Polipéptidos y ácidos nucleicos receptores.

Un polipéptido BAFF-R (receptor de factor de activación de células B de la familia de TNF) para su uso en eltratamiento de células B tumorigénicas que expresan BAFF y/o BAFF-R,

en el que el polipéptido BAFF-Rcomprende:

(a) SEQ ID N.º: 10;

(b) un fragmento de SEQ ID N.º: 10 que se une a BAFF;

(c) una secuencia de aminoácidos que se une a BAFF y es idéntica en al menos un 70% a SEQ ID N.º: 10 oun fragmento de SEQ ID N.º: 10;

(d) una secuencia de aminoácidos que se une a BAFF y es idéntica en al menos un 80% a SEQ ID N.º: 10 oun fragmento de SEQ ID N.º: 10;

(e) una secuencia de aminoácidos que se une a BAFF y es idéntica en al menos un 90% a SEQ ID N.º: 10 oun fragmento de SEQ ID N.º: 10;

(f) una secuencia de aminoácidos que se une a BAFF y es idéntica en al menos un 95% a SEQ ID N.º: 10 oun fragmento de SEQ ID N.º: 10; o

(g) SEQ ID N.º: 10 o un fragmento de SEQ ID N.º: 10, modificado por una o más sustituciones deaminoácidos conservativas, en el que la secuencia modificada se une a BAFF.

Polipéptidos y ácidos nucleicos receptores

Campo de la invención

La presente invención proporciona una proteína receptora novedosa. La invención se refiere, en general, a ácidos nucleicos y polipéptidos. La invención se refiere, más particularmente, a ácidos nucleicos que codifican para polipéptidos relacionados con un receptor para BAFF, un factor de activación de células B que pertenece a la familia de factor de necrosis tumoral (“TNF”) , que está asociado con la expresión de células B e inmunoglobulinas. Este receptor puede emplearse en el tratamiento de cánceres, linfomas, enfermedades autoinmunitarias o trastornos genéticos heredados que implican células B.

Antecedentes de la invención

La presente invención se refiere a un receptor novedoso en la familia de TNF. Se ha identificado un receptor novedoso como el receptor de BAFF (“BAFF-R”) .

La familia de TNF consiste en pares de ligandos y sus receptores específicos denominados ligandos de la familia de TNF y receptores de la familia de TNF (Bazzoni y Beutler (1996) N. Engl. J. Med. 334 (26) : 1717-1725) . La familia está implicada en la regulación del sistema inmunitario y posiblemente otros sistemas no inmunológicos. La regulación se realiza a menudo a nivel del “interruptor principal” (“master switch”) de tal manera que la señalización de la familia de TNF puede dar como resultado un gran número de acontecimientos posteriores mejor tipificados mediante TNF. El TNF puede iniciar la respuesta inflamatoria protectora general de un organismo frente a una invasión extraña que implica la presentación alterada de moléculas de adhesión implicadas en el tráfico celular, producción de quemocina para transportar células específicas dentro de compartimientos específicos y el cebado de diversas células efectoras. Como tal, la regulación de estas rutas tiene un potencial clínico.

Se cree que la inducción de diversas respuestas celulares mediadas por tales citocinas de la familia de TNF está iniciada por su unión a receptores celulares específicos. Se han identificado al menos dos receptores de TNF distintos de aproximadamente 55 kDa (TNFR1) y 75 kDa (TNF2) (Hohman et al. (1989) J. Biol. Chem. 264: 1492714934; y Brockhaus et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 3127-3131) . Se han asociado muchos polimorfismos con ambos genes de receptor de TNF. Ambos TNF comparten la estructura típica de receptores de superficie celular incluyendo los dominios extracelular, transmembrana e intracelular. La parte extracelular de TNFR de tipo 1 y tipo 2 contiene un patrón de secuencia de aminoácidos repetitivo de cuatro dominios ricos en cisteína (CDR) . Existe un patrón repetitivo similar de CDR en varias otras proteínas de superficie celular, incluyendo el receptor del factor de crecimiento nervioso p75, el antígeno de células B CD40 entre otros.

