heparinas con el fin de extraer mezclas de peso molecular medio homog´eneo. Se conoce en particular la solicitud de patente europea EP 337327, que describe un procedimiento para la preparaci´on de fragmentos de oligosac´aridos derivados de la heparina, que permite obtener mezclas que tienen una dispersi´on molecular reducida. Seg´un este procedimiento, se eliminan previamente las fracciones de peso molecular inferior a 3.000 Daltons, lo que conduce a eliminar el producto final de los fragmentos que contienen menos de 10a16sac´aridos, y las especies de peso molecular superior a 7000 Daltons. Seg´un los inventores, este tratamiento, que tiene por objeto homogeneizar la mezcla final, permitir´ıa disminuir la actividad anticoagulante, al mismo tiempo que se conservar´ıa la actividad antritromb´otica buscada.

Sin embargo, a despecho de estos trabajos, las mezclas obtenidas presentan siempre un efecto hemorr´agico residual, o una actividad antitromb´otica demasiado debil. Adem´as, nada en el arte anterior permite determinar cuales son las propiedades que deben ser reunidas para obtener una actividad biol´ogica ´optima. Por otra parte la conclusi´on de los autores del art´ıculo precitado es elocuente: “no sabemos cual es la combinaci´on ´

optima de las propiedades de la heparina”. La caracterizaci´on precisa de diferentes preparaciones y la correlaci´on de estas propiedades con observaciones cl´ınicas podr´ıa eventualmente aportar una respuesta”.

Se ha encontrado ahora que es posible obtener heparinas que presentan propiedades ventajosas, principalmente para su utilizaci´on en la profilaxis y el tratamiento de los accidentes tromb´oticos. De manera inesperada, la solicitante ha encontrado en efecto que la presencia en el producto final, a la vez de especies de alto y de bajo peso molecular, confiere una mejor actividad al producto. Contrariamente a las indicaciones del arte anterior, parece pues preferible conservar en la mezcla final especies de peso molecular elevado, as´ı como una cierta heterogeneidad.

El estudio farmacocin´etico de las mezclas de la invenci´on muestra que ´estas reunen propiedades particularmente ventajosas.

En particular, las mezclas de la invenci´on presentan un tiempo de semi-vida superior a los otros productos conocidos, e igualmente a la heparina madura. Por otra parte, con relaci´on a esta ´nalar que la semi-vida de ultima, es importante se˜las mezclas de la invenci´on es independiente de la dosis inyectada. Esto es interesante puesto que el efecto producido es mucho m´as predecible que en el caso de la heparina.

Adem´as, en el caso del hombre, las mezclas de la invenci´on presentan una excelente biodisponibilidad, medida por la actividad anti Xa. As´ı, desde el 30% aproximadamente para la heparina, es de aproximadamente el 90 % para las mezclas de la invenci´on. Esto es muy ventajoso puesto que permite reducir las dosis inyectadas y mejorar la potencialidad terap´eutica.

Por otra parte, otra propiedades importante de las mezclas de la invenci´on reside en su gran velocidad de absorci´on. Esta caracter´ıstica permite obtener una actividad biol´ogica casi instant´anea, y ofrece por lo tanto una mayor seguridad en el tratamiento, cubriendo r´apidamente al paciente.

Otra caracter´ıstica de las mezclas seg´un la invenci´on es su peque˜na “anchura” comparativamente a los otros productos y alaheparinamadura. Merced a su estructura qu´ımica, a su peso molecular o a su grado de sulfato, estas mezclas presentan en efecto una resistencia particular a la degradaci´on (desulfataci´on, hidr´olisis) y a la eliminaci´on, que aumenta todav´ıa m´as sus capacidades terap´euticas.

Igualmente, las preparaciones de la invenci´on poseen un tiempo de residencia acrecentado con relaci´on alaheparinade partida. Esta propiedad se traduce en una prolongaci´on del tiempo durante el cual el producto permanece activo in vivo, y porlo tanto poruna mejoreficacia terap´eutica.

Adem´as, estas preparaciones presentan tambi´en una sensibilidad reducida a los factores s´edicos, que aumenta su duraci´on de acci´on in vivo y permite utilizarlas a dosis peque˜nas.

Estas propiedades particularmente ventajosas se obtienen controlando, en el curso del procedimiento de preparaci´on, ciertas caracter´ısticas... [Seguir leyendo]

1. Una mezcla de polisacáridos sulfatados que poseen la estructura general de los polisacáridos de los que se compone la heparina, teniendo dichos polisacáridos un peso molecular medio ponderal menor que el de la heparina y conteniendo entre 9 y 20% de cadenas de peso molecular inferior a 2.000 daltons y entre 5 y 20% de cadenas de peso molecular superior a 8.000 daltons, y en la que la relación de peso molecular medio ponderal/peso molecular medio en número está comprendida entre 1, 3 y 1, 6.

