Proaerolisina que contiene secuencias de activación de proteasa y métodos de uso para el tratamiento del cáncer de próstata.

Un péptido purificado que comprende una secuencia de aminoácidos con una identidad de secuencia del 95% o superior con la secuencia de aminoácidos mostrada en la SED.

ID. Nº: 4, donde el péptido purificado comprende un sitio de clivaje específico prostático y un sitio de clivaje de furina sometido a deleción funcional, donde el sitio de clivaje específico prostático sustituye funcionalmente al sitio de clivaje de furina.

Proaerolisina que contiene secuencias de activación de proteasa y métodos de uso para el tratamiento del cáncer de próstata

Campo

La presente solicitud se refiere a una novedosa variante de la proteína proaerolisina (PA) y a los métodos para utilizarla en el tratamiento del cáncer de próstata localizado y metastásico.

Antecedentes

Uno de cada tres cánceres diagnosticados en los hombres estadounidenses es de origen prostético, lo que convierte al cáncer de próstata en la malignidad más diagnosticada en este grupo de población estadounidense (Berges et al. Clin. Cáncer Res. 1:473-480,1995). La incidencia del cáncer de próstata en los Estados unidos no se ha reducido por los cambios en el estilo de vida; de hecho, la tasa de incidencia del cáncer de próstata clínico ha aumentado constantemente desde la década de 1930 (Pinski et al. Cáncer Res. 61:6372-6,2001). La incidencia del cáncer de próstata aumenta con la edad más rápidamente que cualquier otro tipo de cáncer; menos del 1% de los casos se diagnostican en hombres menores de 50 años (Furuya et al. Cáncer Res. 54:6167-75, 1994). Por tanto, dado que la esperanza de vida de la población masculina aumenta con el paso del tiempo, la incidencia del cáncer de próstata clínico también se incrementará (Furuya et al. Cáncer Res. 54:6167-75, 1994).

En la actualidad no existe ningún tratamiento que prolongue de forma significativa la supervivencia en los hombres con cáncer de próstata metastásico (Khan y Denmeade. Prostate 45:80-83, 2000). La castración médica con estrógenos orales (ablación androgénica) fue la primera terapia sistémica efectiva para el cáncer y sigue siendo la terapia más útil, en términos generales, para el cáncer de próstata. A pesar de que la terapia de ablación androgénica presenta un sustancial beneficio paliativo, su impacto sobre la supervivencia general es limitado (Berges et al. Clin. Cáncer Res. 1:473-480, 1995). Finalmente esta terapia fracasa, porque el cáncer de próstata metastásico en un paciente individual se compone de forma heterogénea de células cancerígenas andrógeno dependientes y andrógeno independientes (Christensen et al. Bioorg. Medicinal Chem. 7:1273-80, 1999). Tras la ablación androgénica, las células andrógeno dependientes de estos tumores dejan de proliferary activan una vía de suicidio celular denominada muerte celular programada (PCD) o apóptosis. Gracias a la eliminación de este subgrupo de células andrógeno dependientes, la mayoría de los hombres con cáncer de próstata metastásico tienen una respuesta positiva a la terapia de privación de andrógenos. No obstante, finalmente todos los pacientes recaen hasta un estado en el que ya no responden a nuevas terapias anti-andrógenos, con independencia de que su administración sea completa, debido a la presencia de células cancerígenas prostáticasandrógeno independientes en los lugares de la metástasis. Lamentablemente, la enfermedad es uniformemente fatal en este punto, porque no existe ninguna terapia que elimine de forma eficaz las células cancerígenas prostéticas andrógeno independientes (Khan y Denmeade. Prostate 45:80-83, 2000).

Se han propuesto diversos enfoques alternativos para el tratamiento del cáncer de próstata. Uno de ellos consistía en desarrollar métodos para detectar de forma agresiva la enfermedad local mientras todavía está en la próstata, de forma que se pueda tratar potencialmente mediante una terapia local definitiva. A menudo los cánceres localizados se muestran moderadamente diferenciados y tienen un menor volumen. Durante las últimas décadas se han producido mejoras en el tratamiento quirúrgico y radioterapéutico del cáncer de próstata localizado. Estas mejoras han culminado en los últimos años en un descenso del índice de mortalidad del cáncer de próstata por primera vez en 50 años.

No obstante, a pesar de que este avance incrementó la tasa de curación, todavía hay un gran número de hombres que no se curan con terapias locales y finalmente fallecen como consecuencia de la enfermedad metastásica. Esta realidad clínica ha llevado al desarrollo de tratamientos no hormonales para el cáncer de próstata metastásico. Los agentes quimioterapéuticos antiproliferativos estándar no han tenido éxito como tratamiento para el cáncer de próstata. Estos tipos de agentes pueden ser poco eficaces contra los cánceres prostéticos andrógeno independientes porque tienen una tasa de proliferación notablemente baja en comparación con otros tipos de tumores y muchos tejidos normales, como la piel, el tracto gastrointestinal y la médula espinal. Por ejemplo, la fracción de crecimiento en 117 puntos metastásicos del cáncer de próstata obtenida de 11 pacientes en los que fracasó la ablación androgénica en una autopsia «en caliente» fue del 7,1 ± 0,8%. (Pinski el al. Cáncer Res 61:6372- 6,2001). Esta baja tasa de proliferación puede explicar la relativa falta de respuesta de las células cancerígenas prostéticas en seres humanos a la quimioterapia a ntip rol iterativa estándar, mientras que las líneas celulares del cáncer de próstata andrógeno independientes altamente proliferativas siguen siendo altamente sensibles a la PCD in vitro.

