PREPARACION DE UNA SOLUCION DE ERITROPOYETINA ESTABILIZADA CON LEUCINA O ACIDO GLUTAMICO.

Un método para estabilizar una preparación en solución de eritropoyetina,

que comprende la adición de un estabilizante que consiste en uno o más aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en leucina, ácido glutámico y sus sales, a la preparación en solución de eritropoyetina, donde la concentración del aminoácido es de 0,1 a 40 mg/ml, la preparación en solución no incluye urea, y la preparación en solución no contiene una proteína como un estabilizante

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E06012448.

Solicitante: CHUGAI SEIYAKU KABUSHIKI KAISHA.

Nacionalidad solicitante: Japón.

Dirección: 5-1, UKIMA 5-CHOME, KITA-KU TOKYO 115 JAPON.

Inventor/es: NAGAI, HIROSHI, YAMAZAKI,TADAO, MORITA,TOSHIARI.

Fecha de Publicación: .

Fecha Solicitud PCT: 25 de Abril de 1997.

Fecha Concesión Europea: 18 de Agosto de 2010.

Clasificación PCT:

  • A61K31/198 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE.A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › A61K 31/00 Preparaciones medicinales que contienen ingredientes orgánicos activos. › Alfa-amino-ácidos, p. ej. alanina, ácido etilendiamino tetraacético (EDTA) (betaína A61K 31/205; prolina A61K 31/401; triptófano A61K 31/405; histidina A61K 31/4172; péptidos no degradados en aminoácidos individuales A61K 38/00).
  • A61K38/18 A61K […] › A61K 38/00 Preparaciones medicinales que contienen péptidos (péptidos que contienen ciclos beta-lactama A61K 31/00; dipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina 2,5-dionas, A61K 31/00; péptidos basados en la ergolina A61K 31/48; que contienen compuestos macromoleculares que tienen unidades aminoácido repartidas estadísticamente A61K 31/74; preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos A61K 39/00; preparaciones medicinales caracterizadas por los ingredientes no activos, p. ej. péptidos como soportes de fármacos, A61K 47/00). › Factores de crecimiento; Reguladores de crecimiento.
  • A61K47/18 A61K […] › A61K 47/00 Preparaciones medicinales caracterizadas por los ingredientes no activos utilizados, p. ej. portadores o aditivos inertes; Agentes de direccionamiento o agentes modificadores enlazados químicamente al ingrediente activo. › Aminas; Amidas; Ureas; Compuestos de amonio cuaternario; Aminoácidos; Oligopéptidos que tienen hasta cinco aminoácidos.
  • A61K47/26 A61K 47/00 […] › Hidratos de carbono, p. ej. alcoholes de azúcares, amino azúcares, ácidos nucleicos, mono-, di- u oligo-sacáridos; Sus derivados, p. ej. polisorbatos, ésteres de ácidos grasos sorbitano o glicirricina.

Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Finlandia.

PREPARACION DE UNA SOLUCION DE ERITROPOYETINA ESTABILIZADA CON LEUCINA O ACIDO GLUTAMICO.

Fragmento de la descripción:

Esta invención se refiere a un método para estabilizar una preparación en solución de eritropoyetina.

La eritropoyetina (más adelante en el presente documento denominada como EPO) es una hormona glicoproteína ácida que promueve la diferenciación y proliferación de células progenitoras eritroides. Esta hormona se segrega principalmente por el riñón. Los eritrocitos están presentes abundantemente en la sangre durante ciertos periodos, y después los destruye el bazo, etc. (su vida media en seres humanos es de aproximadamente 120 días). Sin embargo, los glóbulos rojos los suministra constantemente la médula ósea, de manera que el recuento de eritrocitos totales periféricos se mantiene constante en un estado normal. EPO desempeña un papel central en el mantenimiento de dicha homeostasis de eritrocitos en el organismo vivo.

Se obtuvo EPO urinaria humana de alta pureza mediante la purificación de un gran volumen de orina procedente de pacientes con anemia aplásica. Esto permitió la clonación del gen EPO humano. Hoy día, se ha hecho posible producir una gran cantidad de EPO humano recombinante en células animales por tecnología de ingeniería genética. El solicitante de esta invención ha tenido éxito en la producción de una preparación (preparación liofilizada) de la EPO purificada y la suministra al mercado en forma de agentes para aliviar la anemia renal y otras.