Los receptores son potentes herramientas para esclarecer las rutas biológicas debido a su fácil conversión en proteínas de fusión con inmunoglobulina. Estas formas de receptor soluble dimérico son buenos inhibidores de acontecimientos mediados por o bien ligandos unidos a superficie o bien secretados. Mediante la unión a estos ligandos evitan que el ligando interaccione con receptores asociados a células que pueden señalizar. Estas proteínas de fusión receptor-Fc no sólo son útiles en el sentido experimental, sino que se han usado clínicamente de manera satisfactoria en el caso de TNF-R-Fc para tratar enfermedad inflamatoria del intestino, artritis reumatoide y síndrome clínico agudo que acompaña a la administración de OKT3 (Eason et al. (1996) Transplantation 61 (2) : 224228; Feldmann et al. (1996) Int. Arch. Allergy Inmunol. 111 (4) : 362-365; y van Dullemen et al. (1995) Gastroenterol. 109 (1) :129-135) . Puede considerarse que la manipulación de los muchos acontecimientos mediados por la señalización mediante la familia de TNF de receptores tendrá una amplia aplicación en el tratamiento de enfermedades basadas en el sistema inmunitario y también un amplio intervalo de enfermedades humanas que tienen secuelas patológicas debido a la implicación del sistema inmunitario. Una forma soluble de un receptor recientemente descrito, osteoprotegerina, puede bloquear la pérdida de masa ósea y, por tanto, los acontecimientos controlados por la señalización de receptor de la familia de TNF no están necesariamente limitados a la regulación del sistema inmunitario (Simonet et al. (1997) Cell 89 (2) : 309-319) . Los anticuerpos frente al receptor pueden bloquear la unión al ligando y por tanto también pueden tener una aplicación clínica. Tales anticuerpos tienen a menudo vidas muy duraderas y pueden tener ventajas sobre las proteínas de fusión receptor-Fc solubles que tienen semividas en sangre más cortas.

Aunque la inhibición de la ruta mediada por receptor representa la aplicación terapéutica más explotada de estos receptores, originariamente fue la activación de los receptores de TNF la que mostró promesa clínica (Aggarwal y Natarajan (1996) Eur Cytokine Netw. 7 (2) : 93-124) . La activación de los receptores de TNF puede iniciar la muerte celular en la célula diana y por tanto la aplicación a tumores era y todavía es atractiva (Eggermont et al. (1996) Ann. Surg. 224 (6) : 756-765) . El receptor puede activarse o bien mediante administración del ligando, es decir, la ruta natural, o bien algunos anticuerpos que pueden reticularse con el receptor también son potentes agonistas. Los anticuerpos tendrán una ventaja en la oncología ya que pueden permanecer en la sangre durante periodos mayores mientras que los ligandos tienen generalmente duraciones cortas en la sangre. Ya que muchos de estos receptores pueden expresarse más selectivamente en tumores o pueden sólo señalizar la diferenciación o muerte celular en tumores, los anticuerpos agonistas pueden ser buenas armas en el tratamiento del cáncer. Igualmente, muchos

acontecimientos inmunológicos positivos están mediados por receptores de la familia de TNF, por ejemplo las reacciones inflamatorias del huésped, producción de anticuerpos etc. y por tanto los anticuerpos agonistas podrán tener efectos beneficiosos sobre otras aplicaciones no oncológicas.

Paradójicamente, la inhibición de una ruta puede tener un beneficio clínico en el tratamiento de tumores. Por ejemplo, el ligando Fas se expresa por algunos tumores y esta expresión puede conducir a la muerte de linfocitos positivos para Fas facilitando así la capacidad del tumor par evadir al sistema inmunitario. En este caso, la inhibición del sistema Fas podría permitir al sistema inmunitario reaccionar frente al tumor de otras maneras ahora que el acceso es posible (Green y Ware (1997) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94 (12) : 5986-90) .