2. La mezcla de acuerdo con la reivindicación 1, que contiene impurezas equivalentes a menos de 2% de dermatán sulfato.

3. La mezcla de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, que posee un peso molecular medio ponderal comprendido entre aproximadamente 3.500 daltons y aproximadamente 5.500 daltons.

4. La mezcla de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que las cadenas de polisacáridos sulfatados tienen un ácido 2-Osulfo-4-enopiranosurónico en uno de sus extremos.

5. Un proceso para preparar una mezcla de polisacáridos sulfatados de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende las siguientes etapas:

- en una primera etapa, convertir heparina en un medio acuoso en una sal de amonio cuaternaria de cadena larga de la misma,

- en una segunda etapa, esterificar la sal obtenida para formar un éster que tiene un grado de esterificación comprendido entre 9, 5% y 14%, y

- en una tercera etapa, despolimerizar el éster obtenido que tiene un grado de esterificación comprendido entre 9, 5 y 14%.

6. El proceso de acuerdo con la reivindicación 5, en el que la segunda etapa se realiza en un disolvente orgánico clorado con un cloruro correspondiente al alcohol de esterificación.

7. El proceso de acuerdo con la reivindicación 6, en el que el cloruro es cloruro de benzoílo y el disolvente es cloroformo o cloruro de metileno.

8. El proceso de acuerdo con la reivindicación 6 ó 7, en el que la esterificación se realiza mezclando

1 parte en peso de la sal de heparina con aproximadamente 1 parte en volumen de un cloruro en 3 a 5 partes en volumen del disolvente orgánico clorado a una temperatura comprendida entre 25 y 45°C.

9. El proceso de acuerdo con la reivindicación 8, en el que la temperatura está comprendida entre 30 y 40°C.

10. El proceso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 9, en el que la despolimerización se realiza por tratamiento del éster con una base fuerte en solución acuosa.

11. El proceso de acuerdo con la reivindicación 10, en el que la relación de pesos de base/éster está comprendida entre 0, 05 y 0, 2.

12. El proceso de acuerdo con la reivindicación 11, en el que la relación de pesos está comprendida entre 0, 08 y 0, 15.

13. El proceso de acuerdo con la reivindicación 10, 11 ó 12, en el que la relación de pesos de agua/éster está comprendida entre 15 y 30.

14. El proceso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 13, en el que la temperatura del medio se ajusta a un valor comprendido entre 50 y 70°C, y la reacción se realiza durante un periodo que varía de 30 minutos a 3 horas.

15. El proceso de acuerdo con la reivindicación 14, en el que la temperatura del medio está comprendida entre 55°C y 65°C y la reacción se realiza durante 1 a 2 horas.

16. El proceso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 15, en el que el material de partida de heparina se ha purificado por precipitación en una solución acuosa con un alcohol.

17. El proceso de acuerdo con la reivindicación 5, sustancialmente como se describe en los ejemplos anteriores 1 a 4.

18. Una mezcla de polisacáridos sulfatados obtenidos por el proceso de cualquiera de las reivindicaciones 5 a 17.

19. El uso de una mezcla de polisacáridos sulfatados de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 ó 18 para la preparación de una composición terapéutica.

OFICINA ESPA˜

NOLA DE PATENTES Y MARCAS

ESPA˜NA

INFORME SOBRE EL ESTADO DE LA TECNICA

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51 Int. Cl.5: C08B 37/10 // A61K 31/725

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11 ES 2 036922 21kN.◦ solicitud: 9101505 22kFecha de presentaci´on de la solicitud: 25.06.91 32kFecha de prioridad: 26.06.90

DOCUMENTOS RELEVANTES

3. 34, 1989 Stuttgart, Alemania; S. BEGUIN et al.: ”The mode of action of low molecular weight heparin preparation (PK10169) and two of its major components on thrombin generation in plasma”. Categor´ıa de los documentos citados X: Y: A: de particular relevancia de particular relevancia combinado con otro/s de la misma categor´ıa refleja el estado de la t´ecnica O: P: E: referido a divulgaci´on no escrita publicado entre la fecha de prioridad y la de presentaci´on de la solicitud documento anterior, pero publicado despu´es de la fecha de presentaci´on de la solicitud El presente informe ha sido realizado × para todas las reivindicaciones para las reivindicaciones n◦: Fecha de realizaci´on del informe 29.05.92 Examinador I. Seri˜n´aRam´ırez P´agina 1/1