El diseño de fármacos para suministrar al mercado con preparaciones de EPO estables requiere que se supriman los cambios químicos (hidrólisis, reacción de intercambio de disulfuro, etc.) o los cambios físicos (desnaturalización, aglutinación, adsorción, etc.) observados con EPO. Los productos que están ahora en el mercado contienen albúmina sérica humana o gelatina purificada que generalmente se usa como un estabilizante. Estas sustancias se han añadido en estos productos para suprimir los cambios químicos o físicos. Debido a que la albúmina sérica humana es un producto sanguíneo que depende de la donación de sangre para su suministro, se ha cuestionado la necesidad de su adición. Con respecto a la adición de una proteína diferente a la albúmina o la gelatina como un estabilizante, es difícil evitar completamente el riesgo de contaminación viral.

Los fármacos peptídicos a menudo se liofilizan para la estabilización. Sin embargo, la liofilización aumenta los costes de fabricación e implica un riesgo aumentado debido a problemas mecánicos.

Por las razones anteriores, está aumentando la demanda de una preparación de EPO como una alternativa a una preparación liofilizada, estando la preparación de EPO libre de la inclusión de una proteína como un estabilizante y estable durante el almacenamiento a largo plazo.

Para satisfacer la demanda anterior, los inventores han llevado a cabo estudios extensos. Como resultado, se ha descubierto que EPO puede transformarse en una preparación en solución de EPO estable sin albúmina sérica humana y gelatina purificada añadiendo un determinado aminoácido como un estabilizante. Este hallazgo ha conducido a la compleción de la presente invención.

Es decir, la presente invención proporciona una preparación en solución de eritropoyetina que contiene un aminoácido como un agente de estabilización

o estabilizante.

En esta memoria descriptiva "estabilizar; que estabiliza" se refiere al almacenamiento o la preparación en solución de eritropoyetina, por ejemplo, durante más de 2 años a 10°C o durante más de 6 meses a 25°C o durante más de 2 semanas a 40°C mientras que se mantiene la tasa residual de eritropoyetina al 90% o más alta, preferiblemente al 95% o más alta, más preferiblemente al 98% o más alta.

La Fig.1 es un gráfico que muestra la relación entre la concentración de hidrocloruro de L-arginina y la tasa residual de eritropoyetina; La Fig. 2 es un gráfico que muestra la relación entre la concentración de hidrocloruro de L-lisina y la tasa residual de eritropoyetina; La Fig. 3 es un gráfico que muestra la relación entre la concentración de hidrocloruro de L-histidina y la tasa residual de eritropoyetina; y La Fig. 4 muestra un patrón de electroforesis en gel de SDS-poliacrilamida que ilustra el efecto de supresión del producto de degradación de preparaciones en las que se han añadido diversos aminoácidos (un electroforetograma) en el cual: carril 1: marcador de peso molecular, carril

2: preparación sin aminoácidos, carril 3: preparación que contiene Lleucina, carril 4: preparación que contiene L-fenilalanina, carril 5: preparación que contiene L-triptófano, carril 6: preparación que contiene Lserina, carril 7: preparación que contiene L-cisteína, carril 8: preparación

que contiene L-glutamato monosódico monohidrato, carril 9: preparación

que contiene hidrocloruro de L-arginina y carril 10: preparación que

contiene hidrocloruro de L-histidina.

La EPO que su uso en la preparación en solución de la presente invención tiene sustancialmente la misma actividad biológica que la de los mamíferos, especialmente, la EPO humana e incluye EPO de procedencia natural y EPO obtenido por recombinación genética. La EPO procedente de recombinación genética incluye EPO que tiene la misma secuencia de aminoácidos que la EPO de procedencia natural o EPO con esta secuencia de aminoácidos en la que se ha eliminado uno o más de los aminoácidos o en la que se ha sustituido uno o más de los aminoácidos o en la que se ha añadido uno o más aminoácidos, y que, sin embargo, retiene la actividad biológica mencionada anteriormente. La EPO en la presente invención se puede producir mediante cualquiera de los métodos, por ejemplo, un método que comprende extracción a partir de la orina humana, seguida de la separación y purificación, de diversas maneras; y un método que implica la producción en E. coli, levadura o células de ovario de hámster chino, seguida de la extracción, separación y purificación de diversas maneras.