El ligando de la familia de TNF BAFF, también conocido como TALL-1, THANK, BLyS y zTNF4 (Schneider et al. (1999) J. Exp. Med 189 (11) : 1747-1756; Shu et al. (1999) J. Leukoc. Biol. 65 (5) : 680-683; Mukhopadhyay et al. (1999) J. Biol. Chem. 274 (23) : 15978-15981; Moore et al. (1999) Science 285 (5425) : 260-263; Gross et al. (2000) Nature 404 (6781) : 995-999) potencia la supervivencia de las células B in vitro (Batten et al. (2000) J. Exp. Med. 192 (10) : 1453-1466) y ha surgido como un regulador clave de las poblaciones de células B periféricas in vivo. Los ratones que sobreexpresan BAFF presentan hiperplasia de células B maduras y síntomas de lupus eritematoso sistémico (LES) (Mackay et al. (1999) J. Exp. Med. 190 (11) : 1697-1710; WO00/43032) . Igualmente, algunos pacientes con LES tienen niveles significativamente aumentados de BAFF en su suero (Zhang et al. (2001) J. Inmunol. 166 (1) : 6-10) . Por tanto se ha propuesto que los niveles anómalamente elevados de este ligando pueden contribuir a la patogénesis de enfermedades autoinmunitarias potenciando la supervivencia de células B autorreactivas (Batten et al. (2000) J. Exp. Med. 192 (10) : 1453-1466) .

El BAFF, una proteína de membrana de tipo II, se produce por células de origen mieloide (Schneider et al. (1999) J. Exp. Med. 189 (11) : 1747-1756; Moore et al. (1999) Science 285 (5425) : 260-263) y se expresa o bien sobre la superficie celular o bien en una forma soluble (Schneider et al. (1999) J. Exp. Med. 189 (11) : 1747-1756) . Se ha mostrado previamente que dos miembros de la familia de receptores de TNF, BCMA y TACI, interaccionan con BAFF (Gross et al. (2000) Nature 404: 995-999; Thompson et al. (2000) J. Exp. Med. 192 (1) : 129-135; Xia et al. (2000) J. Exp. Med. 192: 137-143; Marsters et al. (2000) Curr. Biol.... [Seguir leyendo]

1. Un polipéptido BAFF-R (receptor de factor de activación de células B de la familia de TNF) para su uso en el tratamiento de células B tumorigénicas que expresan BAFF y/o BAFF-R, en el que el polipéptido BAFF-R comprende:

(a) SEQ ID N.º: 10;

(b) un fragmento de SEQ ID N.º: 10 que se une a BAFF;

(c) una secuencia de aminoácidos que se une a BAFF y es idéntica en al menos un 70% a SEQ ID N.º: 10 o un fragmento de SEQ ID N.º: 10;

(d) una secuencia de aminoácidos que se une a BAFF y es idéntica en al menos un 80% a SEQ ID N.º: 10 o un fragmento de SEQ ID N.º: 10;

(e) una secuencia de aminoácidos que se une a BAFF y es idéntica en al menos un 90% a SEQ ID N.º: 10 o un fragmento de SEQ ID N.º: 10;

(f) una secuencia de aminoácidos que se une a BAFF y es idéntica en al menos un 95% a SEQ ID N.º: 10 o un fragmento de SEQ ID N.º: 10; o

(g) SEQ ID N.º: 10 o un fragmento de SEQ ID N.º: 10, modificado por una o más sustituciones de aminoácidos conservativas, en el que la secuencia modificada se une a BAFF.

2. El polipéptido BAFF-R de la reivindicación 1, en el que el polipéptido comprende:

(a) los aminoácidos 19-35 de SEQ ID N.º: 5;

(b) los aminoácidos 19-35 de SEQ ID N.º: 5 modificados por una o más sustituciones de aminoácidos conservativas, en el que la secuencia modificada se une a BAFF;

(c) SEQ ID N.º: 13; o

(d) SEQ ID N.º: 13 modificada por una o más sustituciones de aminoácidos conservativas, en la que la secuencia modificada se une a BAFF.

3. El polipéptido BAFF-R de la reivindicación 1, en el que el polipéptido BAFF-R comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en:

(a) SEQ ID N.º: 15;

(b) SEQ ID N.º: 16;

(c) SEQ ID N.º: 17;

(d) SEQ ID N.º: 18;

(e) SEQ ID N.º: 19;

(f) SEQ ID N.º: 20;

(g) SEQ ID N.º: 21;

(h) SEQ ID N.º: 22;

(i) SEQ ID N.º: 23;

(j) SEQ ID N.º: 24;

(k) SEQ ID N.º: 25;

(l) SEQ ID N.º: 26;

(m) SEQ ID N.º: 27;

(n) SEQ ID N.º: 28;

(o) SEQ ID N.º: 29;

(p) SEQ ID N.º: 30;

(q) SEQ ID N.º: 31;

(r) SEQ ID N.º: 32;

(s) un fragmento de una cualquiera de (a) - (r) que se une a BAFF; y

(t) una cualquiera de (a) - (s) modificada por una o más sustituciones de aminoácidos conservativas, en la que el polipéptido modificado se une a BAFF.