Se han propuesto algunas estrategias para el tratamiento de los cánceres de próstata de proliferación lenta. Un enfoque consiste en identificar vías de señalización específicas en las que las células cancerígenas prostáticas, durante la transformación maligna, adquieren una dependencia única para la supervivencia. Una vez identificadas, se pueden desarrollar pequeñas moléculas o inhibidores biológicos de estas vías como agentes terapéuticos. Un ejemplo de este enfoque es el uso de pequeñas moléculas o inhibidores de los anticuerpos monoclonales de las vías del receptor del EGF o Her2/neu. Otro método consiste en inhibir una proteína intracelular omnipresente cuya función es imprescindible para la supervivencia de todo tipo de células. Este enfoque superaría el problema de la

heterogeneidad y la «resistencia», dado que todas las células cancerígenas de un tumor se podrían eliminar con este planteamiento. No obstante, la citotoxicidad no sería específica para un tipo de células y la administraciónde una toxina tan general conllevaría una toxicidad sistémica significativa. Por tanto, se necesita un método para dirigir las citotoxinas directamente a los sitios del cáncer prostético.

Otra estrategia para el tratamiento de los cánceres prostéticos de proliferación lenta consiste en dirigir las citotoxinas que matan a las células, no mediante la inducción de la apóptosis tras la inhibición de las vías metabólicas o de señalización críticas, sino más bien a través de la citolisis no específica vía la ruptura de la membrana plasmática. Se han descrito numerosas toxinas citolíticas (Lesieur et al. Mol. Membr. Biol. 14:45064, 1997). Estas toxinas citolíticas a menudo son de origen bacteriano y, por lo general, son proteínas de beta lámina que se oligomerizan en la membrana plasmática para producir poros bien caracterizados que, una vez formados, provocan una rápida muerte citolítica de las células (Rossjohn et al. J. Struct. Biol. 121:92-100,1998). Estas toxinas también son inespecíficas en su capacidad para matar células y, por tanto, no pueden ser administradas como terapia sin una toxicidad significativa. Así pues, existe la necesidad de encontrar agentes para tratar el cáncer de próstata, que sean predominantemente citotóxicos para las células cancerígenas prostéticas.

Resumen

La invención se define en las reivindicaciones.

En el presente se divulga una variante de moléculas de proaerolisina(PA) y los métodos para utilizarla en el tratamiento del cáncer de próstata localizado y metastático, como el cáncer de próstata de proliferación lenta.

En un ejemplo, una variante de molécula de PA incluye un sitio de clivaje de proteasa específico de la próstata, como el sitio de clivaje específico del antígeno específico prostético (PSA), el antígeno prostético específico de membrana (PSMA) o la calicreína glandular humana 2 (HK2) que sustituye funcionalmente al sitio de clivaje de furina de la PA natural. De este modo, la administración de la variante de moléculas de PA divulgada a un sujeto con cáncer de próstata provoca la activación de las variantes de moléculas de PA en presencia de proteasa específica prostética y la lisis de las células, como las células cancerígenas prostéticas. En algunos ejemplos, la variante de moléculas de PA incluye también un dominio de unión específico del tejido prostático, para dirigirse mejor a las células cancerígenas.

Se divulgan métodos para el tratamiento del cáncer de... [Seguir leyendo]

1. Un péptido purificado que comprende una secuencia de aminoácidos con una identidad de secuencia del 95% o superior con la secuencia de aminoácidos mostrada en la SED. ID. N°: 4, donde el péptido purificado comprende un sitio de clivaje específico prostático y un sitio de clivaje de furina sometido a deleción funcional, donde el sitio de clivaje especifico prostático sustituye funcionalmente al sitio de clivaje de furina.

2. Un péptido purificado de conformidad con la reivindicación 1, que comprende una secuencia de aminoácidos con una identidad de secuencia del 98% o superior con la secuencia de aminoácidos mostrada en la SED. ID. N°: 4.

3. El péptido purificado de la reivindicación 1, donde el péptido comprende asimismo una etiqueta de polihistidina.

4. El péptido purificado de la reivindicación 3, donde la etiqueta de polihistidina comprende un máximo de seis histidinas.

5. El péptido purificado de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 para su uso en el tratamiento del cáncer de próstata en un sujeto.

6. El péptido purificado para el uso de la reivindicación 5, donde el péptido se administra por vía intravenosa, Intramuscular, subcutánea u oral.

7. El péptido purificado para el uso de la reivindicación 5, donde el péptido se administra por vía intratumoral o intraprostátlca.

8. El péptido urlflcado para el uso de la reivindicación 5, donde el sujeto tiene un tumor prostático

9. El péptido urlflcado para el uso de la reivindicación 5, donde el sujeto tiene un tumor prostático

10. El péptido purificado para el uso de la reivindicación 5, donde el volumen de la célula tumoral

reduce al menos en un 10%.

11. El péptido purificado para el uso de la reivindicación 5, donde el volumen de la célula tumoral reduce al menos en un 50%.

12. Una composición farmacéutica que comprende el péptido purificado de cualquiera de las reivindicaciones 1- 4 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

13. Una secuencia de ácido nucleico purificado que codifica el péptido de cualquiera de las reivindicaciones 1- 4.

localizado, metastásico. prostética se

prostética se