El aminoácido añadido como un estabilizante en la presente invención incluye aminoácidos libres y sus sales tales como las sales sódicas, sales potásicas e hidrocloruros. La preparación en solución de la presente invención tiene uno de estos aminoácidos. Los aminoácidos son formas D-, L-y DL-de leucina o ácido glutámico y sus sales.

La preparación en solución de la presente invención, está libre de proteína como un estabilizante.

Para la cantidad de aminoácido añadido a la preparación en solución, de la presente invención, puede establecerse un intervalo preferido mediante un método de ensayo (a describir más adelante) dependiendo del tipo de aminoácido usado. La cantidad de aminoácido añadido es de 0,1 a 40 mg/ml. Como se describirá más adelante, la mayor tasa residual de EPO se obtuvo cuando se añadieron hidrocloruro de L-arginina e hidrocloruro de L-lisina en una cantidad para cada uno de aproximadamente 1 a 5 mg/ml como aminoácido libre o cuando se añadió hidrocloruro de L-histidina en una cantidad, como aminoácido libre, de 1 a 10 mg/ml en un ensayo acelerado realizado durante dos semanas a 40ºC o 0,5 a 5 mg/ml en un ensayo acelerado de 6 meses a 25°C.

La cantidad de EPO contenida en la preparación en solución de la presente invención se puede determinar de acuerdo con el tipo de enfermedad a tratar, la gravedad de la enfermedad, la edad del paciente y así sucesivamente. Generalmente, su cantidad es de 100 a 500.000 lU/ml, preferiblemente de 200 a 100.000 lU/ml, más preferiblemente de 750 a 72.000 lU/ml. La preparación en solución de la presente invención se administra normalmente por una vía parenteral, por ejemplo, mediante inyección (subcutánea o intravenosa) o por vía percutánea, transmucosa o transnasal, pero también es posible la administración oral.

La preparación en solución de la presente invención puede contener, además de EPO y el aminoácido, ingredientes que se añaden normalmente a una preparación en forma de una solución, tales como polietilenglicol; azúcares, por ejemplo, dextrano, manitol, sorbitol, inositol, glucosa, fructosa, lactosa, xilosa, manosa, maltosa, sacarosa y rafinosa; sales inorgánicas, por ejemplo, cloruro sódico, cloruro potásico, cloruro cálcico, fosfato sódico, fosfato potásico e hidrogenocarbonato sódico; sales orgánicas, por ejemplo, citrato sódico, citrato potásico y acetato sódico; y, si se desea, agentes reductores que contienen azufre, por ejemplo, glutationa, ácido tióctico, tioglicolato...

 


Reivindicaciones:

1. Un método para estabilizar una preparación en solución de eritropoyetina, que comprende la adición de un estabilizante que consiste en uno o más aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en leucina, ácido glutámico y sus sales, a la preparación en solución de eritropoyetina, donde la concentración del aminoácido es de 0,1 a 40 mg/ml, la preparación en solución no incluye urea, y la preparación en solución no contiene una proteína como un estabilizante.

2. El método de la reivindicación 1, en el que la preparación en solución además contiene un tensioactivo.

3. El método de la reivindicación 2, en el que el tensioactivo es un éster alquílico de polioxietilén sorbitan.

4. El método de la reivindicación 2, en el que el tensioactivo es un polisorbato 20 y/u 80.

5. El método de la reivindicación 1 ó 4, en el que la preparación en solución además contiene una sal.

6. El método de la reivindicación 5, en el que la sal es cloruro sódico.

7. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que la preparación en solución se ha disuelto en un tampón.

8. El método de la reivindicación 7, en el que el tampón es un tampón fosfato y/o tampón citrato.

9. Uso de un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en leucina, ácido glutámico y sus sales, como un estabilizante para una preparación en solución de eritropoyetina, donde la concentración del aminoácido es de 0,1 a 40 mg/ml, la preparación en solución no incluye urea, y

13 la preparación en solución no contiene una proteína como estabilizante.


 

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