4. El polipéptido BAFF-R de la reivindicación 3, en el que el polipéptido BAFF-R comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en:

(a) SEQ ID N.º: 19;

(b) SEQ ID N.º: 22;

(c) SEQ ID N.º: 24;

(d) SEQ ID N.º: 25;

(e) SEQ ID N.º: 26;

(f) SEQ ID N.º: 27; y

(g) un fragmento de una cualquiera de (a) - (f) que se une a BAFF.

5. El polipéptido BAFF-R de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que el polipéptido BAFF-R se une a BAFF y tiene una propensión reducida a la agregación comparado con el polipéptido BAFF-R nativo correspondiente, y comprende:

(a) SEQ ID N.º: 5 o SEQ ID N.º: 10, en las que uno o más aminoácidos no conservados en la región de C 19-L27 del polipéptido BAFF-R nativo se sustituyen por aminoácidos correspondientes de un polipéptido BAFF-R de SEQ ID N.º: 9; o

(b) un fragmento de (a) que se une a BAFF.

6. El polipéptido BAFF-R de la reivindicación 5, en el que las sustituciones se introducen en una o más de las posiciones seleccionadas del grupo que consiste en:

(a) V20, P21, A22 y L27 de SEQ ID N.º: 10;

(b) V41, P42, A43 y L48 de SEQ ID N.º: 12; y

(c) de C19 a L27 de un fragmento de SEQ ID N.º: 10 que comprende los aminoácido.

2. 71.

7. El polipéptido BAFF-R de la reivindicación 6, en el que el polipéptido BAFF-R comprende los aminoácidos 2- 71 de SEQ ID N.º: 10, en el que los aminoácidos alterados se seleccionan del grupo que consiste en

(a) V20N, P21Q, A22T y L27P;

(b) V20N y L27P;

(c) P21Q y L27P;

(d) L27P;

(e) V20N y L27A; y

(f) V20N y L27S.

8. El polipéptido BAFF-R de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que el polipéptido es una proteína

quimérica.

9. El polipéptido BAFF-R de la reivindicación 8, en el que el polipéptido BAFF-R quimérico comprende:

(a) SEQ ID N.º: 12;

(b) un fragmento de SEQ ID N.º: 12 que se une a BAFF;

(c) una secuencia de aminoácidos que se une a BAFF y es idéntica en al menos un 80% a SEQ ID N.º: 12 o un fragmento de SEQ ID N.º: 12; o

(d) SEQ ID N.º:12 o un fragmento de SEQ ID N.º: 12, modificado por una o más sustituciones de aminoácidos conservativas, en el que la secuencia modificada se une a BAFF.

10. El polipéptido BAFF-R quimérico de la reivindicación 9, en el que el polipéptido BAFF-R quimérico comprende los aminoácido.

23. 92 de SEQ ID N.º: 12 y la región Fc de IgG1 humana.

11. El polipéptido BAFF-R de la reivindicación 10, en el que el polipéptido BAFF-R quimérico comprende:

(a) la región Fc de un anticuerpo;

(b) secuencias derivadas de una proteína de inmunoglobulina;

(c) una secuencia señal heteróloga; o

(d) glutatión S-transferasa.

12. El polipéptido BAFF-R de la reivindicación 10, en el que el polipéptido BAFF-R quimérico comprende una región constante de inmunoglobulina y un polipéptido BAFF-R seleccionado del grupo que consiste en:

(a) una cualquiera de SEQ ID N.º: 13, SEQ ID N.º: 14; SEQ ID N.º: 15; SEQ ID N.º: 16; SEQ ID N.º: 17; SEQ ID N.º: 18; SEQ ID N.º: 19; SEQ ID N.º: 20; SEQ ID N.º: 2 1; SEQ ID N.º: 22; SEQ ID N.º: 23; SEQ ID N.º: 24; SEQ ID N.º: 25; SEQ ID N.º: 26; SEQ ID N.º: 27; SEQ ID N.º: 28; SEQ ID N.º: 29; SEQ ID N.º: 30; SEQ ID N.º: 31; y SEQ ID N.º: 32; y

(b) un fragmento de (a) que se une a BAFF.

13. Un polipéptido BAFF-R para usar en el tratamiento de células B tumorigénicas que expresan BAFF y/o BAFF-R, en el que el polipéptido BAFF-R comprende:

(a) SEQ ID N.º: 9;

(b) un fragmento de SEQ ID N.º: 9 que se une a BAFF;

(c) una secuencia de aminoácidos que se une a BAFF y es idéntica en al menos un 70% a SEQ ID N.º: 9 o un fragmento de SEQ ID N.º: 9;

(d) una secuencia de aminoácidos que se une a BAFF y es idéntica en al menos un 80% a SEQ ID N.º: 9 o un fragmento de SEQ ID N.º: 9;

(e) una secuencia de aminoácidos que se une a BAFF y es idéntica en al menos un 90% a SEQ ID N.º: 9 o un fragmento de SEQ ID N.º: 9; o

(f) SEQ ID N.º: 9 o un fragmento de SEQ ID N.º: 9, modificado por una o más sustituciones de aminoácidos conservativas, en el que la secuencia modificada se une a BAFF.

14. El polipéptido BAFF-R de la reivindicación 13, en el que el polipéptido BAFF-R comprende:

(a) SEQ ID N.º: 14;

(b) un fragmento de SEQ ID N.º: 14 que se une a BAFF;

(c) una secuencia de aminoácidos que se une a BAFF y es idéntica en al menos un 70% a SEQ ID N.º: 14 o un fragmento de SEQ ID N.º: 14;

(d) una secuencia de aminoácidos que se une a BAFF y es idéntica en al menos un 80% a SEQ ID N.º: 14 o un fragmento de SEQ ID N.º: 14;

(e) una secuencia de aminoácidos que se une a BAFF y es idéntica en al menos un 90% a SEQ ID N.º: 14 o un fragmento de SEQ ID N.º: 14; o

(f) SEQ ID N.º: 14 o un fragmento de SEQ ID N.º: 14, modificado por una o más sustituciones de aminoácidos conservativas, en el que la secuencia modificada se une a BAFF.

15. Un anticuerpo o un polipéptido que comprende una parte de unión a antígeno de un anticuerpo, para su uso en el tratamiento de células B tumorigénicas que expresan BAFF y/o BAFF-R, en el que el anticuerpo o parte de unión a antígeno de un polipéptido se une específicamente al polipéptido BAFF-R que tiene una secuencia de aminoácido de SEQ ID N.º: 9 o SEQ ID N.º: 10.

16. El anticuerpo o polipéptido de la reivindicación 15, en el que el anticuerpo o parte de unión a antígeno de un polipéptido es uno o más de los siguientes:

(a) monoclonal;

(b) policlonal;

(c) quimérico;

(d) humanizado; 5 (e) un anticuerpo de cadena sencilla;

(f) un fragmento Fab; y

(g) un fragmento F (ab) ’2.

17. El anticuerpo o polipéptido de la reivindicación 15, en el que el anticuerpo o parte de unión a antígeno de un

anticuerpo se une específicamente a un polipéptido según la reivindicación 1 (a) - (g) o la reivindicación 2. 1.

18. El anticuerpo o polipéptido de la reivindicación 15 , en el que el anticuerpo es producido por:

(a) clon de hibridoma nº 2.1, depositado como ATCC nº PTA-3689; o

(b) clon de hibridoma nº 9.1, depositado como ATCC nº PTA-3688.

19. El anticuerpo o polipéptido de una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 17 , en el que el anticuerpo o la parte de unión a antígeno de un anticuerpo bloquea la unión de BAFF a BAFF-R.

20. El anticuerpo o polipéptido de la reivindicación 19, en el que el anticuerpo o la parte de unión a antígeno de un anticuerpo está humanizado.